化學(xué)發(fā)光試劑研發(fā)流程

1、化學(xué)發(fā)光試劑研發(fā)流程依稀記得 08 年正式開始蛋白診斷試劑盒的研發(fā)，說實話，那時候更多的是彷徨、無助，勝于新鮮感。最大的原因在于實驗設(shè)計經(jīng)驗基本為零，技術(shù)開發(fā)能力基本為零。或許后續(xù)的各位研友們有自己的理論知識和所謂的經(jīng)驗之道，但是，本人在此善意提醒一句，除非您已經(jīng)真的從實踐中形成了一套自有的研發(fā)思路，要么您擁有堅強的后盾導(dǎo)師，否則，請務(wù)必沉浸下來，好好的理清楚自己的思路。那么請靜心做好以下幾個準備：物質(zhì)分子結(jié)構(gòu)/空間結(jié)構(gòu)，物理/化學(xué)性質(zhì)；該標志物的基本性能指標等信息；準備好以上資料并逐一理解之后，下面就開始研發(fā)工藝思路的設(shè)計。 3HCG（該標志物為目前很成熟的一種產(chǎn)品，技術(shù)門檻較低，抗體原料也

2、很容易獲得），在您已經(jīng)準備好我所說的 1.和 2.之后已經(jīng)知道該標志物為一個大分子物質(zhì)， 按照免疫學(xué)診斷方法學(xué)構(gòu)造劃分應(yīng)使用雙抗體夾心法，那么下一步我們就知道了， 先去市場找該標志物的抗體原料，最好的是有原料商給您提供配對好的抗體對，為什么這么說？因為對于你所找到的抗體，若是單個的原料，下一步您就需要多一步驟，即抗體配對，特別是對于新入行的兄弟們，這塊工作對于操作手法及配對方案的設(shè)計可能相對較為稚嫩，所以最好的就是讓原料商幫你把這部分工作做好，也減少了您的研發(fā)周期，另外，從原料后期采購來說，對于原料商，您購買的品種和數(shù)量越多，給予您的折扣也相對理想，進一步可以降低試劑盒開發(fā)成本。當然，事無全是

3、，具體情況還需具體分析。特此提醒：有一些新標志物產(chǎn)品特別是在剛上市之時，其實原料提供商真的很少，這個時候您就需要發(fā)揮極限能力，利用一切可利用資源，進行全球搜捕吧，哈哈，或許運氣好可以找到，對此尋求到的原料也很少有配對原料提供，若此，那只能遺憾的跟您說，您準備著手做下原材料配對工作吧！ 原料配對里面涉及的內(nèi)容太多，在此就不多敘說了，若有興趣，咱們私下可慢聊。在此提醒各位研友，尋找的原料不能只有一家，至少需要找到 3 家以上，因為后面有一項很重要的工作需要你做，即：原材料篩選。最終獲得的適合您技術(shù)平臺的原料最好是為 2 家，一家以注冊申報為主，另一家作為您產(chǎn)品后期的備份原料供應(yīng)，這樣對于后期上市產(chǎn)

4、品供應(yīng)的穩(wěn)定性有很大幫助。畢竟現(xiàn)在企業(yè)的競爭都很激烈，說不得等您產(chǎn)品開發(fā)出來再回頭去找該原料商發(fā)現(xiàn)已經(jīng)不存在，那就糗大了。注意一點：在尋找原料時候必須是原料商提供的原料信息中原料適用平臺里包含或者接近您的技術(shù)平臺，這一點至關(guān)重要！下幾步：捕獲抗體的包被（包被的介質(zhì)如：ELISA）、識別抗體的標記（標記手法如：HRP/ALP 酶促、HRP/ALP 酶發(fā)光、吖啶酯/SA 等化學(xué)發(fā)光物質(zhì)、熒光物質(zhì)等）、標準物質(zhì)/質(zhì)控品等購買/制備等，我說的這些是最基本的平臺所涉及的。甚至有些平臺涉及到放大系統(tǒng)（較多）步制定好自己的平臺流程，對應(yīng)的流程里涉及的試劑/物質(zhì)，相應(yīng)的去包被/標記/ 處理等。1ug/ml）3

5、ug/ml（ELISA），這些是需要結(jié)合你1mg/ml（POCT），雖然濃度高，但單檢測使用量少。這里我就不多說了。無數(shù)值（反應(yīng)孔值與陰性孔值一致）或者全部高值（陰性孔與反應(yīng)孔的數(shù)值一致都 為很高的值），諸如此類問題的原因排查：無數(shù)值，考慮所使用的 buffer 體系是否合理，孵育時間，洗板操作等等，導(dǎo)至蛋白在操作過程中丟失，還有一個問題需要重視，就是位阻問題，排查下使用的封閉系統(tǒng)是否存在導(dǎo)至位阻原因的大分子物質(zhì)存在？另外在封閉體系和包被緩沖液中是否存在導(dǎo)至蛋白物質(zhì)與反應(yīng)介質(zhì)去離子化物質(zhì)？各反應(yīng)體系緩沖液的 pH 值也是一個很重要的環(huán)節(jié)；高值，考慮的幾大方面包括：操作是否存在交叉污染？比如洗滌？比如加樣使用槍頭未更換？是否存在洗滌操作不徹底？是否存在洗滌液成分問題？等等。在您基本摸索出反應(yīng)濃度成梯度時（梯度計算可一次項直線計算、也可擬合各 種曲線如：二次項、雙對數(shù)等等，但是每種不同線性有對應(yīng)的數(shù)據(jù)指標，可查閱相 關(guān)資料），每一步驟，每一組份，去進一步精化操作，最終獲得一個能夠讓您得到最優(yōu)檢測結(jié) 但是新手們，只需要記住一個準則：在確保自己操作手法的盡量標準外，每一環(huán)節(jié) 做到大膽假設(shè)，小心