赤靈芝提取物對小鼠免疫功能系統(tǒng)的影響

1、赤靈芝提取物對小鼠免疫功能系統(tǒng)的影響【摘要】目的旨在赤靈芝提取物對細(xì)胞、體液及非特異性免疫功能的影響。方法以520、260g/kg赤靈芝提取物給昆明種雄性小鼠灌胃15d，分別進(jìn)展nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、足跖增厚法測定小鼠遲發(fā)型變態(tài)反響、半數(shù)溶血值(H50)測定、抗體形成細(xì)胞(AF)檢測、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞才能和網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬碳廓清功能測定。結(jié)果赤靈芝提取物可明顯增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化才能(P0.001，P0.01,P0.05)及體液免疫才能(P0.01,P0.05);明顯抑制由SRB引起的小鼠DTH反響(P0.01,P0.05);增強(qiáng)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能(P0.001)

2、;對碳廓清無明顯影響。結(jié)論赤靈芝提取物具有免疫調(diào)節(jié)作用，可明顯增強(qiáng)小鼠脾淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化才能及體液免疫才能。【關(guān)鍵詞】赤靈芝水提取物;赤靈芝醇提取物;體液免疫;細(xì)胞免疫靈芝多糖是靈芝中的主要免疫藥另學(xué)活性成分，其作用主要表如今：對正常小鼠的免疫功能具有增強(qiáng)作用;增強(qiáng)人臍血LAK細(xì)胞活性，且呈劑量依賴關(guān)系;對免疫抑制藥物(如氫化可的松、環(huán)孢霉素A、環(huán)磷酰胺等)和抗腫瘤藥物(如氟尿嘧啶、絲裂霉素和阿糖胞苷等)及應(yīng)激、衰老等因素所致小鼠免疫功能低下具有明顯的恢復(fù)作用13。本試驗(yàn)擬赤靈芝提取物對小鼠免疫系統(tǒng)的影響，為開發(fā)和利用赤靈芝的藥用和保健價(jià)值提供科學(xué)根據(jù)。1材料與方法1.2試劑赤靈芝水提取物和醇提

3、取物均為25g生藥/g粉。RPI1640完全培養(yǎng)液(GIB產(chǎn)品)，小牛血清，刀豆蛋白(nA)液均為Siga產(chǎn)品，綿羊紅細(xì)胞(SRB)，豚鼠血清。1.3nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)(TT法)4末次給藥后1h在超凈臺內(nèi)，無菌取小鼠脾于無菌Hanks液培養(yǎng)皿內(nèi)，用毛玻璃片磨碎，過濾細(xì)胞懸液，洗滌一遍，1000r/in，離心5in，用2lRPI1640培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，取10l細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞濃度至2106/l，參加24孔培養(yǎng)板，每孔1l/孔。實(shí)驗(yàn)孔參加nA20l，終濃度5g/l。37，5%2孵箱內(nèi)培養(yǎng)68h，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。每孔吸去培養(yǎng)上清液0.7l，再加不含血清的RPI1640培養(yǎng)液，

4、參加TT溶液50l/孔(5g/1)，繼續(xù)孵育4h，參加酸性異丙醇溶液1l/孔，吹打混合均勻，待顆粒結(jié)晶完全溶解。將溶解液分加到96孔板中，200l/孔，每個(gè)樣本作3復(fù)孔，酶標(biāo)儀上讀出D570n值。1.4足跖增厚法測定小鼠遲發(fā)型變態(tài)反響(DTH)4于給藥后11d對小鼠進(jìn)展致敏，每只小鼠腹腔注射2%綿羊SRB0.2l/只進(jìn)展免疫，免疫4d后，測量左后足跖部厚度，然后，在測量部位皮下注射20%(V/V)SPR20l/只，注射后于24、48h分別測量左右足跖部厚度，同一部位測量3次取平均值。1.5半數(shù)溶血值(H50)測定于給藥11d對小鼠進(jìn)展腹腔注2%(V/V)SRB0.2l/只進(jìn)展免疫，免疫4d后處

5、死小鼠取血離心(2000r/in，10in)，搜集血清并用SA液稀釋500倍，取1l稀釋血清參加10%(V/V)SRB05l，補(bǔ)體10l進(jìn)展血清溶血素測定，記錄羊紅血球的半數(shù)溶血值(H50)。1.6抗體形成細(xì)胞(AF)檢測免疫方法同1.5，細(xì)胞懸液獲得方法同1.3，調(diào)細(xì)胞濃度至5106細(xì)胞/l?？瞻邷y定：將1%瓊脂糖融化后，45水浴保溫，與等量的2倍濃度的Hanks液混合，分裝小試管，1l/管。再向管內(nèi)加100l10%的SRB和40l脾細(xì)胞懸液，迅速混勻，傾注于底層凝膠外表，制成頂層凝膠。待瓊脂凝固后，置37放置11.5h;再加10倍稀釋的補(bǔ)體溶液1l，37放置11.5h后，計(jì)數(shù)空斑形成數(shù)，用

6、空斑數(shù)/106脾細(xì)胞來表示，受試組顯著高于對照組的空斑數(shù)，即可判斷該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。1.7小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞才能測定末次給藥后30in，每鼠ip20%雞紅細(xì)胞溶液1l/只，注射后30in脫頸椎處死小鼠，經(jīng)腹腔注入生理鹽水2l，輕輕揉動每鼠腹部1in，然后用吸管汲取腹腔液體ll，均勻涂于2片載玻片上，放入墊有溫紗布的搪瓷盆內(nèi)，37水溫，30in后，生理鹽水漂洗，11丙酮甲醛液固定4%(V/V)Giesa一磷酸緩沖液染色3in，鏡下計(jì)數(shù)吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)和計(jì)算吞噬百分率及吞噬指數(shù);吞噬指數(shù)=(被吞噬雞紅細(xì)胞數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞)/2，吞噬百分率=(吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個(gè)

7、巨噬細(xì)胞)100。1.8小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬碳廓清功能測定末次給藥后30in后，尾靜脈注射印度墨汁+生理鹽水(21)0.1l/10g，注射后2、15in與眼靜脈竇取血20l，置于2l0.1%Na23溶液中，7230分光光度計(jì)640n處比色，實(shí)驗(yàn)取血后處死動，剖取肝臟及脾臟稱重，按以下公式計(jì)算吞噬指數(shù)K和校正廓清指數(shù)A。K=lgD1-lgD2/t2-t1，A=動物體重/(肝重+脾重)3k。1.9統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有數(shù)據(jù)用xs表示，采用SPSS11.0進(jìn)展t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1各組小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化才能比擬倒置顯微鏡下可見淋巴細(xì)胞存在，表現(xiàn)為體積增大，核膜明晰，核染色體疏松，核內(nèi)見明顯核仁24個(gè)，胞漿豐富

8、，有偽足樣突出。與正常對照組(0.4130.062)比擬，赤靈芝水提取物低和高劑量組及赤靈芝醇提取物低和高劑量組D值分別為1.2760.133、1.5130.129、0.7720.085和1.0701.044(均P0.001)，說明赤靈芝提取物明顯增強(qiáng)nA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化才能。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2各組小鼠SRB誘導(dǎo)24和48h的小鼠DTH程度比擬表1可見，與正常對照組比擬，赤靈芝提取物各組明顯抑制由SRB引起的DTH反響(P0.05及P0.01)。表1各組小鼠足跖部厚度比擬與正常對照組比擬：1)P0.05，2)P0.012.3各組小鼠H50測定結(jié)果比擬與正常對照組H50(163

9、.125.25)比擬，赤靈芝水提取物低(215.039.32)和高劑量組(188.9719.23)、赤靈芝醇提取物低(200.4115.11)和高劑量組(202.7573.12)H50值均明顯進(jìn)步(P0.05及P0.01)。2.4各組小鼠空斑形成數(shù)比擬與正常對照組空斑形成數(shù)(15.07.56)比擬，赤靈芝水提取物低(70.021.51)和高劑量組(70.019.15)、赤靈芝醇提取物低(58.524.32)和高劑量組(40.014.14)均明顯進(jìn)步(P0.001)。2.5各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能的測定比擬由表2可見，御惠牌赤靈芝精華各組均非常明顯增加腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的才能(P0.001)。表2各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)和吞噬百分率比與正常對照組比擬：1)P0.0012.6各組小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的程度比擬由表3可見，赤靈芝提取物各組與正常對照組比擬小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能均無明顯差異(P0.05)。表3各組小鼠單核巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響3討論本實(shí)驗(yàn)證明，赤靈芝提取物可直接刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化才能，增加抗體形成，表現(xiàn)為進(jìn)步H50及增加抗體形成的細(xì)胞數(shù)目，