實驗三莖尖培養(yǎng)技術

1、關于實驗三莖尖培養(yǎng)技術第1頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三一、概念和意義1.概念莖尖培養(yǎng)（shoot tip culture）的含義比較廣，包括小到10100m的莖尖分生組織的培養(yǎng)，大到幾十毫米的莖尖或更大的芽的培養(yǎng)。一般培養(yǎng)材料體積?。ㄇo尖分生組織），成苗較難，成苗所需時間較長；而培養(yǎng)材料體積大，成苗速度快，但污染率也較高。第2頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三種苗離體快速繁殖2. 意義莖尖培養(yǎng)在園藝植物的組織培養(yǎng)中應用廣泛，主要用于種苗快速繁殖、脫毒苗的生產、品種改良和基礎理論研究。第3頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三莖

2、尖分生組織培養(yǎng)脫除病毒第4頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三二、實驗目的：學習并掌握植物莖尖離體培養(yǎng)的原理和方法；學習并掌握無菌操作技術。第5頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三三、實驗原理： 以莖尖為外植體,經過表面滅菌處理后，接種于誘導培養(yǎng)基上，促進莖尖萌發(fā)成苗，獲得無菌系，并可在適當濃度的植物激素和生長調節(jié)劑的作用下進一步增殖和生根，獲得完整植株。 莖尖培養(yǎng)包括起始培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)和生根培養(yǎng)及馴化移栽等階段，不同培養(yǎng)階段要求不同的植物激素和生長調節(jié)劑條件。增殖培養(yǎng)生根培養(yǎng)馴化移栽起始培養(yǎng)第6頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三四

3、、實驗材料：1. 植物材料：大蒜和不結球白菜；2. 培養(yǎng)基：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖 3%+ 瓊脂6.5 g/L。3. 試劑：75%的乙醇，1%有效氯次氯酸鈉、無菌水。4. 器材：酒精燈、培養(yǎng)皿、滅菌濾紙、鑷子、解剖刀等。第7頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三五、實驗步驟：外植體的準備：大蒜：剝去蒜瓣的外皮。不結球白菜：去除老化葉片，保留1-2片幼葉的葉柄；洗凈后在流水中沖洗10-20分鐘。2. 表面滅菌：在超凈工作臺上將外植體材料放到滅過菌的罐頭瓶內，加入75%的乙醇處理不超過30秒，然后倒出，加入1%的次氯酸鈉滅菌（小白菜10mi

4、n，大蒜處理20min），處理后用無菌水洗4-5次。第8頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三3. 莖尖分離及接種：用鑷子和解剖刀在滅菌濾紙上分離莖尖，用鑷子將分離的莖尖組織接種到培養(yǎng)基上，蓋好瓶蓋，貼好標簽。第9頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三不結球白菜莖尖第10頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三 大蒜莖尖培養(yǎng) 不結球白菜莖尖培養(yǎng)4. 接種材料的培養(yǎng)：接種后的材料放到培養(yǎng)室，25，12h光照/12h黑暗條件下培養(yǎng)，3-4天可以觀察到莖尖開始萌發(fā)生長。第11頁，共13頁，2022年，5月20日，22點9分，星期三六、無菌操作注意事項：1.保持接種室整潔衛(wèi)生，穿上鞋套。2.超凈臺的準備：超凈工作臺使用前用75%的乙醇擦拭。打開紫外燈照射20-30分鐘，然后關閉紫外燈 ，打開鼓風機20分鐘左右排出臭氧等氣體。3. 接種前用75%乙醇擦拭手和手臂，以減少污染。待手上酒精干后，點燃酒精燈，再開始操作。4.接種未滅菌用品用酒精棉擦拭，用品擺放合理。5.接種過程中工具應充分灼燒，鑷子、解剖刀及瓶口要在酒精燈上灼燒。每切完一個外植體，每接種完一瓶外植體，鑷子、解剖刀都在酒精燈上燒一次。6.實驗完成后，整理超凈臺，