歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法的區(qū)別

1、色譜定量方法一、歸一化法由于組分的量與其峰面積成正比，如果樣品中所有組分都能產(chǎn)生信號，得到相應(yīng)的色譜峰，那么可以用如下歸一化公式計(jì)算各組分的含量。(7.34)若樣品中各組分的校正因子相近，可將校正因子消去，直接用峰面積歸一化進(jìn)行計(jì)算。中國藥典用不加校正因子的面積歸一化法測定藥物中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度。(7.35)歸一化法的 優(yōu)點(diǎn)是：簡便、準(zhǔn)確、定量結(jié)果與進(jìn)樣量重復(fù)性無關(guān) (在色譜柱不超載的范圍內(nèi))、操作條件略有變化時(shí)對結(jié)果影響較小。缺點(diǎn)是：必須所有組分在一個(gè)分析周期內(nèi)都流出色譜柱，而且檢測器對它們都產(chǎn)生信號。不適于微量雜質(zhì)的含量測定。二、外標(biāo)法用待測組分的純品作對照物質(zhì)，以對照物質(zhì)和樣品中待

2、測組分的響應(yīng)信號相比較進(jìn)行定量的方法稱為外標(biāo)法。此法可分為工作曲線法及外標(biāo)一點(diǎn)法等。工作曲線法是用對照物質(zhì)配制一系列濃度的對照品溶液確定工作曲線，求出斜率、截距。在完全相同的條件下，準(zhǔn)確進(jìn)樣與對照品溶液相同體積的樣品溶液，根據(jù)待測組分的信號，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度，或用回歸方程計(jì)算，工作曲線法也可以用外標(biāo)二點(diǎn)法代替。通常截距應(yīng)為零，若不等于零說明存在系統(tǒng)誤差。工作曲線的截距為零時(shí)，可用外標(biāo)一點(diǎn)法(直接比較法 )定量。外標(biāo)一點(diǎn)法是用一種濃度的對照品溶液對比測定樣品溶液中 i 組分的含量。將對照品溶液與樣品溶液在相同條件下多次進(jìn)樣，測得峰面積的平均值，用下式計(jì)算樣品中i 組分的量：WA(W)(A)

3、(7.36)式中W 與 A 分別代表在樣品溶液進(jìn)樣體積中所含i組分的重量及相應(yīng)的峰面積。 (W ) 及(A ) 分別代表在對照品溶液進(jìn)樣體積中含純品 i 組分的重量及相應(yīng)峰面積。外標(biāo)法方法簡便，不需用校正因子，不論樣品中其他組分是否出峰，均可對待測組分定量。但此法的準(zhǔn)確性受進(jìn)樣重復(fù)性和實(shí)驗(yàn)條件穩(wěn)定性的影響。此外，為了降低外標(biāo)一點(diǎn)法的實(shí)驗(yàn)誤差，應(yīng)盡量使配制的對照品溶液的濃度與樣品中組分的濃度相近。三、內(nèi)標(biāo)法選擇樣品中不含有的純物質(zhì)作為對照物質(zhì)加入待測樣品溶液中，以待測組分和對照物質(zhì)的響應(yīng)信號對比，測定待測組分含量的方法稱為內(nèi)標(biāo)法。 “內(nèi)標(biāo) ”的由來是因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn) (對照 ) 物質(zhì)加入到樣品中， 有別

4、于外標(biāo)法。 該對照物質(zhì)稱為內(nèi)標(biāo)物。在一個(gè)分析周期內(nèi)不是所有組分都能流出色譜柱(如有難氣化組分 )，或檢測器不能對每個(gè)組分都產(chǎn)生信號，或只需測定混合物中某幾個(gè)組分的含量時(shí)，可采用內(nèi)標(biāo)法。準(zhǔn)確稱量W 克樣品，再準(zhǔn)確稱量W 克內(nèi)標(biāo)物，加入至樣品中，混勻，進(jìn)樣。測量待測組分i 的峰面積 A 及內(nèi)標(biāo)物的峰面積 A ，則 i 組分在 W 克樣品中所含的重量W ，與內(nèi)標(biāo)物的重量W ，有下述關(guān)系：(7.37)待測組分 i 在樣品中的百分含量C 為：(7.38)對內(nèi)標(biāo)物的要求；內(nèi)標(biāo)物是原樣品中不含有的組分，否則會使峰重疊而無法準(zhǔn)確測量內(nèi)標(biāo)物的峰面積；內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間應(yīng)與待測組分相近，但彼此能完全分離 (R1.5

5、)；內(nèi)標(biāo)物必須是純度合乎要求的純物質(zhì)。內(nèi)標(biāo)法的 優(yōu)點(diǎn)是：在進(jìn)樣量不超限(色譜柱不超載 )的范圍內(nèi)，定量結(jié)果與進(jìn)樣量的重復(fù)性無關(guān)。只要被測組分及內(nèi)標(biāo)物出峰，且分離度合乎要求，就可定量，與其他組分是否出峰無關(guān)。很適用于測定藥物中微量有效成分或雜質(zhì)的含量 。由于雜質(zhì) (或微量組分 )與主要成分含量相差懸殊，無法用歸一化法測定含量，用內(nèi)標(biāo)法則很方便。加一個(gè)與雜質(zhì)量相當(dāng)?shù)膬?nèi)標(biāo)物。加大進(jìn)樣量突出雜質(zhì)峰，測定雜質(zhì)峰與內(nèi)標(biāo)峰面積之比，即可求出雜質(zhì)含量。但樣品配制比較麻煩和內(nèi)標(biāo)物不易找尋是其缺點(diǎn)。想來生活，從來就不是陽春白雪的神話。光陰的陌上，總有風(fēng)自八方來，或許是憂凄，也許是歡喜,無論怎樣，都是歲月最真的饋贈

6、。待到老去的那一日，偶爾有回憶念及了過往，依舊還會有初初的心動(dòng)，流轉(zhuǎn)了眉眼。而那一路迤邐而來的美好，一步一步寫就兩個(gè)梅花小楷 日常。暖陽小窗，無事此靜坐。杯盞光陰，又在指間如風(fēng)輕過，回首，依稀還是那年秋，低低一低眉，卻已是春光葳蕤。光陰荏苒，而流年從來也不曾缺少錯(cuò)亂和猶疑。是否在這樣一個(gè)萬物復(fù)蘇的季節(jié)里，一切的紛擾是非，終究會給出一個(gè)水落石出的答案。輕倚初春的門楣，且把盞清風(fēng)，問心明月，讓來者可來，去者可去，宿命里的擁有，一一欣喜悅納。而我也只需以花香繞肩的美，步履從容的，走過生命里的山山水水。若說，那一程走舊的時(shí)光，已然溫暖了我的眉眼。那么，在明日那個(gè)花滿枝椏的清晨，我依舊愿意輕踮了腳尖，重行在與你初見的陌上，只待，與你折柳重逢。然后，在你溫?zé)岬亩?，把一些前生來世的故事，反?fù)的吟唱。只盼，你在莞爾低眉時(shí)，與我輕輕的相和。所謂素年錦時(shí)，或許就是這樣的一程光陰吧。私心里常想，最好的感覺，莫過于煨一味小眾煙火，暖一世紅塵時(shí)日，對坐心愛之人，行做歡喜之事。即使偶爾有濕潤