血栓和止血一般檢驗培訓課件

1、血栓和止血一般檢驗血栓和止血一般檢驗第三章 血栓與止血一般檢驗本章主要講授的內(nèi)容：見P73-981 止血、凝血和纖溶機制。常用篩檢試驗： BT、CT、PLT、PT、APTT、FIB、TT、FDP、DD。3 臨床應用。血栓與止血分析儀簡介。血栓和止血一般檢驗2第三章 血栓與止血一般檢驗本章主要講授的內(nèi)容：見P73-9一 正常止血機制正常止血主要依賴三個方面血管壁作用血小板作用血液凝固作用血栓和止血一般檢驗3一 正常止血機制正常止血主要依賴三個方面血栓和止血一般檢驗二 正常凝血機制凝血因子及其特性凝血因子：I -， 原編號為是V的激活狀態(tài)，故只有12個。前4個凝血因子分別稱為： 纖維蛋白原(FI)

2、、 凝血酶原(F)、 組織因子(TF)、鈣離子(Ca2+) 。激活后的凝血因子用a來表示，如Fa。 未編號而參與凝血的蛋白： 激肽釋放酶原(PK)、 高分子量激肽原(HMWK)。血栓和止血一般檢驗4二 正常凝血機制凝血因子及其特性血栓和止血一般檢驗4傳統(tǒng)瀑布式凝血過程修正 傳統(tǒng)的瀑布式凝血過程并不能反映真正的體內(nèi)止血過程， 過去的內(nèi)源凝血僅是在某些特定的試管內(nèi)進行的。 例如在活體內(nèi)，缺乏因子一般不出血，但APTT延長。 因子、V促進血液凝固的加速因子，并不起酶的作用。 根據(jù)近年來研究，應將這種凝血過程予以修正(見圖)。血栓和止血一般檢驗5傳統(tǒng)瀑布式凝血過程修正 傳統(tǒng)的瀑布式凝血過程并不能反映真

3、正的傳統(tǒng)瀑布式凝血過程修正圖血栓和止血一般檢驗6傳統(tǒng)瀑布式凝血過程修正圖血栓和止血一般檢驗6傳統(tǒng)瀑布式凝血過程修正 凝血的啟動過程是血管壁受損后，TF釋出或表達， 立即與形成復合物（Fa-TF），將IX激活為IXa， 啟動Fa內(nèi)源性凝血途徑繼續(xù)維持凝血，內(nèi)源凝血 所需時間較長(以分計)。而組織因子途徑抑制物(TFPl)對Fa-TF及FXa起滅活作用，故凝血過程的 開始階段，只生成少量凝血酶，后者通過激活 血小板、因子、V、， 使凝血過程放大和加快。 另外Mg2+參與了凝血過程。血栓和止血一般檢驗7傳統(tǒng)瀑布式凝血過程修正 凝血的啟動過程是血管壁受損后，T三 正常纖溶機制1 纖溶系統(tǒng)組成及其特性纖

4、溶酶原激活途徑纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物血栓和止血一般檢驗8三 正常纖溶機制1 纖溶系統(tǒng)組成及其特性血栓和止血一般纖溶過程圖血管纖溶酶原FDP血栓和止血一般檢驗9纖溶過程圖血管纖溶酶原FDP血栓和止血一般檢驗9纖溶酶原激活途徑內(nèi)激活途徑： 內(nèi)源性凝血途徑Fa使PK轉(zhuǎn)變?yōu)镵，K使Scu-PA 轉(zhuǎn)變成tcu-PA，tcu-PA使PLG激活為PL。外激活途徑： 血管內(nèi)皮細胞中的t-PA裂解PLG形成PL。外源激活途徑： 體外溶栓藥物如SK和UK，使PLG激活成PL。血栓和止血一般檢驗10纖溶酶原激活途徑內(nèi)激活途徑：血栓和止血一般檢驗10纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物纖維蛋白原降解： 其降解產(chǎn)物統(tǒng)稱為纖維蛋白原降

5、解產(chǎn)物(FgDP)。交聯(lián)纖維蛋白降解： 除降解出碎片X、Y、D和E外，還生成D-二聚體等。 這些碎片及多聚體統(tǒng)稱為纖維蛋白降解產(chǎn)物(FbDP)。 FgDP和FbDP統(tǒng)稱為纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物(FDP)。 FDP具有阻止纖維蛋白單體交聯(lián)和聚合、競爭凝血酶 的抗凝作用及抑制血小板聚集的作用。血栓和止血一般檢驗11纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物纖維蛋白原降解：血栓和止血一般檢驗11第二節(jié) 常用篩檢試驗出血和血栓性疾病相關(guān)的常用篩檢試驗：出血時間(BT)、凝血時間(CT) 、血小板計數(shù)(PLT或BPC) 、凝血酶原時間(PPT或PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原（FIB

6、）纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物(FDP）D-二聚體(D- dime，DD)血栓和止血一般檢驗12第二節(jié) 常用篩檢試驗出血和血栓性疾病相關(guān)的常用篩檢試驗：血3 血小板計數(shù) 檢測原理：1 目視顯微鏡計數(shù)法：普通光鏡直接計數(shù)法相差顯微鏡直接計數(shù)2 血液分析儀法： 電阻抗法激光流式細胞術(shù)法綜合電學和激光流式細胞術(shù)法血栓和止血一般檢驗133 血小板計數(shù) 檢測原理：血栓和止血一般檢驗133 血小板計數(shù) 方法學評價：1 普通光鏡直接計數(shù)法： 人工操作干擾因素多、重復性差，介紹2種方法：草酸銨稀釋液法（常用） 對紅細胞破壞力強，血小板形態(tài)清楚。尿素稀釋法： 尿素易于分解，有時不能完全溶解紅細胞， 故識別血小板困難。

7、2 相差顯微鏡直接計數(shù)法（參考方法）3 血液分析儀法 重復性好。血栓和止血一般檢驗143 血小板計數(shù) 方法學評價：血栓和止血一般檢驗143 血小板計數(shù)質(zhì)量控制：避免血小板的激活和破壞，避免雜物污染。1 注意實驗前中后各個環(huán)節(jié)：如采血、抗凝劑、溫度等。 2 人工復查常用方法是： 草酸銨法復查。 用同一份血標本制備血涂片。血栓和止血一般檢驗153 血小板計數(shù)質(zhì)量控制：避免血小板的激活和破壞，避免雜物污染人工復查常用方法儀器法測定存在以下情況者需要復查：儀器報警提示。PLT直方圖異常。MCV80FL（小紅細胞等干擾）。PLT20。復查方法：草酸銨液溶血直接計數(shù)法。推片瑞氏染色：油鏡下1個PLT， 大

8、概相當于PLT 3109L。血栓和止血一般檢驗16人工復查常用方法儀器法測定存在以下情況者需要復查：血栓和止血3 血小板計數(shù)3 排除非技術(shù)因素的干擾 血小板假性減低： 血小板冷凝集、異常蛋白血癥、巨血小板、 血小板 衛(wèi)星現(xiàn)象、高脂血癥、EDTA誘導的血小板聚集。假性血小板增高： 白、紅細胞碎片、小紅細胞、冷球蛋白血癥、瘧疾等。 正常血小板大小、形態(tài)之間變異較大。血栓和止血一般檢驗173 血小板計數(shù)3 排除非技術(shù)因素的干擾 血栓和止血一般檢驗3 血小板計數(shù)正常血小板具有異質(zhì)性：參考值 ：（100300）109L臨床意義：1 生理性 正常人血小板數(shù)隨時間和生理狀態(tài)變化：一天之內(nèi)可增減6-10，午后

9、略高于早晨；春季較冬季低；平原居民較高原居民低；月經(jīng)前減低，月經(jīng)后增高；妊娠中晚期增高，分娩后即減低；運動、飽餐后增高，休息后恢復；靜脈血比毛細血管血高10。血栓和止血一般檢驗183 血小板計數(shù)正常血小板具有異質(zhì)性：血栓和止血一般檢驗183 血小板計數(shù) 2 病理性(1) 血小板減低：（20-50）109L，可有輕度出血或手術(shù)后出血。 20 109L， 可有較嚴重的出血； 5109L， 常嚴重出血。血小板生成障礙： 如急性白血病、再生障礙性貧血。血小板破壞過多： 如ITP、脾功能亢進、系統(tǒng)性紅斑狼瘡。血小板消耗增多：如DIC、TTP。 血栓和止血一般檢驗193 血小板計數(shù) 2 病理性血栓和止血一

10、般檢驗193 血小板計數(shù)(2)血小板增多( 400 109 L)：1）骨髓增生性疾?。?慢性粒細胞白血病，真性紅細胞增多癥。2）原發(fā)性血小板增多癥。3）急性大出血，急性溶血，急性化膿性感染。4）近期外科手術(shù)、尤其是脾切手術(shù)后患者。5）其他疾病： 心臟病、肝硬化、慢性胰腺炎、燒傷、腎衰竭、低溫。6）值得注意的是：在不明原因的血小板增高標本中， 約有50來自惡性疾病患者。 血栓和止血一般檢驗203 血小板計數(shù)(2)血小板增多( 400 109 L)血小板與MPV聯(lián)合檢測的意義血小板計數(shù)減少正常增多血小板減少血小板功能缺陷某些凝血因子缺陷血小板增多PLt破壞增多骨髓增殖性疾病血管性血友病低(無)纖維

11、蛋白原癥 遺傳性獲得性遺傳性獲得性MPV增高MPV增高或正常正常BM增生不良遺傳性獲得性反應性血小板增多正常血栓和止血一般檢驗21血小板與MPV聯(lián)合檢測的意義血小板計數(shù)減少正常增多血小板減少4 PT(凝血酶原時間)原理：在待測血漿中加入試劑(組織因子和鈣離子)， 啟動凝血，使凝血酶原轉(zhuǎn)變成凝血酶， 凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白， 從而促使血漿凝固。記錄從加入試劑到血漿 開始凝固所需時間，即為血漿凝血酶原時間(PT)。方法：傾斜試管法(手工法)： 血漿100l+PT試劑200l傾斜試管凝固。血栓和止血一般檢驗224 PT(凝血酶原時間)原理：在待測血漿中加入試劑(組織因傾斜試管法(手工法)

12、將待檢血漿和試劑加入試管中混勻，預溫，然后加入氯化鈣溶液，混勻并立即啟動秒表，不斷輕輕小角度(約300)傾斜試管，直到試管內(nèi)液體停止流動，按停秒表，記錄時間。重復測定兩次取平均值。每批實驗同時測定正常對照血漿。 傾斜試管法是凝血因子活性檢查的參考方法。血栓和止血一般檢驗23傾斜試管法(手工法) 將待檢血漿和試劑加入試管4 PT(凝血酶原時間)質(zhì)量控制：1 標本采集和處理。2 組織凝血活酶試劑質(zhì)量。3 國際敏感指數(shù)（ISI）、國際標準化比值（INR）。 4 PT測定的正常對照。5 PT的報告方式 。血栓和止血一般檢驗244 PT(凝血酶原時間)質(zhì)量控制：血栓和止血一般檢驗245 活化部分凝血活酶

13、時間（APTT）測定原理：方法： 傾斜試管法 待檢血漿100l +100l APTT試劑 373分鐘，100l 0.025MCaCl2 凝固。 血栓和止血一般檢驗255 活化部分凝血活酶時間（APTT）測定原理：血栓和止血一5 活化部分凝血活酶時間（APTT）測定 激活劑不同，對血漿中肝素、狼瘡抗凝物質(zhì)及因子、缺乏癥的敏感性也不同。故需要根據(jù)檢測項目等選擇不同的激活劑。見表1。血栓和止血一般檢驗265 活化部分凝血活酶時間（APTT）測定 激活劑不同6 凝血酶時間（TT）測定原理 （凝血酶法）： 凝血酶加入離體血漿后，血漿的纖維蛋白原 轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，導致血漿凝固的時間。方法 ：傾斜試管法 待

14、檢血漿100l +100l試劑(凝血酶)凝固。血栓和止血一般檢驗276 凝血酶時間（TT）測定原理 （凝血酶法）：血栓和止血一7 纖維蛋白原（FIB）測定 FIB (測定方法有十多種，現(xiàn)介紹5種）克勞斯(Clauss)法原理，即凝血酶法： 在被檢血漿中加入凝血酶，血漿即凝固， 其所需的時間長短與Fg含量的多少成負相關(guān)。 被檢血漿的Fg實際含量可從國際標準品FIB 參比血漿測定的標準曲線中獲得。 血栓和止血一般檢驗287 纖維蛋白原（FIB）測定 FIB (測定方法有7 纖維蛋白原（FIB）測定克勞斯(Clauss)法 優(yōu)點：它是一種快速簡便、特異性較好的功能測定法，是最常用的可凝固法，也是美國

15、推薦常規(guī)實驗室使用的方法。 缺點：試劑盒比較貴，且Fib異質(zhì)性、FDP、DD、肝素等抗凝物影響測定結(jié)果，使其結(jié)果偏低。因此，有報道認為測定孕婦FIB時最好用PT換算法，尤其是妊高癥者。血栓和止血一般檢驗297 纖維蛋白原（FIB）測定克勞斯(Clauss)法血栓和止7 纖維蛋白原（FIB）測定2 免疫法 免疫火箭電泳法： 酶聯(lián)免疫法： 3 比濁法(熱沉淀比濁法)： 4 化學法(雙縮脲法)：5 PT-der法(PT演算法)： 當儀器法測定PT完成時，F(xiàn)ib均變成纖維蛋白，其形成的濁度與Fib含量成正比。因此無需加任何試劑，即可由產(chǎn)生的濁度用終點法或速率法算出Fib含量。該法簡便、成本低。 血栓和

16、止血一般檢驗307 纖維蛋白原（FIB）測定2 免疫法血栓和止血一般檢驗307 纖維蛋白原（FIB）測定方法學評價： 1Clauss法 此法為功能檢測，操作簡單、結(jié)果可靠， 故被WHO推薦為測定Fg的參考方法。當PT演算法 結(jié)果可疑，則應用Clauss法復核確定。 2免疫法、比濁法、化學法操作較繁，均非Fg功能檢 測法，故與生理性Fg活性不一定總是成平行關(guān)系。 血栓和止血一般檢驗317 纖維蛋白原（FIB）測定方法學評價：血栓和止血一般檢驗37 纖維蛋白原（FIB）測定質(zhì)量控制： Clauss法參比血漿必須與檢測標本同時操作測定，以便核對結(jié)果；如標本中存在肝素、FDP或罕見的異常Fg，則Cla

17、uss法測定的Fg含量可假性減低，因此，需用其他方法如PT-der法核實。 血栓和止血一般檢驗327 纖維蛋白原（FIB）測定質(zhì)量控制：血栓和止血一般檢驗32篩檢止凝血功能試驗的小結(jié)篩檢止凝血功能最基本、常用的試驗： PT、APTT、FIB、TT、PLT、DD、FDP。止凝血功能試驗質(zhì)量控制十分重要： 實驗結(jié)果會受到諸多因素干擾，常見的受檢者狀態(tài)， 血小板聚集、標本采集、抗凝劑，檢測試劑盒、 設(shè)備儀器、實驗方法、操作者技術(shù)等，所以一定要 嚴格按照操作規(guī)程操作，并熟悉結(jié)果的臨床意義， 注意與臨床聯(lián)系。 血栓和止血一般檢驗33篩檢止凝血功能試驗的小結(jié)篩檢止凝血功能最基本、常用的試驗：DD報告單血栓

18、和止血一般檢驗34DD報告單血栓和止血一般檢驗34PT4A與DD報告單血栓和止血一般檢驗35PT4A與DD報告單血栓和止血一般檢驗35PT4A報告單血栓和止血一般檢驗36PT4A報告單血栓和止血一般檢驗36問題1：關(guān)于PT4A 某一心絞痛病人，晚上急診查PT2A結(jié)果：PT68.5S,INR6.7, FiB4.65g/L。 第二天復查PT4A：PT19.5S,INR1.8,FiB4.70g/L, APTT 98.0S,TT21.5S。 第三天復查PT4A：PT13.5S,INR 1.3, FiB5.80g/L, APTT 44.0S,TT13.7S。 問題： 1 為何第一次、第二次結(jié)果PT差別大

19、？2 為何第三次結(jié)果與前二次結(jié)果差別大？3 哪次PT結(jié)果正確？血栓和止血一般檢驗37問題1：關(guān)于PT4A 某一心絞痛病人，晚上急診查PT2問題2、3、42 為什么手術(shù)前APTT、PT、PLT三項檢查 可作為出血傾向的常用診斷指標？3 產(chǎn)后出血的患者，你應該選擇哪些常用 止凝血篩檢試驗以幫助診斷與治療？4 簡述PT的檢測原理及臨床應用。血栓和止血一般檢驗38問題2、3、42 為什么手術(shù)前APTT、PT、PLT三項檢第三節(jié) 臨床應用出血性或血栓性疾?。涸\斷，鑒別診斷，病情觀察，治療和(或藥物)監(jiān)測。 血栓和止血一般檢驗39第三節(jié) 臨床應用出血性或血栓性疾?。貉ê椭寡话銠z驗39 患者手術(shù)前止凝血

20、功能判斷主要依據(jù)：主要根據(jù)患者的病史(出血史和家族史)。體格檢查。實驗室檢查PLT、 APTT、PT等。血栓和止血一般檢驗40 患者手術(shù)前止凝血功能判斷主要依據(jù)：血栓和止血一般檢驗40衛(wèi)生部（2000）412號文件：出血時間、凝血時間檢驗方法操作規(guī)程的通知 本通知的主要內(nèi)容：停止使用BT測定項目的Duke法。停止使用CT測定玻片法和毛細管法。停止使用一般外科手術(shù)前的常規(guī)出血時間檢測。手術(shù)前用APTT、PT、PLT聯(lián)合檢測。如臨床有出血史時，測定器法進行BT檢測。血栓和止血一般檢驗41衛(wèi)生部（2000）412號文件：出血時間、凝血時間檢驗方法PT4A與DD臨床意義與臨床應用 PT臨床意義1.延長

21、：(1) 外源凝血因子缺乏癥和低纖維蛋 白原血癥(、)。； (2) DIC及原發(fā)性纖溶癥。 (3) 維生素K缺乏癥。 (4) 血中有抗凝物。2.縮短：(1) 見于先天性V因子增多。 (2) 血栓前狀態(tài)和血栓性疾病。 (3) 長期口服避孕藥。血栓和止血一般檢驗42PT4A與DD臨床意義與臨床應用 PT臨床意義血栓和止血一PT臨床應用PT臨床應用：(1) 術(shù)前凝血功能監(jiān)測(2) 口服抗疑劑監(jiān)測首選PT(INR)(3) 用于外源凝血因子缺陷的檢測(4) 可作為肝臟合成蛋白質(zhì)功能的檢測血栓和止血一般檢驗43PT臨床應用PT臨床應用：血栓和止血一般檢驗43APTT臨床意義1.延長：(1) 內(nèi)源凝血因子缺

22、乏如血友病等。 (2) 嚴重的共同途徑因子缺乏。 (3) 肝素抗凝治療。 (4) 低纖維蛋白原血癥， 吸收不良綜合癥等， (5) DIC，原發(fā)性纖溶，血中存在 大量的FDP，有抗凝物質(zhì)等。2.縮短：(1) 高凝狀態(tài)。 (2) 血栓栓塞性疾病。 (3) 促凝物質(zhì)進入血中。血栓和止血一般檢驗44APTT臨床意義1.延長：(1) 內(nèi)源凝血因子缺乏如血友病等APTT臨床應用 APTT臨床應用： 術(shù)前凝血功能監(jiān)查。 監(jiān)測肝素用量的良好指標。 是凝血時間替代指標。 用于內(nèi)源凝血因子缺陷的檢測。血栓和止血一般檢驗45APTT臨床應用 APTT臨床應用：血栓和止血一般檢驗FIB臨床意義 1.增高： 動脈樣粥硬

23、化。(2) 糖尿病。(3) 急性傳染病，急性感染。(4) 結(jié)締組織病。(5) 急性腎炎和尿毒癥。(6) 妊娠晚期和妊高癥。(7) 放療后，灼傷，休克，外科大手術(shù)后。(8) 惡性腫瘤等。血栓和止血一般檢驗46FIB臨床意義 1.增高：血栓和止血一般檢驗46FIB 臨床意義、臨床應用FIB臨床意義：減少：DIC原發(fā)性纖溶。重癥肝炎，肝硬化等。FIB臨床應用： 術(shù)前監(jiān)查凝血功能。(2) 溶栓、抗凝治療監(jiān)測。(3) 預防血栓形成的獨立因。(4) 腫瘤病人化療后監(jiān)測：FIB下降易出血。血栓和止血一般檢驗47FIB 臨床意義、臨床應用FIB臨床意義：血栓和止血一般檢驗TT臨床意義、臨床應用TT 臨床意義：

24、 1.延長： (1) FIB水平或功能減低。 (2) 應用肝素或類肝素物質(zhì)存在 （如SLE、肝炎、腎病等） 。 (3) 其它抗凝血酶類物質(zhì)存在。 (4) 見于FDP增多。2.減少： 見于血液微凝及Ca+存在。TT 臨床應用： (1) 反應FIB功能的指標。 (2) 可用于肝素用量的監(jiān)測。 血栓和止血一般檢驗48TT臨床意義、臨床應用TT 臨床意義：血栓和止血一般檢驗48DD 臨床意義、臨床應用 臨床意義：(1)繼發(fā)性纖溶、 DIC。(2)肺栓塞(PE或PTE)、深靜脈血栓(DVT)。(3)冠心病、肝病、慢性腎炎等不同程度的升高。 臨床應用：(1)診斷DIC的重要依據(jù)。(2)篩查PE，DVT的有

25、效手段。(3)肝病、腎炎等診斷、治療及療效觀察有一定的作用。血栓和止血一般檢驗49DD 臨床意義、臨床應用 臨床意義：血栓和止血栓止血檢測項目系列組合1 術(shù)前過篩檢查：PLT、PT、APTT、FIB、TT。2 深靜脈血栓和肺栓塞的診斷：D-D。 3 口服抗凝劑監(jiān)測：PT（INR）。 4 DIC的診斷： PLT、PT、APTT、FIB、DD。5 肝功能監(jiān)測(肝臟合成蛋白質(zhì)功能)：PT。6 體內(nèi)抗凝物質(zhì)監(jiān)測：血栓和止血一般檢驗50血栓止血檢測項目系列組合1 術(shù)前過篩檢查：PLT、PT、A PT、APTT、FIB、AT、LMW。7 血栓形成監(jiān)測：PT、APTT、FIB、DD、 AT、PLG、PI、P

26、C、PS、APCR、VWF。血栓和止血一般檢驗51 PT、APTT、FIB、AT、LMW。7 血栓形成監(jiān)測：8 出血性疾病的診斷 先天及后天凝血因子缺乏過篩試驗： PT， APTT，因子，F(xiàn)IB 。 先天及后天纖溶系統(tǒng)亢進(如PI缺乏，各種血 栓性疾病，DIC及嚴重肝病所致纖溶亢進)： PLG，PI，D-D。 病理性循環(huán)抗凝物質(zhì)所致出血性疾病(如因子 抑制物，高肝素血癥等): APTT，PT，因子，TT，Heparin等。血栓和止血一般檢驗528 出血性疾病的診斷 先天及后天凝血因子缺乏過篩試驗：血栓9 溶栓治療的監(jiān)測 (UK，SK等)1 一級監(jiān)測指標：FIB、PT、 APTT 。 （溶栓效果

27、理想時，它們的期望值）：FIB：溶栓2小時后減到2 gL， 保持在1.21.5gL為宜， 不應低于0.5 1.0gL 。PT：2030（1.52.0倍）INR 2.03.0。APTT：延長1.52.5倍，100S可導致出血。 2 二級監(jiān)測指標：PLG、PI、D-D。 血栓和止血一般檢驗539 溶栓治療的監(jiān)測 (UK，SK等)1 一級監(jiān)測指標：FI4 血栓與止血分析儀簡介（補充內(nèi)容） 血栓與止血分析儀（凝血儀）生物學方法，即凝固法（源于手工法）。生物化學方法。免疫學方法。血栓和止血一般檢驗544 血栓與止血分析儀簡介（補充內(nèi)容） 血栓與止血分析儀凝血儀工作原理：生物學方法血栓和止血一般檢驗55凝

28、血儀工作原理：生物學方法血栓和止血一般檢驗55血栓和止血一般檢驗培訓課件凝血儀工作原理：生物學方法（1）光學法（最常用）。 原理：樣品杯中的血漿在凝固過程中，纖維蛋白原逐漸轉(zhuǎn)變成纖維蛋白，其理學性狀也會發(fā)生改變，透射光和散射光的強度也會發(fā)生改變。凝血儀根據(jù)這種由于血液凝固而導致光強度的變化判斷凝固終點的方法稱之為光學法。 光學法又可分成兩種： 透射比濁法。 散射比濁法。血栓和止血一般檢驗57凝血儀工作原理：生物學方法（1）光學法（最常用）。血栓和止血凝血儀工作原理：生物學方法1 散射比濁法：根據(jù)待檢樣品在凝固過程中散射光的變化來確定凝固終點的檢測方法。 原理：儀器在血漿與試劑混合的瞬間，也就是

29、散射光最弱的時刻，將散射光強度設(shè)為0，在血漿樣品凝固完全以后，散射光最強的時刻，將散射光強度設(shè)為100。0100之間的光強度變化被描成一條曲線，儀器可設(shè)定一個點(比如50)所對應的時間為凝血時間。血栓和止血一般檢驗58凝血儀工作原理：生物學方法1 散射比濁法：根據(jù)待檢樣品在光學法測定時標準曲線的制定 在凝血實驗測定中，為了推算某些物質(zhì)的濃度及百分比活性，首先要對已知濃度或活性物質(zhì)的凝血時間進行測定，并以濃度或活性對應凝血時間來制定標準曲線。 標準曲線的制定至少需要三個點，標準曲線的點越多，其準確性越高。 標準曲線制備好以后，儀器先檢測待檢樣品的凝固時間，然后根據(jù)凝固時間從標準曲線上求出活動度或

30、濃度。血栓和止血一般檢驗59光學法測定時標準曲線的制定 在凝血實驗測定中，為了凝血儀工作原理：生物學方法（2）電流法（鉤方法）： 電流法是將待檢樣品作為電路的一部分。 由于纖維蛋白具有導電性，利用電流的斷與否 來判斷纖維蛋白的形成與否。即判斷凝固終點。血栓和止血一般檢驗60凝血儀工作原理：生物學方法（2）電流法（鉤方法）：血栓和止血凝血儀工作原理：生物學方法（3）粘度法（磁珠法）： 在待檢樣品中加入小鐵珠，利用變化的磁 場使小鐵珠產(chǎn)生運動，隨著血漿的凝固，血漿 粘稠度增加，小鐵珠的運動強度逐漸減弱。儀 器根據(jù)小鐵珠運動強度的變化確定凝固終點。血栓和止血一般檢驗61凝血儀工作原理：生物學方法（3

31、）粘度法（磁珠法）：血栓和止血凝血儀工作原理：生物化學方法血栓和止血一般檢驗62凝血儀工作原理：生物化學方法血栓和止血一般檢驗62凝血儀工作原理：生物化學方法 生物化學方法原理：人工合成含某種活性酶裂解位點的化合物，且化合物連接上產(chǎn)色物質(zhì)，待檢樣品中含有活性酶或往樣品中加入活性酶(被檢測物質(zhì)含量同酶活性呈一定的數(shù)量關(guān)系)，故在檢測過程中產(chǎn)色物質(zhì)可被解離下來，使被檢樣品中出現(xiàn)顏色變化，根據(jù)此顏色變化可推算出被檢物質(zhì)的含量。產(chǎn)色物質(zhì)一般選用連接對硝基苯胺(PNA)。游離PNA呈黃色，其測定波長選用405nm。在這一波長下，其他物質(zhì)對光的吸收小于PNA對光吸收的1。血栓和止血一般檢驗63凝血儀工作原理：生物化學方法 生物化學方法原理：血栓和凝血儀工作原理：生物化學方法生物化學方法優(yōu)點是： 用酶學方法直接定量、測定結(jié)果準確、重 復性好、便于自動化、便