紅袍胃安主要藥效學(xué)的拆方研究

1、紅袍胃安主要藥效學(xué)的拆方研究【摘要】目的觀察中藥復(fù)方紅袍胃安通過(guò)正交設(shè)計(jì)法按方藥組成君、臣、佐、使拆分出的局部組方對(duì)小鼠胃排空、腸推進(jìn)的影響和對(duì)大鼠胃液分泌等指標(biāo)的影響,評(píng)價(jià)出該復(fù)方拆方后的最有效的精簡(jiǎn)組方，為進(jìn)一步研發(fā)打下基矗方法采用綜合法造成大鼠慢性胃炎模型，大鼠幽門結(jié)扎法分析胃液，蛋清毛細(xì)管法，小鼠胃排空及腸推進(jìn)等實(shí)驗(yàn)方法。結(jié)果造模動(dòng)物經(jīng)給藥后，除方10(厚樸+馬蹄香+甘草)外，胃液分泌量均顯著降低;方3(延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù))、方4(甘草)和方9(厚樸+馬蹄香+延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù))能顯著降低胃液的總酸度，方2(厚樸+馬蹄香)和方11(延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù)+甘草)降低

2、胃液總酸度的作用次之;方5(全方)有增強(qiáng)的趨勢(shì)，方7(大紅袍+白術(shù)+延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù))和方8(大紅袍+白術(shù)+甘草)有降低胃蛋白酶活性的趨勢(shì);給藥組方2(厚樸+馬蹄香)、方5(全方)、方6(大紅袍+白術(shù)+厚樸+馬蹄香)的作用與香砂平胃組相當(dāng),能增強(qiáng)小鼠對(duì)酚紅的排空率，方3，7，9，10，11能減慢小鼠的胃排空率;給藥組方5、方6與香砂平胃陽(yáng)性藥組比，其作用相當(dāng)，能顯著促進(jìn)小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)。結(jié)論綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出，方6(大紅袍+白術(shù)+厚樸+馬蹄香)藥效作用與全方最為接近?！娟P(guān)鍵詞】紅袍胃安;拆方分析;藥效研究Abstrat:bjetiveTseparateHngpaEianpresript

3、inardingtpriniplesfprinipal,assistant,pleentandguide.Tbservetheeffetsfseparatednesngastrieptyingandintestineprpulsininiengastrijuieseretinvlueinrats.Appraisethebestsiplifiedseparatedpresriptin,hihaypresentafundatinfritsfurtherstudy.ethdshrnigastritisdelinratsasinduedbypsiteethds,gastrijuieafterpylru

4、sasligatedfdelrats,andtheethdsfegghiteapillary,gastrieptyingandintestineprpulsininieereused.ResultsAllseparatedpresriptinsexeptthe10thne(rtexagnliaeffiinalis,Valerianajataansi,Glyyrrhiza)bviuslydereasedthegastrijuievlueindelanials;the3rd(Rhizarydalis,GeraniustritipesR.Knuth,Periarpiuitriretiulatae,A

5、tratyldeslanea),4th(Glyyrrhiza)and9thpresriptin(rtexagnliaeffiinalis,Valerianajataansi、RhizarydalisGeraniustritipesR.Knuth,Periarpiuitriretiulatae,tratyldeslanea;)bviuslydereasedttalaidityfgastrijuie,the2nd(rtexagnliaeffiinalis,Valerianajataansi)and11th(Rhizarydalis,GeraniustritipesR.Knuth,Periarpiu

6、itriretiulatae,Atratyldeslanea,Glyyrrhiza)nehadeakereffet;the5th(riginalpresriptin)hadthetendenyfinreasingaidity,the7th(DaHngpa,Atratyldesarephala,Rhizarydalis,GeraniustritipesR.Knuth,Periarpiuitriretiulatae,Atratyldeslanea)andthe8th(DaHngpa,Atratyldesarephala,Glyyrrhiza)hadthetendenyfdereasingativi

7、tyfgastriprtease;The2nd,5th(riginalpresriptin)and6th(DaHngpa,Atratyldesarephala,rtexagnliaeffiinalis,Valerianajataansi)uldspeedupphenl-redeptyingrateinratsasellasXiangshapingEIgrup,the3rd,7th,9th,10thand11thpresriptinhadppsiteeffets;the5th,6thpresriptinanbviuslyspeedupintestineprpulsin,hihasrrespndt

8、psitiventrlgrup.nlusinPharalgialeffetsfthe6thpresriptinisstuptitsriginalne.Keyrds:Hngpaeian;Presriptindisantleentstudy;Pharalgy本方經(jīng)前期研究的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明：紅袍胃安能增強(qiáng)胃腸運(yùn)動(dòng)，解除胃腸痙攣，顯著抑制胃液分泌，降低胃液中總酸排出量，有增強(qiáng)胃蛋白酶活性的趨勢(shì)1;還能顯著增加胃壁粘液量和胃游離粘液量，而對(duì)胃粘膜血流量影響不明顯2，但能延長(zhǎng)小鼠凝血時(shí)間，顯著增強(qiáng)小鼠的單核巨噬細(xì)胞吞噬功能，增加免疫器官重量及抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜等藥理作用3。為其具有健脾燥濕，行氣止痛之成效提供

9、了實(shí)驗(yàn)根據(jù)。但由于時(shí)間經(jīng)費(fèi)的限制，還存在服用量大，全方藥味較多，不利于制劑及質(zhì)量控制，不適宜大消費(fèi)及進(jìn)一步的研發(fā)，因此，擬進(jìn)展進(jìn)一步的拆方研究，分析挑選有效藥物，精減處方以利于進(jìn)一步的研發(fā)?，F(xiàn)報(bào)道如下。1材料與儀器1.1藥物均購(gòu)自云南省藥材公司。經(jīng)鑒定為：大紅袍為豆科杭子梢屬植物毛杭子梢apyltrpishirtella(Fr.)Shindl.的根;隔山消為牻牛兒苗科植物紫地榆GeraniustritipesR.Kunth的根;馬蹄香為敗醬科植物心葉纈草ValerianajataansiiJnes的根莖。白術(shù)、蒼術(shù)等其他藥材均符合藥典要求。1.2動(dòng)物SD大鼠，體重200270g，雌雄兼用，動(dòng)物

10、合格證號(hào)：202204;K小鼠，體重1822g,雌雄兼用，動(dòng)物合格證號(hào)：20220404，均由昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.3試劑均為市售合格試劑。1.4儀器TGL-20臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(長(zhǎng)沙天創(chuàng)儀器制造);PB-10型PH計(jì)(北京賽多利斯儀器系統(tǒng));UV-2450型分光光度計(jì)(日本島津);PL403型電子天平(上海梅特勒-托利多儀器)。2方法2.1拆方分析按照正交設(shè)計(jì)法及方藥組成君、臣、佐、使拆方組成12個(gè)組L8(27)表一階交互考慮，1/2施行比例，即:方1：君藥(大紅袍+白術(shù));方2：臣藥(厚樸+馬蹄香);方3：佐藥(延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù));方4：使藥(甘草);方5：全方(大紅

11、袍+白術(shù)+厚樸+馬蹄香+延胡索+隔山消+陳皮蒼術(shù)+甘草);方6：君藥+臣藥(大紅袍+白術(shù)+厚樸+馬蹄香);方7：君藥+佐藥(大紅袍+白術(shù)+延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù));方8：君藥+使藥(大紅袍+白術(shù)+甘草);方9：臣藥+佐藥(厚樸+馬蹄香+延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù));方10：臣藥+使藥(厚樸+馬蹄香+甘草);方11：佐藥+使藥(延胡索+隔山消+陳皮+蒼術(shù)+甘草);方12：空白對(duì)照組。2.2分組及藥液制備2.2.1實(shí)驗(yàn)大鼠分組情況隨機(jī)分為15組：即拆方的12個(gè)組、兩個(gè)陽(yáng)性藥對(duì)照組(香砂平胃顆粒和雷尼替丁膠囊)和模型對(duì)照組。2.2.2實(shí)驗(yàn)小鼠分組情況均隨機(jī)分為13組：即拆方的12個(gè)組和陽(yáng)性藥對(duì)照

12、組(香砂平胃顆粒)。2.2.3給藥劑量均為臨床人用量的25倍(按公斤體重折算)，灌胃給藥，1次/d。2.2.4藥液制備按原處方劑量稱取各組藥材分別用冷水浸泡20in,煮沸后再煎煮30in,雙層紗布過(guò)濾,藥渣再加水煮沸20in,過(guò)濾,合并兩次濾液,濃縮至所需的體積,置冰箱內(nèi)4保存?zhèn)溆谩?.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，方差齊者：用t檢驗(yàn);方差不齊者：用t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如有偏態(tài)，那么用參比差值法。數(shù)據(jù)均用SPSS12.0軟件處理。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.4慢性胃炎模型的制備4大鼠雌雄各半，隨機(jī)分為15組，即正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、各藥物組，每組10只，每5只一籠，雌雄分籠喂養(yǎng)。第1個(gè)月每隔5

13、d，第2個(gè)月每隔7d，經(jīng)口灌服60%的乙醇溶液一次，每次每只2l，其間以pH7.07.8、20l/L去氧膽酸鈉溶液取代水隨意飲用，第3個(gè)月分別用30%乙醇溶液及20l/L去氧膽酸鈉溶液，每隔3d輪換1次隨意飲用。2.5對(duì)大鼠幽門結(jié)扎型胃液分泌的影響5按文獻(xiàn)方法進(jìn)展慢性胃炎模型造模3個(gè)月后，第4個(gè)月開(kāi)場(chǎng)給大鼠灌胃給藥，連續(xù)灌服30d，末次給藥前禁食24h，禁食期間可自由飲水，于末次給藥前在烏拉坦麻醉下施幽門結(jié)扎術(shù)。結(jié)扎好立即十二指腸給藥，空白組給等體積的生理鹽水，然后縫合腹壁切口，停頓供食供水，結(jié)扎后6h處死大鼠，摘取胃并搜集胃液于離心管，以3000r/in，離心15in，計(jì)算胃液量，取上清液作

14、胃液分析(酸堿滴定法)。在胃內(nèi)注入10l10%福爾馬林固定，用線扎緊食道，讓胃充分展開(kāi)，作病理切片檢查。胃液分析：pH值測(cè)定：將胃液倒入1l小燒杯中，用自動(dòng)電位滴定計(jì)測(cè)定胃液的pH值，(對(duì)于胃液量少于1l者用精細(xì)pH試紙測(cè)定pH值);胃酸測(cè)定：(酸堿中和滴定法)取胃液2l置于小三角燒瓶中，參加酚酞2滴，用滴定管漸漸用0.02l/LNaH滴定，同時(shí)不斷搖動(dòng)，滴定至微紅色不退為止，即為總酸度滴定終點(diǎn)，記錄滴定耗NaH毫升數(shù)。計(jì)算總酸度(Eq/L)=消耗NaH總毫升數(shù)10。結(jié)果見(jiàn)表1。表1對(duì)大鼠胃液分泌的影響與空白組比擬，*P0.05，*P0.01;與模型對(duì)照組比擬，P0.05，P0.01;與雷尼替

15、丁組比擬，P0.05，P0.01;與香砂平胃組比擬，P0.05，P0.01;n=10結(jié)果說(shuō)明：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)造成慢性胃炎的模型后，胃液總酸度和胃液分泌量顯著降低(P0.05)，對(duì)胃液pH值影響不顯著。造模動(dòng)物經(jīng)給藥后，除方10外，胃液分泌量均顯著降低;方3、方4和方9能極顯著降低胃液的總酸度(P0.01)，方2和方11降低胃液總酸度的作用次之(P0.05),其余各組均不顯著。2.6在體胃蛋白酶活性測(cè)定(ett氏改進(jìn)法)5用定量吸血毛細(xì)管灌滿蛋清(注意管內(nèi)應(yīng)無(wú)氣泡)。然后放在85熱水中使蛋白凝固，實(shí)驗(yàn)時(shí)取上述幽門結(jié)扎大鼠的胃液0.3l放入10l的試管中，加0.05l/L的Hl溶液4.5l搖勻，放進(jìn)5

16、長(zhǎng)蛋白管兩根，在37恒溫水浴中孵育24h，取出蛋白管，測(cè)量蛋白管兩端透明局部的長(zhǎng)度()，以四端之值取平均值。胃蛋白酶活性單位=平均值216。經(jīng)統(tǒng)計(jì)比擬。結(jié)果見(jiàn)表2。表2對(duì)大鼠胃蛋白酶活性的影響結(jié)果說(shuō)明：與模型對(duì)照組比擬，對(duì)胃蛋白酶活性影響：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)造成慢性胃炎的模型后影響不顯著，方5有增強(qiáng)的趨勢(shì)，方7和方8有降低胃蛋白酶活性的趨勢(shì)。其余各給藥組均不顯著。(由于胃液量的限制，測(cè)定胃蛋白酶的例數(shù)較少，甚至有的組沒(méi)有足夠的胃液測(cè)定該指標(biāo)，所以現(xiàn)做以簡(jiǎn)單說(shuō)明，用t檢驗(yàn)或t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法來(lái)說(shuō)明藥物作用的大體趨勢(shì))。2.7對(duì)小鼠胃排空運(yùn)動(dòng)的影響5(比色法)取小鼠130只，雌雄均用，隨機(jī)分為13組，分組及

17、給藥方法如前所述，連續(xù)灌胃給藥7d，第6天開(kāi)場(chǎng)禁食24h，末次給藥為皮下注射，30in后灌服0.1%的酚紅溶液0.2l/只，20in后脫臼處死動(dòng)物，剖腹摘取胃置于培養(yǎng)皿中，參加10l蒸餾水，用小剪刀沿胃大彎剪開(kāi)胃，將胃內(nèi)容物充分洗于蒸餾水中，倒入試管，以2000r/in離心10in，取上清液4l加2l0.5l/LNaH顯色，用UV-2450型分光光度計(jì)測(cè)其光密度(560n)。以胃中酚紅殘留量(D值)為指標(biāo),計(jì)算酚紅排空率酚紅排空率(%)=1-實(shí)驗(yàn)組D值/零點(diǎn)對(duì)照D值經(jīng)統(tǒng)計(jì)比擬。結(jié)果見(jiàn)表3。表3對(duì)小鼠胃酚紅排空的影響與空白組比擬，*P0.05，*P0.01;與香砂平胃組比擬，P0.05，P0.0

18、1結(jié)果說(shuō)明，與空白和香砂平胃組比擬,給藥組方2，方5，方6的作用與香砂平胃組相當(dāng),能增強(qiáng)小鼠對(duì)酚紅的排空率。方1，方4和方8影響不明顯,方3，7，9，10，11能減慢小鼠的胃排空率。2.8對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率的影響5(炭末法)取小鼠130只，隨機(jī)分為13組，分組及給藥方法如表所述，連續(xù)灌胃給藥7d，第6天開(kāi)場(chǎng)禁食24h，于末次給藥(各藥中參加5%炭末作指示劑)15in后脫頸處死，立即剖腹別離腸系膜，剪取上至幽門，下至回盲部的腸管，輕輕理成直線，測(cè)量小腸全長(zhǎng)及炭末推進(jìn)的間隔 ，用以下公式計(jì)算推進(jìn)率：推進(jìn)率(%)=炭末在小腸內(nèi)間隔 /小腸總長(zhǎng)100%。結(jié)果見(jiàn)表4。結(jié)果說(shuō)明，與空白組比擬，給藥組除方2，方4外，能顯著促進(jìn)小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)。與香砂平胃組比擬，給藥組方5，方6與其作用相當(dāng)。表4對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率的影響與空白組比擬，*P0.05，*P0.01;與香砂平胃組比擬，P0.05，P0.013小結(jié)與討論綜上所述，紅袍胃安經(jīng)