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文檔簡介

1、歐陽陽理創(chuàng)編歐陽陽理創(chuàng)編2021.03.0436種微生物常用培養(yǎng)基配制時間:2021.03.05創(chuàng)作:歐陽理.牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于細菌培養(yǎng))牛肉膏38,蛋白胨10g,NaCl5g,水1000mL,pH7.47.6。.高氏1號培養(yǎng)基(用于放線菌培養(yǎng))可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl0.5g,K2HPO43H2O0.5g,MgO47H2O0.5g,047H2O0.01g,水1000mL,pH7.47.6。配制時注意:可溶性淀粉要先用冷水調勻后再加入到以上培養(yǎng)基中。.馬丁氏(乂2地口)培養(yǎng)基(用于從土壤中分離真菌)K2HPO41g,Mg047H2O0.5g,蛋白胨5g,葡萄糖10g,1/

2、3000孟加拉紅水溶液100mL,水900mL,自然pH,121濕熱滅菌30min。待培養(yǎng)基融化后冷卻5560時加入鏈霉素(鏈霉素含量為30g/mL)。.馬鈴薯培養(yǎng)基田口人)(用于霉菌或酵母菌培養(yǎng))馬鈴薯(去皮)2008,蔗糖(或葡萄糖)208,水1000mL,配制方法如下:將馬鈴署去皮,切成約2cm2的小塊,放入1500mL的燒杯中煮沸30min,注意用玻棒攪拌以防糊底,然后用雙層紗布過濾,取其濾液加糖,再補足至1000mL,自然pH,霉菌用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。.察氏培養(yǎng)基(蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基)(用于霉菌培養(yǎng))蔗糖30g,NaNO32g,K2HPO41g,MgO47H2O0.5g,KCl0.

3、5g,047H2O0.1g,水1000mL,pH7.07.2。.Hayflik培養(yǎng)基(用于支原體培養(yǎng))牛心消化液(或浸出液)1000mL,蛋白胨10g,NaCl5g,瓊脂15g,pH7.88.0,分裝每瓶70mL,121濕熱滅菌15min,待冷卻至80左右,每70mL中加入馬血清20mL,25%鮮酵母浸出液10mL,15醋酸鉈水溶液2.5mL青霉素仃鉀鹽水溶液20萬單位以上)0.5mL,以上混合后傾注平板。*注意:醋酸鉈是極毒的藥品,需特別注意安全操作。.麥氏(乂丸121丫)培養(yǎng)基(醋酸鈉培養(yǎng)基)葡萄糖0.1g,KCl0.188,酵母膏0.258,醋酸鈉0.82g,瓊脂18,蒸餾水l00mL。

4、溶解后分裝試管,1l5M滅菌15min。.葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基(用于丫衛(wèi)反應和甲基紅試驗)蛋白胨0.58,葡萄糖0.5g,K2HPO40.28,水100mL,pH7.2,1。濕熱滅菌20min。.蛋白胨水培養(yǎng)基(用于吲哚試驗)蛋白胨10g,NaCl58,水1000mL,pH7.27.4,121濕熱滅菌20min。.糖發(fā)酵培養(yǎng)基(用于細菌糖發(fā)酵試驗)蛋白胨0.2g,NaCl0.5g,K2HPO40.028,水100mL,溴麝香草酚藍(1%水溶液)0.3mL,糖類lg。分別稱取蛋白胨和NaCl溶于熱水中,調pH至7.4,再加入溴麝香草酚藍(先用少量95%乙醇溶解后,再加水配成1%水溶液),加入糖類

5、,分裝試管,裝量45cm高,并倒放入一杜氏小管(管口向下,管內充滿培養(yǎng)液)。115濕熱滅菌20min。滅菌時注意適當延長煮沸時間,盡量把冷空氣排盡以使杜氏小管內不殘存氣泡。常用的糖類,如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖等(后兩種糖的用量常加大為1.5%)。.RCM培養(yǎng)基(強化梭菌培養(yǎng)基)、(用于厭氧菌培養(yǎng))酵母膏38,牛肉膏出且,蛋白胨108,可溶性淀粉炮,葡萄糖5g,半胱氨酸鹽酸鹽0.5g,NaCl3g,NaAc38,水l000mL,pH8.5,刃天青3mg/L,。濕熱滅菌30mino12.TYA培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))葡萄糖40g,牛肉膏2g,酵母膏2g,胰蛋白胨(bacto-t

6、ypetone)6g,醋酸銨3g,KH2PO40.5g,gO4H2O0.2g,O4H2O0.01g,水1000mL,pH6.5,121濕熱滅菌30min。.玉米醪培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))玉米粉658,自來水1000mL,混勻,煮10min成糊狀,自然pH,121濕熱滅菌30min。.中性紅培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))葡萄糖40g,胰蛋白胨68,酵母膏28,牛肉膏28,醋酸銨3g,KH2PO458,中性紅0.2g,gO4H2O0.2g,O4H2O0.01g,水1000mL,pH6.2,121濕熱滅菌30min。.CaCO3明膠麥芽汁培養(yǎng)基(用于厭氧菌培養(yǎng))麥芽汁(6波美)1000mL,水1000mL

7、,CaCO310g,明膠10g,pH6.8,121Mt30min。.BCG牛乳培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵)仆)溶液:脫脂乳粉1008,水500mL,加入1.6%溴甲酚綠(B.C.G)乙醇溶液1mL,80滅菌20min。(8)溶液:酵母膏108,水500mL,瓊脂20g,pH6.8,121濕熱滅菌20min。以無菌操作趁熱將仆)、(8)溶液混合均勻后倒平板。.乳酸菌培養(yǎng)基(用于乳酸發(fā)酵)牛肉膏58,酵母膏58,蛋白胨10g,葡萄糖10g,乳糖5g,NaCl5g,水1000mL,pH6.8,121濕熱滅菌20min。.酒精發(fā)酵培養(yǎng)基(用于酒精發(fā)酵)蔗糖10g,gO47H2O0.5g,NH4NO30.5g

8、,20%豆芽汁2mL,KH2PO40.58,水100mL,自然pH。.柯索夫培養(yǎng)基(用于鉤端螺旋體培養(yǎng))優(yōu)質蛋白胨0.4g,NaCl0.7g,KCl0.02g,NaHCO30.01g,CaCl0.02g,KH2PO40.09g,NaH2PO40.48g,蒸餾水500mL,無菌兔血清40mL。制法:除兔血清外的其余各成分混合,加熱溶解,調pH至7.2,121濕熱滅菌20min,待冷卻后,加入無菌兔血清,制成8%血清溶液,然后分裝試管(510mL/管),56水浴滅活lh后備用。.豆芽汁培養(yǎng)基黃豆芽500g,加水1000mL,煮沸l(wèi)h,過濾后補足水分,121濕熱滅菌后存放備用,此即為50%的豆芽汁;

9、用于細菌培養(yǎng):10%豆芽汁200mL,葡萄糖(或蔗糖)50g,水800mL,pH7.27.4。用于霉菌或酵母菌培養(yǎng):10%豆芽汁200mL,#508,水800mL,MpHo用蔗糖,酵母菌用葡萄糖。.LB(LuriaBertani)培養(yǎng)基(細菌培養(yǎng),常在分子生物學中應用)雙蒸餾水950mL,胰蛋白胨10g,NaCl108,酵母提取物(bacto-yeast。*心戊)58,用lmol/LNaOH(約lmL)調節(jié)pH值至7.0,加雙蒸餾水至總體積為1L,121濕熱滅菌30min。含氨芐青霉素LB培養(yǎng)基:待LB培養(yǎng)基滅菌后冷至50左右加入抗生素,至終濃度為80100mg/L。.復紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基(遠藤

10、氏培養(yǎng)基)、(用于水體中大腸菌群測定)蛋白胨10g,牛肉浸膏5g,酵母浸膏5g,瓊脂208,乳糖10g,K2HPO40.5g,無水亞硫酸鈉5g,5%堿性復紅乙醇溶液20mL,蒸餾水1000mL。制作過程:先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到900mL水中,加熱溶解,再加入K2PO4,溶解后補充水至1000mL,調pH至7.27.4。隨后加入乳糖,混勻溶解后,于115濕熱滅菌20min。再稱取亞硫酸鈉至一無菌空試管中,用少許無菌水使其溶解,在水浴中煮沸10min后,立即滴加于20mL5%堿性復紅乙醇溶液中,直至深紅色轉變?yōu)榈奂t色為止。將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態(tài)的培養(yǎng)

11、基中,混勻后立即倒平板,待凝固后存放冰箱備用,若顏色由淡紅變?yōu)樯罴t,則不能再用。.乳糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基(用于水體中大腸菌群測定)蛋白胨1。8,牛肉浸膏58,酵母膏58,乳糖1。8,瓊脂58,蒸餾水1000mL,pH7.27.4,分裝試管(10mL/管),115濕熱滅菌20min。.乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于多管發(fā)酵法檢測水體中大腸菌群)蛋白胨10g,牛肉膏3g,乳糖5g,NaCl5g,蒸餾水1000mL,1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL。調pH至7.2,分裝試管(10mL/管),并放入倒置杜氏小管,115濕熱滅菌20min。.三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液(用于水體中大腸菌群測定)將乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中各營

12、養(yǎng)成分以擴大3倍加入到1000mL水中,制法同上,分裝于放有倒置杜氏小管的試管中,每管5mL,115濕熱滅菌20min。.伊紅美藍培養(yǎng)基(EMB培養(yǎng)基)(用于水體中大腸菌群測定和細菌轉導)蛋白胨108,乳糖10g,K2HPO428,瓊脂25g,2%/伊紅Y(曙紅)水溶液20mL,0.5%美藍(亞甲藍)水溶液l3mL,pH7.4。制作過程:先將蛋白胨、乳糖、K2HPO4和瓊脂混勻,加熱溶解后,調pH至7.4,115濕熱滅菌20min,然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍液,充分混勻,防止產生氣泡。待培養(yǎng)基冷卻到50左右倒平皿。如培養(yǎng)基太熱會產生過多的凝集水,可在平板凝固后倒置存于冰箱備用。在細菌轉導

13、實驗中用半乳糖代替乳糖,其余成分不變。.加倍肉湯培養(yǎng)基(用于細菌轉導)牛肉膏6g,蛋白胨20g,NaCl10g,水1000mL,pH7.47.6。.半固體素瓊脂(用于細菌轉導)瓊脂1g,水100mL,121濕熱滅菌30min。.豆餅斜面培養(yǎng)基(用于產蛋白酶霉菌菌株篩選)豆餅100g加水56倍,煮出濾汁100mL,汁內加入KH2PO40.1%,MgSO40.05%,(NH4)2SO40.05%,可溶性淀粉2%,pH6,瓊脂2%2.5%。.酪素培養(yǎng)基(用于蛋白酶菌株篩選)分別配制A液和B液。A液:稱取Na2HPO47H2O1.07g。干酪素4g,加適量蒸餾水,并加熱溶解。B液:稱取KH2PO40.

14、368,加水溶解。A、B液混合后,加入酪素水解液0.3mL,加瓊脂208,最后用蒸餾水定容至1000mL。酪素水解液的配制:1g酪蛋白溶于堿性緩沖液中,加入1%的枯草芽孢桿菌蛋白酶25mL加水至100mL,30水解l卜。用于配制培養(yǎng)基時,其用量為1000mL,培養(yǎng)基中加入100mL以上水解液。.細菌基本培養(yǎng)基(用于篩選營養(yǎng)缺陷型)Na2HPO47H2O1g,gO47H2O0.2g,葡萄糖5g,NaCl5g,K2HPO4lg,水1000mL,pH7.0,115濕熱滅菌30min。.YEPD培養(yǎng)基(用于酵母原生質體融合)酵母粉10g,蛋白胨20g,葡萄糖20g,蒸餾水1000mL,pH6.0,11

15、5濕熱滅菌20min。.YEPD高滲培養(yǎng)基(用于酵母原生質體融合)在YEPD培養(yǎng)基中加入0.6mol/L的NaCL,3%瓊脂。.YNB基本培養(yǎng)基(用于酵母原生質體融合)0.67%酵母氮堿基(YNB,不含氨基酸,Difco),2%葡萄糖,3%瓊脂,pH6.2。另一配方為:葡萄糖10g(NH4)2SO41g,K2HPO40.125g,KHPO40.875g,KI0.0001g,gSO47H2O0.5g,CaCl22H2O0.lg,NaCl0.1g,維量元素母液lmL,維生素母液lmL(母液均按常規(guī)配制),水1000mL,pH5.86.0。.YNB高滲基本培養(yǎng)基(用于原生質體融合)在YNB基本培養(yǎng)基中加入0.6mol/LNaCl。.酚紅半固體柱狀培養(yǎng)基(用于檢查氧與菌生長的關系)蛋白胨1g,葡萄糖10g,玉米漿1

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