大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)培訓(xùn)課件

1、大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)目錄一、細(xì)菌介紹二、大腸桿菌生物學(xué)特性三、大腸桿菌檢測儀器、設(shè)備四、檢測培養(yǎng)基及試劑五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備六、接種培養(yǎng)七、MPN單位介紹八、檢測注意事項2大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)目錄一、細(xì)菌介紹2大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)一、細(xì)菌介紹細(xì)菌是單細(xì)胞原核微生物，個體微小（細(xì)胞直徑約0.5m, 0.5-5m），結(jié)構(gòu)簡單，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，細(xì)菌分布最廣、數(shù)量最多。3大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)一、細(xì)菌介紹細(xì)菌是單細(xì)胞原核微生物，個體微?。?xì)胞直徑約0.1、細(xì)菌的形態(tài) 細(xì)菌個體微小、形態(tài)各異球菌桿菌弧菌與彎曲菌螺旋菌及螺旋體不規(guī)則形弧菌4大腸菌群檢測

2、操作規(guī)范培訓(xùn)1、細(xì)菌的形態(tài) 細(xì)菌個體微小、形態(tài)各異弧菌4大腸菌群檢測操作2、細(xì)菌的結(jié)構(gòu) 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括：細(xì)胞壁、 細(xì)胞膜、間體、細(xì)胞漿、核糖體、細(xì)胞質(zhì)。 細(xì)菌的附屬結(jié)構(gòu)包括：質(zhì)粒、莢膜、鞭毛、菌毛和芽胞。5大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)2、細(xì)菌的結(jié)構(gòu) 細(xì)菌的基本結(jié)構(gòu)包括：細(xì)胞壁、 細(xì)胞膜、間體、3、細(xì)菌的繁殖 細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。在分裂前先延長菌體，染色體復(fù)制為二，然后垂直于長軸分裂，細(xì)胞赤道附近的細(xì)胞質(zhì)膜凹陷生長，直至形成橫隔膜，同時形成橫隔壁，這樣便產(chǎn)生兩個子細(xì)胞。 6大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)3、細(xì)菌的繁殖 細(xì)菌最普遍、最主要的繁殖方式：二分分裂繁殖。4、細(xì)菌的菌落

3、單個或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長繁殖后，會形成以母細(xì)胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)菌落。7大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)4、細(xì)菌的菌落 單個或少數(shù)細(xì)菌細(xì)胞生長繁殖后，會形成以母細(xì)胞細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。 8大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以細(xì)菌的菌落圖9大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)細(xì)菌的菌落圖9大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)二、大腸桿菌生物學(xué)特性大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。主要包括埃希氏菌、檸檬酸細(xì)菌、腸桿菌、克雷伯氏菌等，均

4、屬于腸桿菌。10大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)二、大腸桿菌生物學(xué)特性大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無芽孢，以周生鞭毛運動或不運動。最適生長溫度為37，在42-44條件下仍能生長，生長溫度范圍為15-46。11大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無1、大腸桿菌平板菌落照片12大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)1、大腸桿菌平板菌落照片12大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)2、大腸桿菌革蘭氏染色照片13大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)2、大腸桿菌革蘭氏染色照片13大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)3、大腸桿菌微菌落照片14大腸菌群檢

5、測操作規(guī)范培訓(xùn)3、大腸桿菌微菌落照片14大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)4、大腸桿菌透射電鏡照片15大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)4、大腸桿菌透射電鏡照片15大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)5、大腸桿菌掃描電鏡照片16大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)5、大腸桿菌掃描電鏡照片16大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)6、大腸桿菌分裂照片17大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)6、大腸桿菌分裂照片17大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)三、檢測儀器、設(shè)備 冰箱：04 恒溫培養(yǎng)箱：361 恒溫水浴鍋：461 微生物顯微鏡18大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)三、檢測儀器、設(shè)備 冰箱：0418大腸菌群檢測操作規(guī)范培架盤藥物天平：0g500g，精確至0.5g 三角瓶：500ml

6、滅菌吸管：1ml、10ml 滅菌平皿：直徑90mm 試管：18180mm19大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)架盤藥物天平：0g500g，精確至0.5g19大腸菌群檢測四、檢測培養(yǎng)基及試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管伊紅美藍(lán)瓊脂乳糖發(fā)酵管革蘭氏染色液生理鹽水20大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)四、檢測培養(yǎng)基及試劑乳糖膽鹽發(fā)酵管20大腸菌群檢測操作規(guī)范培乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，11515分鐘高壓滅菌。雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外，其它成分加倍。21大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)乳糖膽鹽發(fā)酵管：用于大腸菌群的測定。35g乳糖膽鹽于1升蒸餾乳糖發(fā)酵管：大腸菌群

7、證實試驗用。 30g乳糖于1升蒸餾水中，溶解，分裝于發(fā)酵試管中，放入小倒管，11515分鐘高壓滅菌。22大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)乳糖發(fā)酵管：大腸菌群證實試驗用。 30g乳糖于1升蒸餾水中，伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。 37.5g于1升蒸餾水中，搖勻，加熱煮沸，12115分鐘高壓滅菌。23大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)伊紅美蘭瓊脂：用于大腸菌群的固體平板檢測。 37.5g于1升五、檢測前培養(yǎng)基準(zhǔn)備 檢查預(yù)先經(jīng)過滅菌處理的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基小導(dǎo)管內(nèi)是否有氣體。按產(chǎn)品品種將培養(yǎng)基分別放在試管架內(nèi)，同時將9ml 0.85%滅菌鹽水管也放入相應(yīng)的試管架內(nèi)。24大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)五、檢測前培

8、養(yǎng)基準(zhǔn)備 檢查預(yù)先經(jīng)過滅菌處理的乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)六、接種培養(yǎng) （一）酸牛奶系列產(chǎn)品酸牛奶系列產(chǎn)品接種單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基9支管，分別接種樣品量為1ml (原濃度)3支，0.1ml (10-1濃度)3支，0.01ml (10-2濃度)3支。 25大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)六、接種培養(yǎng) （一）酸牛奶系列產(chǎn)品25大腸菌群檢測操作規(guī)范培1、 1ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時分別吸取1ml樣品試液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。26大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)1、 1ml接種培養(yǎng)在無

9、菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml2、 0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管吸取1:10的稀釋液1ml于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:100的稀釋液；同時分別吸取1ml 1:10稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。27大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)2、 0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管吸取1:103、 0.01ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml 1:100稀釋液于3支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。28大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)3、 0.01ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取14、接種過程操作

10、錄像檢測單料大腸檢測.MPG29大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)4、接種過程操作錄像檢測單料大腸檢測.MPG29大腸菌群檢5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于361的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)242h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。30大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于361的培6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。31大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大（二）活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基3支管，單料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基

11、6支，分別接種樣品量為10ml 3支，1ml 3支，0.1ml 3支。32大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)（二）活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品活性乳酸菌飲料系列產(chǎn)品接種雙料乳1、 10ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1ml樣品試液于含有9ml0.85%滅菌鹽水試管中，振蕩搖勻制成1:10的稀釋液；同時用10ml滅菌吸管分別吸取10ml樣品試液于3支雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。33大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)1、 10ml接種培養(yǎng)在無菌條件下，用1ml滅菌吸管吸取1m大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)培訓(xùn)課件3、 0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1ml 1:10稀釋液于3

12、支單料乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，并輕微振蕩搖勻，放入原位置。35大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)3、 0.1ml接種培養(yǎng)另換1根1ml滅菌移液管分別吸取1m4、接種過程操作錄像檢測雙料大腸檢測.MPG36大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)4、接種過程操作錄像檢測雙料大腸檢測.MPG36大腸菌群檢5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于361的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)242h，觀察乳糖膽鹽發(fā)酵管的變化情況。37大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)5、接種后培養(yǎng)將接種完的試管連同試管架一起置于361的培6、結(jié)果查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大腸菌群陰性。 若有產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則要做證實試驗。38大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)6、結(jié)果

13、查詢并記錄若所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則報告大（三）證實試驗1、伊紅美藍(lán)瓊脂平板分離將產(chǎn)酸產(chǎn)氣乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)的培養(yǎng)物分別接種于伊紅美蘭瓊脂平板(劃線分離)，置于361的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)242h。39大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)（三）證實試驗1、伊紅美藍(lán)瓊脂平板分離39大腸菌群檢測操作規(guī)接種和分離工具1接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀40大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)接種和分離工具1接種針 2.接種環(huán) 3.接種鉤 4.5.玻平板分離畫線法1.斜線法 2.曲線法 3.方格法 4.放射法 5.四格法41大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)平板分離畫線法1.斜線法

14、2.曲線法 3.方格法 4.放射法將伊紅美藍(lán)瓊脂平板從培養(yǎng)箱取出后,觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和乳糖復(fù)發(fā)酵試驗。革蘭氏染色：見革蘭氏染色及鏡檢操作規(guī)范。42大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)將伊紅美藍(lán)瓊脂平板從培養(yǎng)箱取出后,觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染（四）乳糖發(fā)酵試驗挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，置于361的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)242h，觀察產(chǎn)氣情況。43大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)（四）乳糖發(fā)酵試驗挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色后接種乳糖發(fā)酵培凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大腸菌群陽性。44大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)凡是革蘭氏陰性無芽孢桿菌乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣的菌落即可報告大

15、腸根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100ml樣品內(nèi)的大腸菌群的MPN值。將檢測結(jié)果填入微生物檢測報告單，并及時傳遞給相關(guān)部門。45大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)根據(jù)證實為大腸菌群的陽性管數(shù)，查MPN檢索表，查找每100m七、MPN單位介紹MPN=Most Probable Number ，最大可能數(shù) ，是一種利用統(tǒng)計學(xué)檢測微生物的方法。食品大腸菌群是以每克或100ML中大腸菌群的最近似值，是用MPN來表示。46大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)七、MPN單位介紹MPN=Most Probable Num采用9管法，對樣品選三個稀釋度，每個稀釋度接種三管相應(yīng)的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，然后根據(jù)情況做出判斷陽性和陰性，再根據(jù)不同稀釋度的陽性管數(shù)查表即可得到被測樣品相應(yīng)指標(biāo)的MPN值。47大腸菌群檢測操作規(guī)范培訓(xùn)采用9管法，對樣品選三個稀釋度，每個稀釋度接種三管相應(yīng)的培養(yǎng)八、注意事項 乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)小導(dǎo)管內(nèi)如無氣泡，需輕振試管，若有氣泡上冒，也算產(chǎn)氣。 在伊紅美藍(lán)瓊脂平