紅細胞滲透脆性檢測儀測試報告

1、紅細胞滲透脆性檢測儀測試報告1背景資料人體紅細胞約占血液總體積的40%，紅細胞內(nèi)含量最多的水分和血紅蛋白分別占紅細 胞的65%和32%。紅細胞在低滲鹽溶液中，水分透過細胞膜進入細胞內(nèi)，使紅細胞逐漸脹 大破裂，細胞內(nèi)血紅蛋白溢出即稱為低滲性溶血。紅細胞對低滲液溶血作用的抵抗能力稱為 紅細胞的滲透脆性。地中海貧血、缺鐵性貧血患者紅細胞內(nèi)血紅蛋白生成減少，細胞體積較 小，滲透脆性比正常人明顯減小，因此紅細胞滲透脆性在臨床上常用于地中海貧血、缺鐵性 貧血等小細胞性貧血的輔助診斷指標。2試驗原理將血液樣品與特定滲透壓的低滲液混合，將未溶血紅細胞作為構(gòu)成該混合液濁度的主要 顆粒，選用一種未溶紅細胞對其有較

2、高的吸光度，從紅細胞溶出的游離血紅蛋白等可溶性有 色物質(zhì)對其有較弱吸光度的特定波長光源作為測定光源，利用不透光法對混合液進行比濁分 析，得出AD值（AD值與吸光度成反比），通過對AD值與“金標準”結(jié)果的綜合分析后 確定臨界區(qū)間。對于診斷系統(tǒng)的準確性評價，首先應(yīng)知道受試者的真實情況，即哪些是對照 組，哪些是病例組，劃分它們的標準就是“金標準。盡管“金標準”不需要十全十美，但 是它們應(yīng)比評價的診斷系統(tǒng)更可靠，且與評價的診斷系統(tǒng)無關(guān)。因此在本項目測試方案中， 診斷系統(tǒng)為紅細胞滲透脆性檢測，“金標準”選用基因檢測（即常說的PCR）。3試驗設(shè)計及擬采用的方法（1）預(yù)試驗：先利用舊的血樣做測試，以檢測樣機

3、的各項性能是否符合測試要求。（2）利用樣機對“金標準”確診的地貧血樣與正常血樣進行測試（每個血樣重復(fù)N 3 次）。（3）將測得的AD值綜合“金標準”的結(jié)果進行分析并確定臨界區(qū)間。（允許有可接受 限度的假陽性存在）臨界區(qū)間的確定：在確定的實驗條件（測試步驟、溫度、時間、試劑配制方法、試劑配 制參數(shù)等）下，用我們規(guī)范的操作方法，對“金標準”確診的地貧血樣與正常血樣進行大量 檢測和統(tǒng)計學分析，觀察樣機做出的AD值分布規(guī)律是否符合“金標準”確診的結(jié)果；正常 血AD值分布在一個特定區(qū)間，而地貧血AD值分布在另一個特定區(qū)間，理論上可能存在個 別離散點，但不影響判斷，這兩個區(qū)間的交界處即為臨界區(qū)間。（4）拿

4、回來的血樣盡量當天或下一天測試完畢。（5）初步擬至少測定“金標準”確診的地貧血樣與正常血樣各200個，最好分多批次 取回（因血樣保存期有限，一次取回太多樣本如無法完成測試會造成浪費。（6）血樣要求：抗凝全血（首選肝素抗凝血，其次EDTA-K2或枸櫞酸鈉抗凝血）; 盡量新鮮（理論上要求：2-5保存時間不宜超過24小時、室溫保存不宜超過8小時）； 肉眼可見溶血的舍棄；每個血樣的血量盡量1mlo4實驗材料樣機、臺式電腦、比色皿、未知血樣、1號地貧血樣、2號地貧血樣、3.5g/L NaCl -pbs 緩沖液（pH7.4）、一次性手套、醫(yī)用橡皮膠手套。5測試步驟：（1）將待檢測的采血管放置于樣機試管架中

5、；（2）樣機自動運行，對血樣進行檢測并報告結(jié)果；（3）對檢測結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析。6測試數(shù)據(jù)和曲線（1）未知血樣滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為526nm的發(fā)光二極管做光源時其對應(yīng) 光敏二極管的AD值與時間的變化曲線（圖1）o未知血樣滴入濃度5g/L鹽水中，波長526nm5次重復(fù)測試的值隨時間變化曲線1600155015001450值 1600155015001450值 1400D 1350A 130012501200115011001 36 71 106141 176211 246 281 316351時間（0.2秒）第次2第次4第次圖1由圖1曲線分析可知未知血樣滴入濃度3.5g/L鹽水中，

6、用波長為526nm的發(fā)光二極管 做光源，由于紅細胞破裂引起光敏二極管的AD值慢慢增大，從放進測試架開始T9（=15秒，AD值增大了 110 （由于滴入的血液量存在著一定的差異，所以測量結(jié)果顯示出來的重復(fù)性 不大好）。（2）1號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為526nm的發(fā)光二極管做光源時其 對應(yīng)光敏二極管的AD值與時間的變化曲線（圖2）。1號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，波長526nm，5次重復(fù)測試的AD值隨時間變化曲線1600 1550 1500 1450值 1400D 1350A 1300 1250 1200 1150 11001 36 71 106141 1762112

7、46281316351時間。.2秒）圖2由圖2曲線分析可知1號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為526nm的發(fā)光二 極管做光源，由于紅細胞破裂引起光敏二極管的AD值慢慢增大，從放進測試架開始T9（=16 秒，AD值增大了 52。（3）2號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為526nm的發(fā)光二極管做光源時其 對應(yīng)光敏二極管的AD值與時間的變化曲線（圖3）。2號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，波長526nm, 3次重復(fù)測試的AD值隨時間變化曲線750700650750700650估600值550A 500450400350300廣一 次第 2次 第 次1 35 69 1031

8、37171 205 239273 307341時間（0.2秒）圖3由圖3曲線分析可知2號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為526nm的發(fā)光二 極管做光源，由于紅細胞破裂引起光敏二極管的AD值慢慢增大，從放進測試架開始T9（=13 秒，AD值增大了 65。（4）未知血樣滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為940nm的發(fā)光二極管做光源時其對應(yīng) 光敏二極管的AD值與時間的變化曲線（圖4）。未知血樣滴入濃3.5 g/鹽水中，波940nm5次重復(fù)測試的值隨時間變化曲線2100205020001950值 19002100205020001950值 1900:掙嘲1怎啾愀林麒械*參林W袖禰癡。，綁

9、|屹 I1IA 1850：180017501700165011 31 61 91 121151181211241271301 時間（.2秒）第次第2次第3次第4 次第5 次圖4由圖4曲線分析可知未知血樣滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為940nm的發(fā)光二極管 做光源，由于紅細胞破裂引起光敏二極管的AD值慢慢增大，從放進測試架開始T9(=17秒， AD值增大了 211。1號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為940nm的發(fā)光二極管做光源時其 對應(yīng)光敏二極管的AD值與時間的變化曲線(圖5)。1號地貧血液滴入濃3度g/鹽水中，波長940nm 4次重復(fù)測試的值隨時間變化曲線1950 1900

10、 1850 1800 值 1750A 1700 1650 1600 1550 1500第 次第欠-4次時間第 次第欠-4次圖5由圖5曲線分析可知未知血樣滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為940nm的發(fā)光二極管 做光源，由于紅細胞破裂引起光敏二極管的AD值慢慢增大，從放進測試架開始T9020秒， AD值增大了 100。（6）2號地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為940nm的發(fā)光二極管做光源時進 行了三次重復(fù)測試，其對應(yīng)光敏二極管的AD值與時間的變化曲線（圖6）。2號地貧血液滴入濃鹽水中，波長m2 次重復(fù)測試1值隨時間變化曲線第1次第1次第2次5O5O5O5O5QPU998OO7766

11、55XI- IX:直 I HDA1 3161911211511821124E7B01時間0.2秒）圖6由圖6曲線分析可知地貧血液滴入濃度3.5g/L鹽水中，用波長為940nm的發(fā)光二極管 做光源，由于紅細胞破裂引起光敏二極管的AD值慢慢增大，從放進測試架開始T9020秒， AD值增大了 350。7總結(jié)未知血樣和地貧血樣滴入濃度3.5g/L鹽水中，用526nm和940nm波長的發(fā)光二極管做 光源時其對應(yīng)光敏二極管的AD值與時間的變化量如表1。表17波長血卜、AD 值化526nm940nm未知血樣1102111號地貧血樣521002號地貧血樣65350通過本次實驗可知用波長526nm的發(fā)光二極管做光源時測出未