食品中氯丙醇含量的測定（食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)）

1、 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中氯丙醇含量的測定范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中氯丙醇和氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中氯丙醇含量和氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）總含量的測定。第一法 食品中3-氯-1， 2-丙二醇含量的測定同位素稀釋氣相色譜質(zhì)譜法原理本標(biāo)準(zhǔn)采用同位素稀釋技術(shù)，以d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCPD）為內(nèi)標(biāo)。試樣中加入內(nèi)標(biāo)溶液，以硅藻土（ExtrelutTM 20）為吸附劑，進(jìn)行基質(zhì)固相分散萃取，用正己烷-乙醚（9：1，體積比）淋洗去除非極性脂質(zhì)組分，用乙醚洗脫3-氯-1，2-丙二醇（3-MCPD），以七氟丁?；溥蜻M(jìn)行衍生化反應(yīng)。采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測定，

2、以選擇離子監(jiān)測（SIM）模式進(jìn)行質(zhì)譜掃描，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。 試劑乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。無水乙醚（C4H10O）：使用前需于60C重蒸。氯化鈉（NaCl）。無水硫酸鈉（Na2SO4）：使用前于120C烘烤4 小時(shí)。七氟丁?；溥颍–7H3F7N2O，CAS號(hào)：32477-35-3，縮寫為HFBI）。試劑的配制氯化鈉溶液（200 g/L）：稱取氯化鈉20 g，用水溶解并加水80 mL，混勻，使氯化鈉充分溶解。正己烷-乙醚溶液（9：1，體積比）：將450 mL正己烷與50 mL

3、無水乙醚混合均勻。標(biāo)準(zhǔn)品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H7ClO2）：CAS號(hào)編號(hào)96-24-2，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5H2ClO2）：純度98%。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備標(biāo)準(zhǔn)溶液配制好后均需轉(zhuǎn)移至密閉性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C貯存。3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000 mg/L）：準(zhǔn)確稱取3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.01 mg）于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，并定容至刻度，混勻。保存期為2年。3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)中間液（10 mg/L）：準(zhǔn)確移取3-MCPD儲(chǔ)備溶液0.5 mL于50 mL容量瓶中，用正己

4、烷稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)工作液（1 mg/L）：準(zhǔn)確移取3-MCPD中間溶液0.5 mL于50 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為6個(gè)月。d5-3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）：準(zhǔn)確移取內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品d5-3-MCPD儲(chǔ)備溶液0.5 mL于50 mL棕色容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。3-MCPD系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃試管中，分別加入d5-3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2 mL，配

5、制成含3-MCPD質(zhì)量分別10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和d5-3-MCPD質(zhì)量為200 ng的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。臨用現(xiàn)配。材料ExtrelutTM 20硅藻土，或相當(dāng)?shù)墓柙逋痢x器和設(shè)備氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）。電子天平：感量為1 mg和0.01mg。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。恒溫箱或其他恒溫加熱器。渦漩混合器。氣密針，1.0 mL。玻璃層析柱：柱長 40 cm，柱內(nèi)徑 2 cm。分析步驟試樣制備液態(tài)試樣搖勻后直接進(jìn)行提取，基質(zhì)均勻的半固態(tài)試樣和粉狀固態(tài)直接進(jìn)行提取， 其他試樣需勻漿后進(jìn)行提取。試樣提取液態(tài)試樣稱取試樣4 g（精確到0.001g）于

6、50 mL燒杯中，加入d5-3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）至8 g，超聲混勻5 min，待凈化。湯料、固體與半固體植物水解蛋白等稱取試樣4 g（精確到0.01g）于50 mL燒杯中，加入d5-3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）6 g，超聲混勻5 min，待凈化。香腸、奶酪、面粉、面包、咖啡等稱取試樣4 g（精確到0.001g）于50 mL燒杯中，加入d5-3-MCPD標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）10 g，超聲提取10 min，以5000 r/min離心1

7、0 min，移取上清液，待凈化。試樣凈化取ExtrelutTM20硅藻土5 g，加入制備好的提取液，充分混勻。另取5 g ExtrelutTM20硅藻土裝入層析柱中（層析柱下端填以玻璃棉）。將提取液與硅藻土的混合物裝入層析柱中，上層加1 cm高度的無水硫酸鈉。將10 mL無水乙醚倒入玻璃層析柱中，清洗整個(gè)層析柱，棄去 流出液。放置10 min后，用正己烷-乙醚溶液（9：1，體積比）40 mL淋洗非極性組分，并棄去。用150 mL乙醚洗脫3-MCPD（流速約為8 mL/min），收集流出液，加入15 g無水硫酸鈉，混勻以吸收水分，放置10 min后過濾。濾液于35 C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用2 mL

8、正己烷溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至密閉性好的透明具塞玻璃試管中。衍生化用氣密針向凈化液中加入七氟丁酰基咪唑0.04 mL，立即密塞，渦旋混合30 s，于70 C保溫20 min。取出放至室溫，加入2 mL氯化鈉溶液（200 g/L），旋渦混合30 s，靜置使水相和正己烷相分層。取出正己烷相，加入約0.3 g無水硫酸鈉進(jìn)行干燥，將溶液轉(zhuǎn)移至氣相進(jìn)樣小瓶中，供GC-MS測定。同時(shí)做3-MCPD系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的衍生化?？瞻自嚇尤芤褐苽浞Q取與試樣相同質(zhì)量的氯化鈉溶液（200 g/L）或空白基質(zhì)樣品于50 mL燒杯中，以下步驟按5.2、5.3和5.4與試樣同時(shí)處理。以考察系統(tǒng)空白。儀器參考條件氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀

9、參考條件色譜柱：DB-5MS毛細(xì)管色譜柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。載氣：氦氣；載氣流速：1 mL /min。 進(jìn)樣口溫度：250 C，進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；不分流時(shí)間：0.5 min；進(jìn)樣體積：1 L。程序升溫：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min 。質(zhì)譜參考條件電離方式：電子轟擊源（EI）；電離能量：70 eV。檢測方式：選擇反應(yīng)離子檢測（SIM）。溶劑延遲時(shí)間：5 min。離子源溫度: 250 C；傳輸線溫度：280 C；四級(jí)桿溫度：150 C。電子倍增器電壓：1000 eV。監(jiān)測離子：3-MCPD

10、定量離子m/z 253，定性離子m/z 275、289、291；d5-3-MCPD定量離子m/z 257，定性離子m/z 278、294、296。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將3-MCPD系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液經(jīng)衍生化處理后的溶液分別注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中進(jìn)行測定，得到3-MCPD和d5-3-MCPD的色譜峰峰面積，以3-MCPD系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中的3-MCPD和d5-3-MCPD的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，以3-MCPD和d5-3-MCPD的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中進(jìn)行測定，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中3-MCPD的含量，平行測定次數(shù)不少于兩次。6 分析

11、結(jié)果的表述試樣中3-MCPD含量按公式（1）計(jì)算： （1）式中：X 試樣中3-MCPD的含量，單位為微克每千克（g/kg）或微克每升（g/L）；A 試樣溶液中3-MCPD色譜峰與d5-3-MCPD色譜峰的峰面積比值對(duì)應(yīng)的3-MCPD的質(zhì)量，單位為納克（ng）； F 試樣稀釋倍數(shù)；M 試樣的取樣量，單位為克（g）。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測XX果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測XX果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20 %。其他按照本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的取樣量，3-氯-1，2-丙二醇的檢出限為5 g/kg。第二法 食品中氯丙醇多組分含量的測定同位素稀釋氣相色譜

12、質(zhì)譜法原理本標(biāo)準(zhǔn)采用同位素稀釋技術(shù)，以d5-3-氯-1， 2-丙二醇（d5-3-MCPD）、d5-2-氯-1， 3-丙二醇（d5-2-MCPD）、d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1，3-DCP）和 d5-2， 3-二氯-2-丙醇（d5-2，3-DCP）為內(nèi)標(biāo)。試樣中加入混合內(nèi)標(biāo)溶液，以氯化鈉溶液提取，采用硅藻土固相萃取小柱凈化，用正己烷淋洗去除非極性組分雜質(zhì)，用乙酸乙酯醚洗脫氯丙醇。洗脫液濃縮后用七氟丁?；溥蜻M(jìn)行衍生化反應(yīng)。以氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測定，采用選擇離子監(jiān)測（SIM）模式進(jìn)行質(zhì)譜掃描，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水

13、。試劑乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。氯化鈉（NaCl）。無水硫酸鈉（Na2SO4）。七氟丁酰基咪唑（C7H3F7N2O，CAS號(hào)：32477-35-3，縮寫為HFBI）。試劑的配制氯化鈉溶液（200 g/L）：稱取氯化鈉20 g，加入80 mL水，攪拌使氯化鈉充分溶解。標(biāo)準(zhǔn)品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H7ClO2）：CAS編號(hào)96-24-2，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5H2ClO2）：純度98%。2-氯-1，3-丙二醇（2-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H7ClO2）：CAS編號(hào)497-04-1

14、，純度98%。d5-2-氯-1，3-丙二醇（d5-2-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5H2ClO2）：純度98%。1，3-二氯-2-丙醇（1，3-DCP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H6Cl2O）：CAS編號(hào)96-23-1，純度98%。d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1， 3-DCP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5HCl2O）：純度98%。2，3-二氯-1-丙醇（2，3-DCP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H6Cl2O）：CAS號(hào)編號(hào)616-23-9，純度98%。d5-2，3-二氯-1-丙醇（d5-2，3-DCP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5HCl2O）：純度97%。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制好后均需轉(zhuǎn)移至密閉性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C貯

15、存。氯丙醇及氘代氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000 mg/L）：分別準(zhǔn)確稱取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP、2，3-DCP、d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.01 mg）于8個(gè)10 mL容量瓶中，分別用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混勻。保存期為2年。氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)中間液（10 mg/L）：分別準(zhǔn)確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻。保存期為1年。氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（1 mg/L）：準(zhǔn)確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3

16、-DCP和2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)中間液各1 mL于10 mL容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為6個(gè)月。氯丙醇混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）：準(zhǔn)確移取d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷溶液稀釋至刻度，混勻。保存期為6個(gè)月。氯丙醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：分別吸取氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃試管中，分別加入混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2mL，混勻，配制成含各氯丙醇質(zhì)量分

17、別10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和各氯丙醇內(nèi)標(biāo)質(zhì)量為200 ng的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。臨用現(xiàn)配。材料硅藻土固相萃取小柱（規(guī)格為5 g或10 g），或相當(dāng)?shù)漠a(chǎn)品。儀器和設(shè)備氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）。電子天平：感量為1 mg和0.01mg。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。恒溫箱或其他恒溫加熱器。渦漩混合器。氣密針，1.0 mL。分析步驟試樣制備液態(tài)試樣搖勻后直接進(jìn)行提取，基質(zhì)均勻的半固態(tài)試樣和粉狀固態(tài)直接進(jìn)行提取， 其他試樣需勻漿后進(jìn)行提取。試樣提取液態(tài)試樣稱取試樣4 g（精確到0.001g）于50 mL燒杯中，加入氯丙醇混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20

18、 L，超聲混勻5 min，待凈化。半固態(tài)及固態(tài)試樣稱取試樣4 g（精確到0.001g）于15 mL玻璃離心管中，加入氯丙醇混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20 L，加入氯化鈉溶液（200 g/L）4 g，超聲提取10 min，以5000 r/min離心10 min，移取上清液，再重復(fù)提取1次，合并上清液。試樣凈化將上清液全部轉(zhuǎn)移至硅藻土固相萃取小柱中，平衡10 min。以10 mL正己烷淋洗非極性雜質(zhì)，棄去流出液，以15 mL乙酸乙酯洗脫氯丙醇，收集洗脫液于玻璃離心管中，以氮?dú)鉂饪s至近干（切忌濃縮至全干），以2 mL正己烷溶解殘?jiān)?，并轉(zhuǎn)移至密閉性好的透明具塞玻璃試管中，待衍生化。衍生化用氣

19、密針向凈化液中加入七氟丁?；溥?.04 mL，立即密塞，渦旋混合30 s，于70 C保溫20 min。取出冷卻至室溫，加入氯化鈉溶液（200 g/L）2 mL，旋渦混合30 s，使水相和正己烷相分層。轉(zhuǎn)移正己烷相，加入約0.3 g無水硫酸鈉進(jìn)行干燥，轉(zhuǎn)移溶液至進(jìn)樣小瓶中，供GC-MS測定。同時(shí)做系氯丙醇列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的衍生化?？瞻自嚇尤芤褐苽浞Q取與試樣相同質(zhì)量的氯化鈉溶液（200 g/L）或空白基質(zhì)樣品，以下步驟按12.2、12.3和12.4與試樣同時(shí)處理?？疾煜到y(tǒng)空白。儀器參考條件氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀參考條件色譜柱：DB-5MS毛細(xì)管色譜柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。載氣

20、：氦氣；載氣流速：1 mL /min。 進(jìn)樣口溫度：250 C；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；不分流時(shí)間：0.5 min；進(jìn)樣體積：1 L。程序升溫：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min 。質(zhì)譜參考條件電離方式：電子轟擊源（EI）；電離能量：70eV。檢測方式：選擇反應(yīng)離子檢測（SIM）。溶劑延遲時(shí)間：5 min。離子源溫度: 250 C；傳輸線溫度：280 C；四級(jí)桿溫度：150 C。電子倍增器電壓：1000 eV。監(jiān)測離子：3-MCPD定量離子m/z 253 ，定性離子m/z 275、89、 291；2-MCPD定量離子m/z

21、253 ，定性離子m/z 75、289、291；d5-3-MCPD定量離子m/z 257，定性離子m/z 278、294、296；d5-2-MCPD定量離子m/z 257，定性離子m/z 79、294、296；1，3-DCP定量離子m/z 75，定性離子m/z 77、275、277；2，3-DCP定量離子m/z 75，定性離子m/z 77、111、263；d5-1，3-DCP定量離子m/z 79，定性離子m/z 81、278、280；d5-2，3-DCP定量離子m/z 79，定性離子m/z 81、116、257。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將氯丙醇系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液經(jīng)衍生化處理后的溶液分別注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用

22、儀中進(jìn)行測定，得到3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP與d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的色譜峰峰面積，以各氯丙醇和其對(duì)應(yīng)的氘代氯丙醇的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，以各氯丙醇和其對(duì)應(yīng)的氘代氯丙醇的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜儀中，測定3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP和和d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的色譜峰面積，平行測定次數(shù)不少于兩次。分析結(jié)果的表述試樣中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的含量

23、，按公式（2）計(jì)算含量： （2）式中：X 試樣中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的含量，單位為微克每千克（g/kg）；A 試樣色譜峰與內(nèi)標(biāo)色譜峰的峰面積比值對(duì)應(yīng)的氯丙醇的質(zhì)量，單位為納克（ng）； f試樣稀釋倍數(shù)；m試樣的取樣量，單位為克（g）。以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測XX果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測XX果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的20 %。其他按照本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的取樣量，3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP的檢出限均為5 g/kg。第三法 食品中氯丙醇脂肪酸酯（氯丙醇酯）總含量的測定氣相色

24、譜質(zhì)譜法原理試樣中加入氘代氯丙醇酯，以正己烷提取出試樣中的氯丙醇酯。向提取液中加入甲醇鈉/甲醇溶液進(jìn)行酯鍵斷裂反應(yīng)，使提取液中的氯丙醇酯轉(zhuǎn)化為氯丙醇和相應(yīng)的脂肪酸甲酯，以冰醋酸終止反應(yīng)。用正己烷萃取去除脂肪酸甲酯和其他脂溶性雜質(zhì)，用氯化鈉溶液將反應(yīng)生成的氯丙醇提取出來。提取液以硅藻土小柱進(jìn)行凈化，用正己烷淋洗去除提取液中的非極性組分，以乙酸乙酯為洗脫液洗脫氯丙醇。以七氟丁?；溥蜻M(jìn)行衍生化反應(yīng)。采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，采用選擇離子監(jiān)測（SIM）模式進(jìn)行質(zhì)譜掃描，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。試劑甲醇（CH4O）。叔丁基甲基

25、醚（C5H12O）。甲醇鈉（CH3ONa）。冰醋酸（CH3COOH）：優(yōu)級(jí)純。乙酸乙酯（C4H8O2）：色譜純。正己烷（C6H14）：色譜純。無水硫酸鈉（Na2SO4）。氯化鈉（NaCl）七氟丁?；溥颍–7H3F7N2O）：CAS編號(hào)32477-35-3。試劑的配制氯化鈉溶液（200 g/L）：稱取氯化鈉20 g，加入80 mL水，攪拌使氯化鈉充分溶解。10%硫酸鈉溶液：稱取無水硫酸鈉10 g，加水90 mL，攪拌并充分混勻00 mL。叔丁基甲基醚-乙酸乙酯溶液（8：2，體積比）：量取40 mL叔丁基甲基醚，加入10 mL乙酸乙酯，混勻。甲醇鈉-甲醇溶液（0.5 mol/L）：稱取2.7 g

26、甲醇鈉，加入50 mL甲醇，攪拌并充分混勻。標(biāo)準(zhǔn)品3-氯-1，2-丙二醇（3-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H7ClO2）：CAS編號(hào)96-24-2，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇（d5-3-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5H2ClO2）：純度98% 。2-氯-1，3-丙二醇（2-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H7ClO2）：CAS編號(hào)497-04-1，純度98%。d5-2-氯-1，3-丙二醇（d5-2-MCDP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5H2ClO2）：純度98%。1，3-二氯-2-丙醇標(biāo)準(zhǔn)品（1，3-DCP）（C3H6Cl2O）：CAS編號(hào)96-23-1，純度98%。d5-1，3-二氯-2-丙醇（d5-1， 3

27、-DCP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5HCl2O）：純度98%。2，3-二氯-1-丙醇（2，3-DCP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3H6Cl2O）：CAS號(hào)編號(hào)616-23-9，純度98%。d5-2，3-二氯-1-丙醇（d5-2，3-DCP）標(biāo)準(zhǔn)品（C3D5HCl2O）：純度97%。3-氯-1，2-丙二醇棕櫚酸酯（3-MCPD棕櫚酸酯）標(biāo)準(zhǔn)品（C19H37ClO3）：CAS編號(hào)30557-04-1，純度98%。d5-3-氯-1，2-丙二醇棕櫚酸酯（d5-3-MCPD棕櫚酸酯）標(biāo)準(zhǔn)品（C19 D5H32ClO3）：純度98%。標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制好后均需轉(zhuǎn)移至密閉性非常好的棕色玻璃容器中，于-20 C貯存。氯丙醇標(biāo)

28、準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000 mg/L）：分別準(zhǔn)確稱取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP、d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確到0.01 mg）于8個(gè)10 mL容量瓶中，分別用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混勻。保存期為2年。氯丙醇標(biāo)準(zhǔn)中間液（10 mg/L）：分別準(zhǔn)確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻。保存期為1年。氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（1 mg/L）：準(zhǔn)確移取3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP

29、標(biāo)準(zhǔn)中間液各1 mL于10 mL容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為6個(gè)月。氯丙醇混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）：準(zhǔn)確移取d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各0.1 mL于10 mL容量瓶中，用正己烷溶液稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。氯丙醇酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000 mg/L，以氯丙醇計(jì)）：分別準(zhǔn)確稱取3-MCPD棕櫚酸酯和d5-3-MCPD棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)品各32 mg（精確到0.01 mg）于2個(gè)10 mL棕色容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至刻度，混勻。保存期為2年。氯丙醇酯標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L，以氯丙醇計(jì)）：分別準(zhǔn)確

30、移取3-MCPD棕櫚酸酯和d5-3-MCPD棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液0.1 mL于2個(gè)10 mL棕色容量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，混勻。保存期為1年。系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備：分別吸取氯丙醇混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1 mg/L）10 L、50 L、100 L、200 L、400 L、800 L于透明具塞玻璃試管中，分別加入氯丙醇混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 mg/L）20 L，加正己烷至2 mL，混勻，配制成含各氯丙醇質(zhì)量分別10 ng、50 ng、100 ng、200 ng、400 ng、800 ng和各氯丙醇內(nèi)標(biāo)質(zhì)量為200 ng的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。臨用現(xiàn)配材料硅藻土固相萃取小柱（規(guī)格為5 g），或相當(dāng)?shù)?/p>

31、產(chǎn)品。儀器和設(shè)備氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS）。電子天平：感量為1 mg和0.01mg。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。恒溫箱或其他恒溫加熱器。渦漩混合器。氣密針，1.0 mL。分析步驟試樣制備液態(tài)試樣搖勻后直接進(jìn)行提取，基質(zhì)均勻的半固態(tài)試樣和粉狀固態(tài)直接進(jìn)行提取， 其他試樣需勻漿后進(jìn)行提取。試樣提取植物油、動(dòng)物油等油脂類試樣稱取試樣0.1 g （精確至0.001g），加入d5-3-MCPD棕櫚酸酯60 L、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 g/ mL）各20 L。面包等烘烤類固體試樣稱取試樣4 g（精確至0.001g），加入d5-3-MCPD棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)工作液（

32、10 g/ mL，以d5-3-MCPD計(jì)）60 L。加入4 mL正己烷，充分振搖混勻，超聲萃取20 min，靜置分層后，轉(zhuǎn)移出上層正己烷相。重復(fù)提起3次，合并正己烷相，加入d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 g/ mL）各20 L，以氮?dú)鉂饪s至約1 mL。乳與乳制品、烹調(diào)加工后的膳食樣品等稱取試樣2 g（精確至0.001g），加入d5-3-MCPD棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 g/ mL，以d5-3-MCPD）60 L。用2 mL正己烷超聲萃取20 min，靜置分層后，轉(zhuǎn)移出上層正己烷相。重復(fù)提取3次，合并正己烷相，加入d5-2-MCPD、d5-1，3-

33、DCP和d5-2，3-DCP標(biāo)準(zhǔn)工作液（10 g/ mL）各20 L，以氮?dú)鉂饪s至約1 mL。酯鍵斷裂反應(yīng)向試樣提取液中加入500 L叔丁基甲基醚-乙酸乙酯溶液（8：2，體積比）和1 mL 甲醇鈉-甲醇溶液（0.5 mol/L），蓋緊蓋子，渦旋振蕩30 s。室溫反應(yīng)4 min 后，加入100 L 冰醋酸終止反應(yīng)。加入3 mL 10%硫酸鈉溶液和3 mL 正己烷，渦旋振蕩30 s ，靜置1 min，棄去上層正己烷相，再用3 mL正己烷萃取一次，棄去上層正己烷相，下層的水相溶液待凈化。試樣凈化將水相溶液倒入5g 硅藻土小柱中，平衡15 min后，用15 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，在洗脫液中加入

34、無水硫酸鈉4 g ， 放置10 min 后過濾，濾液轉(zhuǎn)移至12 mL透明玻璃瓶樣品瓶中，于35氮?dú)鉂饪s至近干（切忌濃縮至全干），用2 mL正己烷溶解殘?jiān)?，渦旋混勻，待進(jìn)行衍生化反應(yīng)。衍生化用氣密針向凈化液中加入七氟丁酰基咪唑0.04 mL，立即密塞。渦旋混合后，于70保溫20 min。取出放至室溫，加氯化鈉溶液（200 g/L）2 mL，旋渦混合30 s，使兩相分層，取出上層有機(jī)相，加無水硫酸鈉0.3 g吸水干燥，將溶液轉(zhuǎn)移至樣品小瓶中，供GC-MS測定。同時(shí)做系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的衍生化反應(yīng)空白試樣溶液制備稱取與試樣相同質(zhì)量的10%硫酸鈉溶液或空白基質(zhì)樣品，以下步驟按19.2、19.3、19.4

35、和19.5與試樣同時(shí)處理，以考察系統(tǒng)空白。儀器參考條件氣相色譜參考條件色譜柱：DB-5MS柱（30 m0.25 m0.25 m），或等效柱。載氣：氦氣；載氣流速：1 mL /min。 進(jìn)樣口溫度：250 ；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣，不分流時(shí)間為0.5 min；進(jìn)樣體積：1 L。程序升溫：50 C保持1 min，以5 C/min升至90 C，再以40 C/min升至235 C，并保持5 min。質(zhì)譜參考條件電離方式：電子轟擊源（EI）；電離能量：70 eV。檢測方式：選擇反應(yīng)離子檢測（SIM）。溶劑延遲時(shí)間：5 min。離子源溫度：250 ；傳輸線溫度：280 ；四級(jí)桿溫度：150 。電子倍增器電壓

36、：1000 V。監(jiān)測離子：3-MCPD衍生物定量離子m/z 253 ；定性離子m/z 275、289、291；2-MCPD衍生物定量離子m/z 253 ；定性離子m/z 75、289、291；d5-3-MCPD衍生物定量離子m/z 257； 定性離子m/z 278、294、296；d5-2-MCPD衍生物定量離子m/z 257； 定性離子m/z 79、294、296；1，3-DCP衍生物定量離子m/z 75 ；定性離子m/z 77、275、277；2，3-DCP衍生物定量離子m/z 75；定性離子m/z 77、111、263；d5-1，3-DCP衍生物定量離子m/z 79；定性離子m/z 81

37、、278、280；d5-2，3-DCP衍生物定量離子m/z 79；定性離子m/z 81、116、257。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液分別注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中，測定3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP和d5-2，3-DCP和d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP相應(yīng)的色譜峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，以響應(yīng)值峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。試樣溶液的測定將試樣溶液注入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP 的含量，平行測定次數(shù)不少于兩次。分析結(jié)果的表述試樣中3-MCPD、2-MCPD、1，3-DCP和2，3-DCP與d5-3-MCPD、d5-2-MCPD、d5-1，3-DCP和d5-2，3-DCP的峰面積比作線性回歸，由回歸方程計(jì)算3-MCPD酯、2-MCPD酯、1，3-