線栓法大腦中動脈閉塞所致局灶性腦缺血再灌注鼠模型的腦水腫和腦

1、線栓法大腦中動脈閉塞所致局灶性腦缺血再灌注鼠模子的腦水腫和腦趙涓涓柯國平湯俊黃娟黎莉【關(guān)鍵詞】大腦中動脈閉塞；局灶性腦缺血/再灌注；腦水腫；摘要：目的：探究短暫性右側(cè)大腦中動脈閉塞所致局灶性腦缺血再灌注模子的腦梗死比和腦水腫的變革。要領(lǐng)：線栓法制作大鼠腦缺血/再灌注差異時間點模子，行TT染色丈量腦梗死比及干濕稱重法丈量腦含水量。結(jié)果：腦缺血再灌注6h時大鼠腦構(gòu)造即有含水量的增長，并隨著時間的推移呈上升趨勢，且未損傷側(cè)中段腦構(gòu)造含水量升高最為明顯。TT染色在缺血再灌注6h即可見白色梗死灶，梗死比在再灌注72h內(nèi)漸漸增長。結(jié)論：局灶性腦缺血再灌注72h內(nèi)腦梗死比和腦水腫均呈舉行性加重。關(guān)鍵詞：大腦

2、中動脈閉塞；局灶性腦缺血/再灌注；腦水腫；腦梗死比缺血性腦損傷isheiabraininjury是危及患者生命的疾病之一。而腦缺血及再灌注引起的腦水腫hydrephalus是影響病人急性期與亞急性期保存的緊張因素。較大面積的缺血因腦水腫致病變腦構(gòu)造體積急劇增大，可誘發(fā)腦疝。缺血后的腦水腫被以為是加重腦缺血原有病變，導(dǎo)致腦疝及危及患者生命的重要緣故原由13。別的，血腦屏蔽bldbrainbarrier,BBB粉碎也是缺血性中風(fēng)繼發(fā)出血的緣故原由，而這也是患者殞命的緣故原由之一。如今缺血后BBB粉碎引起血管源性腦水腫vasgenibrainedea,VBE及其對缺血病變希望的影響尚未引起充足的器重

3、。本實行旨在進(jìn)一步明白局灶性腦缺血再灌注后腦水腫的時程變革，為臨床診治提供參考資料。1質(zhì)料與要領(lǐng)11實行動物與質(zhì)料SD大鼠56只由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院動物實行中央提供，SPF級，雄性，體重280320g。隨機(jī)分為空缺組n8、假手術(shù)組n8和缺血再灌注組2h、6h、12h、24h、48h每組各8只。尼龍線為上海申丁實業(yè)消費，TT為Ares公司美國消費。別的試劑均為市售。12栓線的制備接納6長3/0單股尼龍線，用暗號筆在雙側(cè)距頭端18、20和22點別離作標(biāo)識表記標(biāo)幟，然后浸入肝素鈉12500單元中浸泡30in后晾干備用。13右側(cè)大腦中動脈閉塞iddleerebralarterylusin,A局灶性腦缺血再

4、灌注改進(jìn)模子的創(chuàng)立接納lnga法，略有改進(jìn)。接納10水合氯醛0.35l/100g腹腔注射麻醉，頸部正中略偏右側(cè)長約2的豎直暗語，沿胸鎖乳突肌內(nèi)側(cè)緣分散出右側(cè)頸總動脈A、頸外動脈EA和頸內(nèi)動脈IA。用6/0絲線結(jié)扎A近心端和EA起始端，在A遠(yuǎn)心端和IA起始端各置6/0絲線備用，用眼科剪在A近心端和遠(yuǎn)心端之間間隔頸總動脈分叉約5處剪一個小口，經(jīng)A插入3/0尼龍線至大腦中動脈起始段，插入深度為19.50.5；術(shù)中維持體溫37.00.5。術(shù)后兩小時用乙醚再次麻醉老鼠后將尼龍線輕輕拔退約1，此時記為再灌注0h。假手術(shù)插線深度為10，余同實行組?？杖苯M不作任那邊置懲罰。術(shù)后單籠豢養(yǎng)，進(jìn)食顆粒食品。剔除術(shù)中

5、出血較多、呼吸困難、取腦時有蛛網(wǎng)膜下腔出血及提早殞命的大鼠。14神經(jīng)成效缺損評分動物缺血2h待清醒后,按ZeaLnga要領(lǐng)評定神經(jīng)成效缺損征象。0分:無任何神經(jīng)成效缺失體征；1分:未損傷側(cè)前肢不克不及舒展；2分:向未損傷側(cè)行走；3分:向未損傷側(cè)轉(zhuǎn)圈成追尾狀；4分:意識停滯,無自主行走4。動物評分在13分之間為造模樂成,不然棄之不消。15紅四氮唑TT染色確定梗死結(jié)果每組取4只大鼠麻醉后敏捷斷頭取腦，從前額極開始行冠狀切片，片厚約2，置入2TT水溶液中，37避光孵育30in后，用眼科鑷分散白色區(qū)(梗死區(qū))和赤色區(qū)(正常區(qū)),別離稱取重量,盤算梗死比。梗死比(%)=白色區(qū)重量/(白色區(qū)重量+赤色區(qū)重

6、量)5。16腦含水量的測定剩余每組大鼠在相應(yīng)時間點麻醉后斷頭取腦，以視交織前2和乳頭體為標(biāo)識表記標(biāo)幟冠狀切為前、中、后三段，每段分為健側(cè)和患側(cè)。萬分之一電子闡發(fā)天平稱取腦濕重,置100烤箱中烘烤至恒重即兩次丈量重量雷同時稱取腦干重,按公式:腦構(gòu)造含水量=(濕重-干重)/濕重,測算出腦構(gòu)造的含水量6。17統(tǒng)計學(xué)處置懲罰組間行單因素方差闡發(fā)，經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件處置懲罰。2結(jié)果21精神病學(xué)表示缺血組全部動物在麻醉清醒后均出現(xiàn)差異程度的偏癱，缺血再灌注組每只大鼠在麻醉清醒后均出現(xiàn)左前肢不克不及舒展，此中15只大鼠出現(xiàn)向左側(cè)行走的病癥，18只大鼠出現(xiàn)向左側(cè)轉(zhuǎn)圈的病癥，均勻評分為2.28分；而假手術(shù)組和空

7、缺組未出現(xiàn)任何神經(jīng)成效缺損病癥，均勻評分為0分。缺血再灌注組與空缺組和假手術(shù)組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05；P0.05。22TT丈量梗死比正常構(gòu)造經(jīng)TT染色呈赤色，而梗死構(gòu)造呈白色?？杖苯M和假手術(shù)組經(jīng)TT染色后均未見有白色梗死灶圖1、2，其梗死比為0；缺血再灌注12h即可見有白色梗死灶形成(圖3)，隨著再灌注的舉行，白色梗死灶地區(qū)漸漸增大(圖4)，梗死灶重要漫衍于損傷側(cè)頂葉皮質(zhì)，部門額葉皮質(zhì)和基底節(jié)區(qū)。缺血再灌注組與空缺組和假手術(shù)組間的梗死比的差異均具有明顯性P0.01；P0.01，再灌注各組間差異均具有明顯性P0.01。其梗死比的時程變革見圖51。表1各組大鼠腦梗死比的比力23腦含水量的

8、測定正常大腦外不雅擺布兩側(cè)對稱，背側(cè)外貌血管呈淡赤色，擺布漫衍大要均一。損傷1d和2d，肉眼可見右側(cè)腦構(gòu)造腫脹顯著，A供血區(qū)構(gòu)造慘白。各組腦構(gòu)造含水量的變革如表2所示，缺血再灌注各組損傷側(cè)腦構(gòu)造含水量顯著高于未損傷側(cè)P0.05，且損傷側(cè)中段腦構(gòu)造水腫最為突出。如圖52我們可以看到各部位腦水腫的時程變革，在腦缺血再灌注2h后腦構(gòu)造含水量開始增長，在再灌注48h時增長比力顯著，并連續(xù)至再灌注72h。再灌注各組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)差異P0.05。表2各組大鼠各腦段差異時段含水量的比力注：*：與空缺組比力，P0.01；#：與前一組比力，P0.05；#：與前一組比力，P0.01。3討論31建模的革新在腦血

9、管疾病的研究中，動物模子是研究缺血性腦損傷必不成少的要領(lǐng)，模子樂成與否關(guān)鍵在于腦堵塞部位與范疇的恒定，重復(fù)性好，而且病理生理歷程盡大概模擬人的發(fā)病歷程。臨床上出現(xiàn)較多的就是頸內(nèi)動脈系的大血管栓塞造成的缺血性腦損傷，此中大腦中動脈栓塞較為多見。因此本實行接納線栓法閉塞大腦中動脈所致的局灶性腦缺血與臨床腦缺血的病理歷程雷同，具有必然的參考代價。本實行接納lnga線栓法復(fù)制大腦中動脈閉塞所致的缺血性腦損傷模子，并有了以下革新：接納略偏右側(cè)暗語。此種暗語更輕易表露頸動脈鞘，且可以制止從氣管旁分散血管，從而可以制止刺激氣管而造成呼吸道排泄物增長，改進(jìn)了術(shù)后保存質(zhì)量。栓線的預(yù)處置懲罰。本實行所用栓線事先經(jīng)

10、肝素浸泡，一者可以軟化栓線，制止因栓線過硬造成插線時刺破血管，二者可以減緩血液在栓線頭端凝固而減輕拔線的困難度。拔線時的二次麻醉。拔線時用乙醚麻醉可以制止大鼠因拔線的痛楚而掙扎從而增長殞命率，而且乙醚麻醉為吸入麻醉，起效快，清醒快，可以制止因水合氯醛二次麻醉不易把握劑量而造成麻醉不測，也可以減短動物的麻醉時間，增長術(shù)后保存質(zhì)量。別的，本實行接納單一性別的大鼠可以制止雌激素的滋擾，由于雌激素對梗死灶的巨細(xì)有影響，同時在整個實行歷程中剔除術(shù)中呼吸困難，出血較多，取腦時有蛛網(wǎng)膜下腔出血和提早殞命的大鼠，可以制止報酬偏向，增長模子的不變性和可重復(fù)性。32腦梗死比腦代謝非?；顫?，對血流和氧的必要量很高，

11、而且險些沒有葡萄糖和氧的儲藏，完全依靠血流供給葡萄糖和氧氣，供給相應(yīng)腦構(gòu)造區(qū)的某支大的動脈一旦閉塞，就會造成局部腦損傷1。通常急性腦梗死病灶由中央壞死區(qū)及四周的缺血半暗帶isheipenubra構(gòu)成。壞死區(qū)由于完全性缺血導(dǎo)致腦細(xì)胞殞命，為不成逆損傷；而缺血半暗帶仍存在側(cè)支循環(huán)，可得到部門血液供給，且神經(jīng)元殞命方法重要為凋亡，尚存在大量可存活的神經(jīng)元，因此對付該區(qū)的腦構(gòu)造，假設(shè)可以或許實時中和由殞命的細(xì)胞開釋的毒性代謝產(chǎn)物和規(guī)復(fù)血供，那么大概得到拯救8，9。在本實行中，由腦梗死比丈量結(jié)果可以看出，再灌注各組腦梗死比與空缺組和假手術(shù)組間均有差異，且腦梗死比在再灌注72h內(nèi)呈漸漸增長的趨勢，提示除了

12、規(guī)復(fù)血供外大概尚必要別的的處置懲罰方法。如今相干研究以為P295、P3、TIP315等的表達(dá)與腦梗死比高度相干，這為缺血性腦損傷產(chǎn)生后早期防范腦梗死體積的增大提供了必然的參考代價。33腦水腫通常腦水腫是指腦構(gòu)造含水量增長所引起的腦體積增大，它有3種范例：細(xì)胞毒性腦水腫、血管源性腦水腫和混和性腦水腫。腦缺血再灌注后的腦水腫是一種細(xì)胞毒性和血管源性腦水腫的混和型。細(xì)胞毒性腦水腫在缺血性腦卒中時馬上產(chǎn)生，是由于急性腦缺血殞命細(xì)胞開釋的細(xì)胞毒性物質(zhì)引起，繼發(fā)于神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，這個階段全腦體積落落。隨著缺血再灌注的舉行，由于種種分子生物學(xué)機(jī)制導(dǎo)致血腦屏蔽bldbrainbarrier,BBB的開放

13、或粉碎，引起血漿身特別滲至細(xì)胞外間隙，出現(xiàn)血管源性腦水腫vasgenibrainedea,VBE。血管源型水腫伴有細(xì)胞外液體堆積，產(chǎn)生在梗死后2448h12。當(dāng)出現(xiàn)大面積的腦水腫可導(dǎo)致顱內(nèi)壓增高，使得血管受壓壅閉、管腔變窄，引起腦循環(huán)性能停滯，形成缺血、水腫和顱內(nèi)高壓惡性循環(huán)，乃至產(chǎn)生腦疝危及生命。如在腦梗死超早期賜與溶栓治療，可以減輕腦損傷，改進(jìn)腦梗死患者的預(yù)后，而溶栓也就是再灌注的歷程，它可以通過氧自由基的開釋、快樂性氨基酸的作用等而引起非缺血性、缺氧性的損傷而加重原有的損傷，加重病情。按照文獻(xiàn)指出13、14，腦構(gòu)造含水量增長的幾多，反響腦水腫的程度。從本實行腦構(gòu)造含水量的變革結(jié)果可以看出

14、，正常鼠腦的含水量約為7454%，在再灌注6h時含水量即有增長(7623%)，隨著再灌注的舉行，含水量漸漸增長，在再灌注12h時明顯增長，再灌注48h72h到達(dá)岑嶺，這說明在72h內(nèi)腦水腫程度都是呈舉行性加重，這與其他結(jié)果也是相雷同的13。別的，水腫部位位于損傷側(cè)，以中段為主，也就是大腦中動脈供給地區(qū)為主，而未損傷側(cè)未出現(xiàn)顯著水腫，因此導(dǎo)致一側(cè)腦容積增大，顱內(nèi)壓力不平衡，假設(shè)損傷側(cè)水腫過于嚴(yán)峻，就會由于壓力差而引發(fā)腦疝，危及患者生命。本實行中，空缺組和假手術(shù)組均未見腦梗死和腦水腫，缺血再灌注組那么在再灌注72h內(nèi)隨著時間的推移梗死比和腦水腫漸漸加劇。當(dāng)缺血連續(xù)時，缺血中央地區(qū)漸漸擴(kuò)大，半暗帶的

15、可逆損傷也漸漸變?yōu)椴怀赡鎿p傷，因此出現(xiàn)了梗死比漸漸增長的結(jié)果。急性腦缺血后殞命細(xì)胞開釋的細(xì)胞毒性物質(zhì)可以引起細(xì)胞毒性腦水腫，因此在缺血的同時殞命細(xì)胞的不竭增長也不竭加重細(xì)胞毒性腦水腫，同時由于種種分子生物學(xué)機(jī)制導(dǎo)致血腦屏蔽bldbrainbarrier,BBB的開放或粉碎，引起血漿身特別滲至細(xì)胞外間隙，出現(xiàn)血管源性腦水腫vasgenibrainedea,VBE，以是腦水腫在72h內(nèi)呈加重趨勢。腦梗死區(qū)血流再通后氧與葡萄糖供給及腦代謝規(guī)復(fù)，腦構(gòu)造損傷理應(yīng)得到規(guī)復(fù)。然而，現(xiàn)實上并非云云，這是由于存在再灌注損傷reperfusindaage。如今以為再灌注損傷的機(jī)制大概為：毛細(xì)血管程度無復(fù)流或不再流

16、征象；細(xì)胞膜與線粒體受損引起鈣超載；缺血后白細(xì)胞粘附引起局部血流情況改變，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變形，毛細(xì)血管局促、痙攣；氧自由基導(dǎo)致的細(xì)胞損傷10，11。腦缺血再灌注后繼發(fā)的腦水腫，會低落腦的灌注壓，損害毛細(xì)血管和增大氧氣從血液彌散到細(xì)胞的間隔，從而進(jìn)一步加重原有的腦缺血改變。缺血半暗帶和再灌注損傷觀點的提出更新了急性腦梗死的臨床治療不雅念，救濟(jì)缺血半暗帶的關(guān)鍵是超早期溶栓治療，減輕再灌注損傷焦點是積極接納腦庇護(hù)治療。本實行僅僅模擬了大腦中動脈閉塞造成局灶性腦堵塞后的腦梗死比及腦水腫的變革，而對其影響因素的研究將在日后的實行事情中作進(jìn)一步探究。參考文獻(xiàn)2DepseyRJ,Ry,eyerKL,etal.Inde2thain2ediatediprveentfllingiddleerebralarterylusininats,Effetsfanesthesia.JNeursurg,1995,62(6):8748815劉華，廖維靖，楊萬同，等缺血性腦損傷基質(zhì)金屬卵白酶29的表達(dá)與梗死面積研究中國病愈理論與理論，2022，910：60060111黃海威，黃如訓(xùn)，蘇鎮(zhèn)培磁共振顯像對缺血性腦水腫的動態(tài)試驗研究中華神經(jīng)精力科雜志，2000，264：21221412楊偉中缺血性腦卒中并發(fā)癥的治療中國中醫(yī)藥報，2022，1，813enzieaS