診斷-血液學(xué)一般檢查課件

1、04 十月 2022診斷血液學(xué)一般檢查03 十月 2022診斷血液學(xué)一般檢查1.血紅蛋白測定- 氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）測定法 該法具有操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，試劑容易保存等優(yōu)點，被國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)推薦為參考方法，為我國測定血紅蛋白首選方法。實 驗 一1.血紅蛋白測定- 血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中溶血后，血紅蛋白被高鐵氰化鉀K3Fe(CN)6氧化為高鐵血紅蛋白（Hi），后者與氰離子（CN-）結(jié)合生成穩(wěn)定的棕紅色氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）。在特定波長（540nm）和光徑（比色杯內(nèi)徑1.0cm）條件下具有一定的吸光度，通過用標(biāo)準(zhǔn)液制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可求出血紅蛋白濃度來。 原 理H

2、b Hi+ CN- HiCNK3Fe(CN)6實 驗 一血液在血紅蛋白轉(zhuǎn)化液中溶血后，血紅蛋白被高鐵氰化鉀K3Fe試劑血紅蛋白轉(zhuǎn)化液（文齊氏液）：氰化鉀（KCN） 0.05g高鐵氰化鉀K3Fe(CN)6 0.20g無水磷酸二氫鉀（KH2PO4） 0.14gTriton X100 1.0ml蒸餾水 加至1000ml器材1.血紅蛋白吸管，5ml吸管2.大試管3.721分光光度計上述試劑為淡黃色溶液，貯存于棕色瓶中室溫保存，其中非離子表面活性劑可加速溶血，縮短轉(zhuǎn)化時間，防止因血漿蛋白改變引起的混濁標(biāo)本來源EDTA-K2抗凝全血或毛細(xì)血管采血實 驗 一器材上述試劑為淡黃色溶液，貯存于棕色瓶中室溫保存，

3、其中非操作1.取血紅蛋白轉(zhuǎn)化液5.0ml加入大試管中。2.用血紅蛋白吸管吸取全血20l，輕拭管尖外余血，并準(zhǔn)確調(diào)節(jié)血柱液面至20l。加入到準(zhǔn)備好的血紅蛋白轉(zhuǎn)化液底部，并用上清液吸、吐兩次洗凈血紅蛋白吸管內(nèi)殘余血液，充分混勻，靜置5分鐘。實 驗 一操作1.取血紅蛋白轉(zhuǎn)化液5.0ml加入大試管中。2.用血3.于722分光光度計上以轉(zhuǎn)化液為空白進(jìn)行比色測定，波長540nm,光徑1.0cm。4.通過標(biāo)準(zhǔn)曲線間接求出血液中Hb的含量實 驗 一3.于722分光光度計上以轉(zhuǎn)化液為空白進(jìn)行比色測定，波長54將HiCN標(biāo)準(zhǔn)液倍比稀釋（如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度計

4、上540nm處，光徑1.0cm，以轉(zhuǎn)化液為空白測定各稀釋度的吸光度。以標(biāo)準(zhǔn)品血紅蛋白含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,或求出換算常數(shù)K(K=Hb/A)。則通過待測標(biāo)本吸光度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線或用K值計算血紅蛋白濃度（Hb=KA）。附HiCN標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和K值計算：實 驗 一將HiCN標(biāo)準(zhǔn)液倍比稀釋（如50g/L、100g/L、150參考值成年男性： （120160）g/L成年女性： （110150）g/L新生兒： （170200）g/L注意事項1.試劑因含氰化鉀，雖濃度較低，但在配制、保存、使用中需妥善。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值，應(yīng)定期檢查、校準(zhǔn)。報告方式Hb：_g/L實 驗 一參考值報告方式

5、實 驗 一2.白細(xì)胞計數(shù)原理血液用白細(xì)胞稀釋液（2%醋酸溶液）稀釋，使紅細(xì)胞溶解，白細(xì)胞形態(tài)更加清晰后，充入血細(xì)胞計數(shù)池，于顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的白細(xì)胞數(shù)量 實 驗 一2.白細(xì)胞計數(shù)原理實 驗 一1.血細(xì)胞計數(shù)板，蓋玻片2.血紅蛋白吸管（具有10l及20l刻度）3.1ml吸管，小試管，玻棒4.光學(xué)顯微鏡器材實 驗 一1.血細(xì)胞計數(shù)板，蓋玻片器材實 驗 一試劑白細(xì)胞稀釋液：冰醋酸 2ml1%龍膽紫 1ml或結(jié)晶紫數(shù)滴蒸餾水加至 100ml標(biāo)本來源EDTA-K2抗凝全血或毛細(xì)血管采血實 驗 一試劑實 驗 一1.加稀釋液：取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于一干凈小試管中。

6、2.加血：用血紅蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20l，輕拭管尖外余血，準(zhǔn)確調(diào)節(jié)血液液面至20l處，將血紅蛋白吸管插入白細(xì)胞稀釋液中（即小試管底部），迅速將血液放出，并用上清液吸吐兩次洗凈血紅蛋白吸管內(nèi)殘余血液。3.溶血：輕輕混勻后室溫靜置，待液體變?yōu)樽睾稚?，即紅細(xì)胞被完全破壞。4.沖池：用微量吸管或玻棒取適量混勻的白細(xì)胞懸液充入血細(xì)胞計數(shù)池（一次充好，液體不可外溢，不可有氣泡，否則擦凈重充），室溫水平靜置23分鐘，待細(xì)胞下沉后顯微鏡下計數(shù)。5.計數(shù)：將血細(xì)胞計數(shù)盤放在顯微鏡載物臺上，低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)。（壓線細(xì)胞計數(shù)原則：數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右）操作實 驗 一

7、1.加稀釋液：取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于一干凈小試管中。6.計算：白細(xì)胞/L=(N/4)1010620=(N/20)109式中N表示四個大方格內(nèi)數(shù)得的白細(xì)胞總數(shù)。/4:為平均每個大方格（0.1mm3）稀釋液內(nèi) WBC數(shù)。10：將一個大方格白細(xì)胞數(shù)換算為1l 內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。106：1L=106l。20：為血液稀釋倍數(shù)。白白白白白細(xì)胞計數(shù)區(qū)實 驗 一6.計算：白細(xì)胞/L=(N/4)1010620=(N/計數(shù)池構(gòu)造實 驗 一計數(shù)池構(gòu)造實 驗 一低倍鏡下的計數(shù)池大方格結(jié)構(gòu)實 驗 一低倍鏡下的計數(shù)池大方格結(jié)構(gòu)實 驗 一低倍鏡下的白細(xì)胞形態(tài)（10X10）實 驗 一低倍鏡下的白細(xì)胞形態(tài)（10X10）實 驗

8、 一白細(xì)胞計數(shù)操作步驟實 驗 一白細(xì)胞計數(shù)操作步驟實 驗 一報告方式白細(xì)胞數(shù)（WBC）：_109/L參考值成人： （410）109/L新生兒：（1520）109/L實 驗 一報告方式實 驗 一1.采血及計數(shù)室充液注意事項:毛細(xì)血管采血部位的皮膚必須正常，凡局部有水腫、發(fā)炎、紫紺或凍瘡等均不可穿刺采血。穿刺必須足夠深，使血液自行流出或輕施壓力即可流出。EDTA-K2抗凝全血使用前需混勻。計數(shù)盤和蓋玻片在使用前需用稠布或紗布擦拭干凈。血紅蛋白吸管內(nèi)腔一定要干燥，否則會影響吸血量及導(dǎo)致溶血。毛細(xì)血管采血動作必須迅速否則常易凝固，若作血紅蛋白和紅細(xì)胞計數(shù)兩項時，應(yīng)先取紅細(xì)胞計數(shù)標(biāo)本，后作血紅蛋白測定。手指血紅細(xì)胞與靜脈采血有差異且影響因素多，條件允許時應(yīng)盡量靜脈采血。注意事項實 驗 一1.采血及計數(shù)室充液注意事項:注意事項實 驗 一2一定要在稀釋液轉(zhuǎn)為棕褐色后方能充池計數(shù)，否則因RBC殘存而干擾計數(shù)使結(jié)果偏高。3白細(xì)胞稀釋液不能破壞有核紅細(xì)胞