微生物之葡萄球菌培訓(xùn)課件

1、微生物之葡萄球菌微生物之葡萄球菌內(nèi)容概要葡萄球菌屬及金葡菌簡介文獻(xiàn)常用種屬鑒定靶基因靶序列比對(duì)及文獻(xiàn)引物金葡菌毒力因子及耐藥文獻(xiàn)2微生物之葡萄球菌內(nèi)容概要葡萄球菌屬及金葡菌簡介文獻(xiàn)常用種屬鑒定靶基因靶序列比葡萄球菌屬致病種情況概述種名拉丁學(xué)名臨床致病種類金黃色葡萄球菌*S. aureus 局部化膿感染，肺炎、偽膜性腸炎、心包炎,敗血癥、膿毒癥等全身感染表皮葡萄球菌S.epidermidis 菌血癥,術(shù)后心肌炎和心內(nèi)膜炎,骨髓炎,透析性腹膜炎腐生葡萄球菌S.saprophyticus 尿路感染，慢性前列腺炎路鄧葡萄球菌S. lugdunensis 膿腫、心內(nèi)膜炎、腹膜炎、泌尿道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)

2、感染、骨關(guān)節(jié)感染 人葡萄球菌S.hominis 耳部、咽部、眼內(nèi)、宮頸、前列腺、支氣管炎、肺炎、泌尿系統(tǒng)等的感染或化膿性感染，以及敗血癥溶血葡萄球菌S.haemolyticus 敗血癥、創(chuàng)傷和下呼吸道感木糖葡萄球菌S. xylosus 術(shù)后感染沃氏葡萄球菌S. warneri 動(dòng)脈栓塞和牙周炎有關(guān)頭狀葡萄球菌S. capitis 尿道感染等3微生物之葡萄球菌葡萄球菌屬致病種情況概述種名拉丁學(xué)名臨床致病種類金黃色葡萄球葡萄球菌屬及金葡菌簡介 葡萄球菌屬是一類觸酶試驗(yàn)陽性的革蘭陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中間型葡萄球菌、施氏葡萄球菌、路鄧葡萄球菌等35 個(gè)種， 17

3、個(gè)亞種。 金黃色葡萄球菌革蘭陽性球菌，直徑為0. 5 1. 5 m ，成單、雙、短鏈或不規(guī)則葡萄狀排列。在液體培養(yǎng)基或服液標(biāo)本中，往往排列成雙或短鏈，易誤認(rèn)為鏈球菌。 金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上的典型菌落為金黃色，周圍有明顯的自溶血環(huán)，部分菌落也可呈灰白色或擰攘色。在高鹽甘露醇平板上呈淡橙黃色菌落。表皮葡萄球菌在血瓊脂平板上菌落為白色或檸檬色，不溶血。14微生物之葡萄球菌葡萄球菌屬及金葡菌簡介 葡萄球菌屬是一類觸酶試觸酶試驗(yàn)陽性，分解葡萄糖、麥芽糖、荒草糖和甘露醇，不分解棉子糖和水楊苷，明膠、血漿凝固酶和DNA 酶試驗(yàn)陽性，七葉苷試驗(yàn)陰性。葡萄球菌屬在自然界分布很廣。存在于空氣、水、塵埃及皮

4、膚上的葡萄球菌大多數(shù)無致病性。金黃色葡萄球菌，主要引起局部組織的化膿性感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎等全身感染等，也可引起骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎和深部膿腫等。腐生葡萄球菌引起尿道感染、前列腺炎、外傷和敗血癥等。溶血葡萄球菌引起心內(nèi)膜炎、敗血癥、腹膜炎、尿道感染、外傷、骨折和關(guān)節(jié)炎等。葡萄球菌對(duì)甲氧西林耐藥率較高，耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌（MRSA）對(duì)多種廣譜強(qiáng)效抗菌藥物呈多重耐藥性。如果檢測(cè)出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株則報(bào)告耐所有青霉素、頭抱菌素、碳青霉烯類和-內(nèi)酰胺類/ -內(nèi)酰胺酶抑制劑類抗生素，對(duì)氨基糖昔類和大環(huán)內(nèi)醋類抗生素常協(xié)同耐藥。15微生物之葡萄球菌觸酶試驗(yàn)陽性，分解葡萄糖、麥芽糖、荒草

5、糖和甘露醇，不分解棉子文獻(xiàn)中金葡菌常用鑒定靶基因基因名生理功能特異性敏感性 coa2,4,9,11,29,37,38 凝固酶100%unknowNuc3,5-9,15,19,20,22,25-31,34,105 耐熱核酸酶100%1.15*103/mL623S9,10,21,29，33,36 核糖體RNA亞基100%10 -105 cfu/mLSa44211,12,13,14,18unknow100%unknowPhospholipase16磷脂酶100%104 cfu/mL16Hsp17unknow100%N*104 cfu/mL17vicK24信號(hào)傳導(dǎo)基因100%unknow16S35核糖

6、體RNA100%103 cfu/mLfemA93 Unclear(細(xì)胞壁/膜代謝有關(guān))100%unknow表格中劃“”的表明已做，“？”表明在NCBI上找不到序列，沒做6微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中金葡菌常用鑒定靶基因基因名生理功能特異性敏感性 coa其他葡萄球菌鑒定基因靶微生物基因名生理功能特異性敏感性S. xylosusHsp6039熱休克蛋白假陽性UnknowS. xylosusxylB39?木酮糖激酶100%unknowS.saprophyticusunknow40unknow100%100 copies/PCRS.saprophyticus16S41 核糖體RNA100%unknowS.

7、lugdunensistanA42 鞣酸酶100%unknowS. epidermidisatlE43 細(xì)胞表面蛋白假陰性（2/109）103 cfu/mLS. hominisGap43 Unknow100%105 cfu/mLS. haemolyticusmvaA43 unknow100%104 cfu/mLS. HaemolyticusS. EpidermidisS。hominisfemA44肽聚糖合成蛋白100%unknow表格中劃“”的表明已做，“？”表明在NCBI上找不到序列，沒做7微生物之葡萄球菌其他葡萄球菌鑒定基因靶微生物基因名生理功能特異性敏感性S. 檢測(cè)靶點(diǎn)的確定 腐生（16

8、S）葡萄球菌 金葡（nuc, coa, femA, 23S）表葡（atlE） 木糖（xylB） 人型（gap） 溶血（mvaA） 路鄧（tanA）16S8微生物之葡萄球菌檢測(cè)靶點(diǎn)的確定 腐生（16S）葡萄 金葡（nuc, coa,金黃色葡萄球菌nuc序列比對(duì)NCBI中選擇61株金黃色葡萄球菌nuc基因序列進(jìn)行比對(duì)9微生物之葡萄球菌金黃色葡萄球菌nuc序列比對(duì)NCBI中選擇61株金黃色葡萄球Nuc基因進(jìn)化樹10微生物之葡萄球菌Nuc基因進(jìn)化樹10微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中nuc引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size

9、(bp)Sense1,2,7,8Anti-senseGCGATTGATGGTGATACGGTTAGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC金葡298-318558-581267QNuc-S3QNuc-ASCCTGAAGCAAGTGCATTTACGACTTTAGCCAAGCCTTGACGAACT金葡415-436563-585166Nuc-S3,4,5Nuc-ASCTGGCATATGTATGGCAATTGTTTATTGACCTGAATCAGCGTTGTCT金葡35-57680-703664NUC-F1666NUC-R565AGTTCAGCAAATGCATCACATAGCCAAGCCTTGAC

10、GAACT金葡不匹配563-582400SAU5A9SAU5BCAAGTCTAAGTAGCTCAGCAAATGACCGTATCACCATCAATCGC金葡167-190298-31715011微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中nuc引物Primer nameSequence（5金葡菌coa序列比對(duì)選取199株金葡菌coa序列進(jìn)行比對(duì)12微生物之葡萄球菌金葡菌coa序列比對(duì)選取199株金葡菌coa序列進(jìn)行比對(duì)12coa進(jìn)化樹13微生物之葡萄球菌coa進(jìn)化樹13微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中coa引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct siz

11、e(bp)SA-31,2,3SA-4GTAGATTGGGCAATTACATTTTGGAGGCGCATCAGCTTTGTTATCCCATGTA金葡75-101不匹配117COAG24COAG3CGAGACCAAGATTCAACAAGAAAGAAAACCACTCACATCA金葡1759-17782735-275499514微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中coa引物Primer nameSequence（5金葡菌23S序列比對(duì)選取166條金葡菌23S序列進(jìn)行比對(duì)15微生物之葡萄球菌金葡菌23S序列比對(duì)選取166條金葡菌23S序列進(jìn)行比對(duì)15金葡23S進(jìn)化樹16微生物之葡萄球菌金葡23S進(jìn)化樹16微生物之葡萄球

12、菌文獻(xiàn)中23S引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)23S-F120023S-R16981,2AGCTGTGGATTGTCCTTTGGTCGCTCGCTCACCTTAGAAT金葡6481-65006964-6983499Sau3273Sau1645GGACGACATTAGACGAATCACGGGCACCTATTTTCTATCT金葡10786-1080512085-121041318Staur44Staur6ACGGAGTTACAAAGGACGACAGCTCAGCCTTAACGAGTAC金葡5542-5

13、5626829-6848130617微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中23S引物Primer nameSequence（5金葡femA序列比對(duì)選取57條金葡femA序列進(jìn)行比對(duì)18微生物之葡萄球菌金葡femA序列比對(duì)選取57條金葡femA序列進(jìn)行比對(duì)18微femA進(jìn)化樹19微生物之葡萄球菌femA進(jìn)化樹19微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中femA引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct size(bp)F1RACAGCTAAAGAGTTTGGTGCTCTAACACTGAGTGATAACG金葡634-6531082-110346720微生物之葡

14、萄球菌文獻(xiàn)中femA引物Primer nameSequence（5其他葡萄球菌序列比對(duì)選取34條表皮葡萄球菌altE序列進(jìn)行比對(duì)選取6條人葡萄球菌gap序列進(jìn)行比對(duì)選取2條溶血葡萄球菌mvaA序列進(jìn)行比對(duì)21微生物之葡萄球菌其他葡萄球菌序列比對(duì)選取34條表皮葡萄球菌altE序列進(jìn)行比表皮葡萄球菌altE和人葡萄球菌gap進(jìn)化樹altEgap22微生物之葡萄球菌表皮葡萄球菌altE和人葡萄球菌gap進(jìn)化樹altEgap文獻(xiàn)中表皮葡萄球菌altE、人葡萄球菌gap和溶血葡萄球菌mvaA引物Primer nameSequence（53）Targeting microbeLocationProduct

15、 size(bp)F1RPggaggaactaataataagttaactgGtcataaacagttgtatataagccFAM-ctgctaatcgtggtgttgctcaaattaaa-BHQ1S. epidermidis4204-42284273-42964232-426092F1RPTagatggatctgaaacagtagtatCcttcaacaataccaaattcgtcTexas red-aggtgcttcatgtactacaaactcattg BHQ2S. hominis394-417471-493419-44699F1RPTatgcatgatggtttaacagatgGaa

16、ctcatcttgcatttcacVIC-ctttcattatgtaccaatgggtgtaacagc-BHQ1S. haemolyticus1949-19712035-2054不匹配10523微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中表皮葡萄球菌altE、人葡萄球菌gap和溶血葡萄球菌路鄧葡萄球菌 tanA、腐生葡萄球菌16S序列比對(duì)選取4條路鄧葡萄球菌tanA序列進(jìn)行比對(duì)選取194條腐生葡萄球菌16S序列進(jìn)行比對(duì)24微生物之葡萄球菌路鄧葡萄球菌 tanA、腐生葡萄球菌16S序列比對(duì)選取4條路文獻(xiàn)中路鄧葡萄球菌tanA和腐生葡萄球菌16S引物Primer nameSequence（53）Targeting mi

17、crobeLocationProduct size(bp)F1RAGCATGGGCAATAACAGCAGTAAGCTGCGCCAATTTGTTCTAAATATS. lugdunensis2185-22072400-2423239Probe2TCCTTTGAAAACTCTAGAS.saprophyticus1110-1127(腐生葡萄球菌 16S -1文件中的位置)unknow25微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中路鄧葡萄球菌tanA和腐生葡萄球菌16S引物Prime金黃色葡萄球菌毒力因子檢測(cè)26微生物之葡萄球菌金黃色葡萄球菌毒力因子檢測(cè)26微生物之葡萄球菌PSM和PSM-mec毒素簡介 PSM 是一類具有

18、溶中性粒細(xì)胞活性的致炎性蛋白，呈螺旋，為縮氨酸小分子，由核基因編碼， PSM 操縱子無效突變體菌株的毒力在致皮膚病和菌血癥中明顯比野生株下降很多，這說明PSM 在感染中是重要的致病毒力因子。新鑒定的 PSM-mec跟PSM 不同，它由耐甲氧西林SCCmec編碼，為水平轉(zhuǎn)移元件，受agr系統(tǒng)調(diào)控，在細(xì)菌之間傳播，該基因存在于SCCmec type 和（HA-MRSA）中，而在CA-MRSA（USA300）中沒有。 就溶白細(xì)胞活性而言，psm-mec比PSM 3低，比PSM 高，誘導(dǎo)IL-8因子的能力psm-mec的能力高于其他的PSM 。這就是說，除了PSM 3以外，psm-mec跟其他的PSM

19、 的致炎能力相當(dāng)。當(dāng)其他PSMs的量較它大時(shí)，psm-mec的致病能力較低，當(dāng)它的量比其他溶細(xì)胞性的PSMs高時(shí)，才表現(xiàn)出在致病方面的主導(dǎo)作用121。 F region位于SCCmec上的調(diào)控基因mecI的下游，它的缺失或突變?cè)斐啥玖Φ脑鰪?qiáng)和菌落延展能力的增大，它存在于type和 的SCCmec中，不存在于中122。27微生物之葡萄球菌PSM和PSM-mec毒素簡介 PSM Fudoh基因簡介Fudoh基因跟psm-mec一樣，也是由SCCmec移動(dòng)元件攜帶的調(diào)控基因，Chikara Kaito等122證實(shí)其跟金葡的毒力有關(guān)，它的存在會(huì)抑制菌落在培養(yǎng)基上的延展擴(kuò)散，比如在SCCmec type

20、 型的MRSA，菌落相比較其他MSSA菌落要小，此外， Fudoh基因的存在會(huì)抑制金葡外毒素的產(chǎn)生， Fudoh基因點(diǎn)突變體或缺失突變菌株的菌落延展性和菌株毒性均大于野生菌株。Fudoh基因存在于SCCmec-和，不存在于、和。28微生物之葡萄球菌Fudoh基因簡介Fudoh基因跟psm-mec一樣，也是由Fudoh基因序列比對(duì)2株fudohSCCmec-II-fudoh比對(duì)結(jié)果29微生物之葡萄球菌Fudoh基因序列比對(duì)2株fudohSCCmec-II-fu金黃色葡萄球菌毒力因子毒力因子子類檢測(cè)基因分布率毒理及臨床表現(xiàn)參考文獻(xiàn)溶血素hla 98.5%溶解紅細(xì)胞，并與牛羊壞疽性乳腺炎有關(guān)，導(dǎo)致白

21、細(xì)胞崩解，引起平滑肌收縮，麻痹，最終壞死45,72hlb 97%(462株)具有神經(jīng)磷脂酶作用，特異裂解細(xì)胞膜上的鞘磷脂，使細(xì)胞膜滲漏而溶解46,47,72hlgA 98.5%破壞嗜中性白血球和巨噬細(xì)胞，破壞哺乳動(dòng)物紅血球。hlgB 98.5%67hlgC 98.5%67hld 98.5%-溶血素能破壞很多哺乳類動(dòng)物的細(xì)胞膜，對(duì)許多細(xì)胞都有作用。一般認(rèn)為它在細(xì)胞膜上有表面活性劑的作用，通過溶解目標(biāo)細(xì)胞的膜來裂解細(xì)胞45表格中劃“”的表明已做，“？”表明在NCBI上找不到序列，沒做30微生物之葡萄球菌金黃色葡萄球菌毒力因子毒力因子子類檢測(cè)基因分布率毒理及臨床表毒力因子子類檢測(cè)基因基因位置臨床癥狀

22、及來源分布率參考文獻(xiàn)殺白細(xì)胞素LukS-lukFPVL 由前噬菌體攜帶，整合到染色體上lukF 破壞人的白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,lukS破壞兔子紅細(xì)胞83/59348,49,50,51,53LukE-lukDLukE-lukD 染色體兔源性菌株攜帶，不具有溶血活性和很弱的殺白細(xì)胞活性All strains48,52LukMLukM 噬菌體從牛和羊身上分離出的菌株攜帶unknow4831微生物之葡萄球菌毒力因子子類檢測(cè)基因基因位置臨床癥狀分布率參考文獻(xiàn)殺白細(xì)胞素毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置毒理及臨床癥狀參考文獻(xiàn)腸毒素sea（classical）sea 5/13染色體/噬菌體1、刺激腸上皮細(xì)胞，產(chǎn)

23、生腹瀉2、刺激嘔吐中樞，導(dǎo)致嘔吐為主的食物中毒癥狀。3、刺激非特異性T細(xì)胞增殖的超抗原特性。47,55,60,73,74,75,76,78,79,80,81,83,84,85,86,88,90,91seb（classical）seb 2/94染色體55,60,74,75,76,78,79,80,81,83,84,85,86,88,90,91sec（classical）sec 123/462染色體46,55,60,73,76,78,79,80,81,83,84,85,86,88,90,91sed（classical）sed 59/462染色體/質(zhì)粒46,55,60,73,76,78,79,80,

24、81,83,84,85,86,88,90,91see（classical）see 噬菌體76,78,80,81,83,84,85,86,88,89,90,91sehseh 4/75染色體73,76,77,80,81,83,84,85,86,87,88,89,90,91seisei 7/75染色體73,76,77,78,80,81,83,84,85,86,87,88,90,91segseg 10/75染色體73,76,77,78,80,81,83,84,85,86,87,88,89,90,91sejsej 31/75質(zhì)粒73,76,77,78,80,81,83,84,85,86,88,9132微

25、生物之葡萄球菌毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置毒理及臨床癥狀參考文獻(xiàn)腸毒毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床特點(diǎn)參考文獻(xiàn)腸毒素seksek 16.3%(147)非催吐型類腸毒素76,78,81,83,89selsel 15/7573,76,78,81,83,89semsem 11.6%(147)76,78,81,83,84,85sepsep 2/13噬菌體47,78,81,83sensen 10.9%(147)噬菌體76,78,81,83,85seoseo 14.3%(147)76,78,81,83,85seqseq 10.9%(147)76,78,81,83seuseu 14.2%(14

26、7)76,81,83serser?5.4%(147)質(zhì)粒81,82,8333微生物之葡萄球菌毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床特點(diǎn)參考文獻(xiàn)腸毒素se毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床癥狀參考文獻(xiàn)毒性休克綜合征毒素-1（tsst-1）無tst 24%染色體可引起機(jī)體多個(gè)器官系統(tǒng)的功能紊亂或毒性休克綜合征(TSS)54,55,56,57,58,59,60,65表皮剝落素(et)Aeta 染色體可以引發(fā)人類的葡萄球菌燙傷樣皮膚綜合癥。常見于 5 歲以下對(duì)葡萄球菌毒素抗體還未形成的新生兒或者有嚴(yán)重疾病的成人中，兒童病例死亡率約為 3%-4%61,62,63,64,65,66,89Betb 質(zhì)粒

27、64,65,66,8934微生物之葡萄球菌毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床癥狀參考文獻(xiàn)毒性休克綜毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床癥狀參考文獻(xiàn)粘附因子BiofilmicaA 68,92icaD 100%68laminin-adhesineno (lbp)nasal colonisation, haematogenous osteomyelitisand arthritis.68,89Collagen adhesion cna 22.4%染色體跟小孩肺病有關(guān)68,70,71,92fibronectin-adhesinfnbA 98%染色體眼角膜炎、骨髓炎和膿毒性關(guān)節(jié)炎有關(guān)68,70,7

28、1,72fnbB 99%染色體眼角膜炎、骨髓炎和膿毒性關(guān)節(jié)炎有關(guān)68,70,71fnbP 63.5%粘附乳腺細(xì)胞69elastin-adhesinebpS 100%染色體nasal colonisation, haematogenous osteomyelitisand arthritis.68,7035微生物之葡萄球菌毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床癥狀參考文獻(xiàn)粘附因子B毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床癥狀參考文獻(xiàn)Sialoprotein adhesionBbp 跟骨髓炎和關(guān)節(jié)炎有關(guān)68,89FibrinogenadhesinclfA 50.6%染色體68,69,70,72clf

29、B 91.8%nasal colonisation, haematogenous osteomyelitisand arthritis.68,69,70,72,89fib 100%染色體68,70,89sdrC 68,69sdrD 68sdrE 68,92fbpA 1/25染色體70Broad-specificity adhesion Map 100%7036微生物之葡萄球菌毒力因子子類檢測(cè)基因分布率基因位置臨床癥狀參考文獻(xiàn)Sialo殺白細(xì)胞素PVL序列比對(duì)選取247株金葡菌PVL（殺白細(xì)胞素）序列進(jìn)行比對(duì)。金葡菌PVL-137微生物之葡萄球菌殺白細(xì)胞素PVL序列比對(duì)選取247株金葡菌PVL（

30、殺白細(xì)胞素金葡菌PVL進(jìn)化樹金葡菌PVL-138微生物之葡萄球菌金葡菌PVL進(jìn)化樹金葡菌PVL-138微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中金葡菌PVL引物Primer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)PVL-11PVL-2CTGGTGCGATTCATGGTACGATATCGTGGTCATCACA282-299不匹配金葡菌PVL-13524PVL-FP2PVL-RPprobeGCTGGACAAAACTTCTTGGAATATGATAGGACACCAATAAATTCTGGATTGAAAATGCCAGTGTTATCCA2789-28122847-28732816-28

31、3484luk-PV-13,4luk-PV-2ATCATTAGGTAAAATGTCTGGACATGATCCAGCATCAATGTATTGGATAGCAAAAGC1646-1677不匹配43339微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中金葡菌PVL引物Primer nameSequencelukE，lukD序列比對(duì) 18株金葡lukE序列進(jìn)行比對(duì) 14株金葡lukD序列進(jìn)行比對(duì)40微生物之葡萄球菌lukE，lukD序列比對(duì) 18株金葡lukE序列進(jìn)行比對(duì) lukE,lukD進(jìn)化樹lukElukD41微生物之葡萄球菌lukE,lukD進(jìn)化樹lukElukD41微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中的lukE,lukD引物Targe

32、tingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)lukElukE-S1lukE-ASAATGTTAGCTGCAACTTTGTCACTTTCTGCGTAAATACCAGTTCTA525-5461341-1364lukD未找到相關(guān)引物42微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中的lukE,lukD引物TargetingPrimer金葡lukM序列比對(duì)選取3株金葡lukM序列進(jìn)行比對(duì)43微生物之葡萄球菌金葡lukM序列比對(duì)選取3株金葡lukM序列進(jìn)行比對(duì)43微生金葡菌tst（tsst-1）序列比對(duì)選取11株金葡菌tst序列進(jìn)行比對(duì)。44微生物之葡萄球菌金葡菌tst

33、（tsst-1）序列比對(duì)選取11株金葡菌tst序文獻(xiàn)中金葡菌tst（tsst-1）引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)Tsst-1TSST-1_FPa1TSST-1_RPbProbeTCATCAGCTAACTCAAATACATGGATTTGTGGATCCGTCATTCATTGTTTCCAATAACCACCCGTTTTATCGCTTGAA5717-57435783-5804不匹配87Tsst-1GTSSTR-12GTSSTR-2ACCCCTGTTCCCTTATCATCTTTTCAGTATTTGTAACGCC5268-

34、52875574-5593326Tsst-1TSST-13TSST-2Atggcagcatcagcttgatatttccaataaccacccgttt不匹配5761-578035045微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中金葡菌tst（tsst-1）引物TargetingPr金葡菌表皮剝落素eta,etb序列比對(duì)選取13株金葡菌eta序列進(jìn)行比對(duì)。選取3株金葡菌etb序列進(jìn)行比對(duì)。46微生物之葡萄球菌金葡菌表皮剝落素eta,etb序列比對(duì)選取13株金葡菌eta文獻(xiàn)中金葡菌eta和etb引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)etbGE

35、TBR-11,2GETBR-2ACAAGCAAAAGAATACAGCGGTTTTTGGCTGCTTCTCTTG4772-47914985-5004226文獻(xiàn)中eta引物均不與比對(duì)文件匹配，故沒列出文獻(xiàn)中eta的引物47微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中金葡菌eta和etb引物TargetingPrimer 金葡菌hla()和hlb()序列比對(duì)選取9株金葡菌hla序列進(jìn)行比對(duì)，生成比對(duì)文件hla-1(下圖)，hla-2.選取6株金葡菌hlb序列進(jìn)行比對(duì)，生成比對(duì)文件hlb.48微生物之葡萄球菌 金葡菌hla()和hlb()序列比對(duì)選取9文獻(xiàn)中hla和hlb引物TargetingPrimer nameSequ

36、ence（53）LocationProduct size(bp)hlaF1RTATTAGAACGAAAGGTACCAACTGTACCTTAAAGGCTGAA240-259321-340(hla-2)hlaF2RGCGAAGAAGGTGCTAACAAAAGTGGCGCCAATTTTTCCTGTATCATCACC284-308不匹配(hla-2)unknowHlbHlb-13Hlb-2GTTGCAACACTTGCATTAGCACGTAGTAATATGGGAACGCA788-8071675-169590749微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中hla和hlb引物TargetingPrimer na金葡菌Delta

37、溶血素hld序列比對(duì)選取48株金葡菌hld序列進(jìn)行比對(duì)，生成比對(duì)文件hld and other genes.apr(除hld外還有其他基因)和hld.apr。hld and other genes.aprhld.apr50微生物之葡萄球菌金葡菌Delta溶血素hld序列比對(duì)選取48株金葡菌hld序Hld進(jìn)化樹hld and other genes.aprhld.apr51微生物之葡萄球菌Hld進(jìn)化樹hld and other genes.aprh gamma溶血素hlg（A,B,C）序列比對(duì)ABC52微生物之葡萄球菌 gamma溶血素hlg（A,B,C）序列比對(duì)ABC52微生Hlg（A,B,C

38、）進(jìn)化樹ABC53微生物之葡萄球菌Hlg（A,B,C）進(jìn)化樹ABC53微生物之葡萄球菌Hlg引物Primer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)Hlg-1Hlg-2GCCAATCCGTTATTAGAAAATGCCCATAGACGTAGCAACGGAThlg1707-17292625-264493754微生物之葡萄球菌Hlg引物Primer nameSequence（53）T金葡菌腸毒素與疾病金葡菌可產(chǎn)近20種腸毒素，分為三類，一類是經(jīng)典型：sea,seb,sec,sed,see，第二類是新發(fā)現(xiàn)的seg,seh,sei,sej，這兩

39、類都屬于催吐型腸毒素，第三類是非催吐型類腸毒素：sel,sek,sep,seq,sen,sem,seu,ser等，腸毒素陽性金葡菌常引起以嘔吐和腹瀉為主要癥狀的食物中毒，在含蛋白較多且含淀粉的食品中易產(chǎn)生和積累，且對(duì)熱穩(wěn)定。腸毒素除了能引起食物中毒以外，還對(duì)感染腸毒素陽性金葡的呼吸系統(tǒng)造成嚴(yán)重的影響124。55微生物之葡萄球菌金葡菌腸毒素與疾病金葡菌可產(chǎn)近20種腸毒素，分為三類，一類是8類催吐性腸毒素基因序列比對(duì)57株sea序列24株seb序列56微生物之葡萄球菌8類催吐性腸毒素基因序列比對(duì)57株sea序列24株seb序列8株sec序列6株sed序列34株seg序列57微生物之葡萄球菌8株se

40、c序列6株sed序列34株seg序列57微生物之葡萄7株seh序列16株sei序列4株sej序列58微生物之葡萄球菌7株seh序列16株sei序列4株sej序列58微生物之葡萄文獻(xiàn)中腸毒素引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)seaSEAU1,2SEALprobeATGGTAGCGAGAAAAGCGAAGCCATAAATTGATCGGCACTCTAAAGCTGTTCCCTGCAATTCA329-348705-724381-403比對(duì)文件Sea-1395seaGSEAR-14GSEAR-2GGTTATCAATGTGCG

41、GGTGGCGGCACTTTTTTCTCTTCGG610-629692-711比對(duì)文件Sea-1102seaSEA-33SEA-4CCTTTGGAAACGGTTAAAACGTCTGAACCTTCCCATCAAAAAC748-768853-874比對(duì)文件Sea-1126seaSEA 15SEA 2TTGGAAACGGTTAAAACGAAGAACCTTCCCATCAAAAACA751-770852-871121sebSEB 15SEB 2TCGCATCAAACTGACAAACGGCAGGTACTCTATAAGTGCC635-6541119-113847759微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中腸毒素引物Targ

42、etingPrimer nameSesebSEBU1SEBLprobeTGTATGTATGGTGGTGTAACACAAATCGTTAAAAACGGCGATAGTGACGAGTTAGGTA661-6801253-1272808-825611sebSEBU12SEBL1CATTAACCCCTTGTTGCCATACAAATCGTTAAAAACGGCG1192-12111281-1300108sebSEB-13SEB-4TCGCATCAAACTGACAAACGGCAGGTACTCTATAAGTGCCTGC635-654不匹配477sebGSEBR-14GSEBR-2GTATGGTGGTGTAACTGA

43、GCCCAAATAGTGACGAGTTAGG667-686832-851164secSEC-33SEC-4CTCAAGAACTAGACATAAAAGCTAGGTCAAAATCGGATTAACATTATCC666-691914-936271secGSECR-14GSECR-2AGATGAAGTAGTTGATGTGTATGGCACACTTTTAGAATCAACCG433-456864-883451secSEC 15SEC 2GACATAAAAGCTAGGAATTTAAATCGGATTAACATTATCC677-696914-933257sedSED-33SED-4CTAGTTTGGTAATATCT

44、CCTTTAAACGTTAATGCTATATCTTATAGGGTAAACATC355-381645-673319sedGSEDR-14GSEDR-2CCAATAATAGGAGAAAATAAAAGATTGGTATTTTTTTTCGTTC492-514750-769278sedSED 15SED 2CTAGTTTGGTAATATCTCCTTAATGCTATATCTTATAGGG355-374653-67231860微生物之葡萄球菌sebSEBU1TGTATGTATGGTGGTGTAACTargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)s

45、egSEG-13SEG-2AAGTAGACATTTTTGGCGTTCCAGAACCATCAAACTCGTATAGC484-505749-770287segSEG-14SEG-2TGCTATCGACACACTACAACCCCAGATTCAAATGCAGAACC79-100765-784704segSEG 15SEG 2TGCTATCGACACACTACAACCCCAGATTCAAATGCAGAACC79-100765-784704sehSEH-13SEH-2GTCTATATGGAGGTACAACACTGACCTTTACTTATTTCGCTGTC554-575745-766213sehSEH-14

46、SEH-2CGAAAGCAGAAGATTTACACGGACCTTTACTTATTTCGCTGTC272-292745-76649561微生物之葡萄球菌TargetingPrimer nameSequence（5TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)seiSEI-13SEI-2GGTGATATTGGTGTAGGTAACATCCATATTCTTTGCCTTTACCAG231-251664-687454seiSEI-14SEI-2GACAACAAAACTGTCGAAACTGCCATATTCTTTGCCTTTACCAG51-72

47、664-685630sejSEJ-13SEJ-2ATAGCATCAGAACTGTTGTTCCGCTTTCTGAATTTTACCACCAAAGG1377-1399不匹配152sejSEJ-14SEJ-2CATCAGAACTGTTGTTCCGCTAGCTGAATTTTACCATCAAAGGTAC1381-14031500-152214262微生物之葡萄球菌TargetingPrimer nameSequence（5非致吐性腸毒素基因序列比對(duì)6株sek6株sel6株sem63微生物之葡萄球菌非致吐性腸毒素基因序列比對(duì)6株sek6株sel6株sem636株sen8株seo5株sep64微生物之葡萄球菌

48、6株sen8株seo5株sep64微生物之葡萄球菌4株seu2株seq65微生物之葡萄球菌4株seu2株seq65微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中非致吐性腸毒素引物TargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)sekSek-11Sek-2TAGGTGTCTCTAATAATGCCATAGATATTCGTTAGTAGCTG47-67320-339293sekSek13sek2TGATACTCCTATAGCTAATCAACTACAACATCAATCTCTTGAGCGGTAACA153-179429-452300selSel-1 1Sel-2TA

49、ACGGCGATGTAGGTCCAGGCATCTATTTCTTGTGCGGTAAC74-94437-458383selSel13sel2ACCAGAATCACACCGCTTAGAATACTGGAATACTACACTCCCCTTATCAAAAG162-186422semSem-1 1Sem-2GGATAATTCGACAGTAACAGTCCTGCATTAAATCCAGAAC177-196536-555379senSen-1 1Sen-2TATGTTAATGCTGAAGTAGACATTTCCAAAATACAGTCCATA82-102343-363282senSen12Sen2GAAATAAATGTG

50、TAGGCTTCTTCTTGTTGGACACCATCTT359-377473-49313566微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中非致吐性腸毒素引物TargetingPrimer naTargetingPrimer nameSequence（53）LocationProduct size(bp)sepSep-1 1Sep-2TGATTTATTAGTAGACCTTGGATAACCAACCGAATCACCAG276-296650-669396sepSep12sep2AGAAGTAACTGTTCAGGAGCTAATCATAACCAACCGAATCAC525-546653-672148seqSeq-1 1Seq-2

51、AATCTCTGGGTCAATGGTAAGCTTGTATTCGTTTTGTAGGTATTTTCG12670-1269112766-12791122seqSeq12seq2TCAGGTCTTTGTAATACAAAATCTGCTTGACCAGTTCCGGT12586-1260612925-12944359seoSeo12seo2TTTGTGTAAGAAGTCAAGTGTAGAAATTCAGCAGATATTCCAT126-148278-297172seoSeo-1 1Seo-2TGTGTAAGAAGTCAAGTGTAGTCTTTAGAAATCGCTGATGA128-148322-341214seuS

52、eu12seu2ATTTGCTTTTATCTTCATGGACTTTAATGTTTGTTTCTGAT135-152279-30116767微生物之葡萄球菌TargetingPrimer nameSequence（517個(gè)粘附因子序列比對(duì)11株cna序列28株eno序列68微生物之葡萄球菌17個(gè)粘附因子序列比對(duì)11株cna序列28株eno序列68微20株icaA序列18株icaD序列2株fnbP序列69微生物之葡萄球菌20株icaA序列18株icaD序列2株fnbP序列69微生126株fnbB序列77株ebpS序列331株clfA序列70微生物之葡萄球菌126株fnbB序列77株ebpS序列331

53、株clfA序列78株fib序列62株sdrD序列68株sdrC序列71微生物之葡萄球菌8株fib序列62株sdrD序列68株sdrC序列71微生物55株sdrE序列12株fbpA序列300株fnbA序列72微生物之葡萄球菌55株sdrE序列12株fbpA序列300株fnbA序列728株bbp序列6株map序列395株cflB序列73微生物之葡萄球菌8株bbp序列6株map序列395株cflB序列73微生物之文獻(xiàn)中17類粘附因子基因序列引物Primer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)F1RAGTGGTTACTAATACTGCAG

54、GATAGATTGGTTTAcna1719-17352882-2911744F3RAAAGCGTTGCCTAGTGGAGAAGTGCCTTCCCAAACCTTTTcna1291-13101463-1482192F4RAAAATGACAAAAATGGCAAGCAGGTTTAGTTGGTGGTGTTcna1616-16352928-29491888F5RCGGGAGATATGCTACCAGAAGATAATAGCCTTGTGGAATTGTTACATCAcna680-703933-957277F1RGATTATGTAATGTGCTTGGAACTACTGCTGCGTTAATAATicaA382-4011

55、132-1151770F2RTtcacatcaagaccatacggttgcttggttagcacctgttgcebpS63-82520-541475F5RAGACCAATCAGAATTAGAACATCATCAGAAACTGTTGAATGCTCAGTGTebpS96-119452-47638074微生物之葡萄球菌文獻(xiàn)中17類粘附因子基因序列引物Primer nameSeqPrimer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)F4RAAGACAATACGCAAACTGCAACTGGTCGTGATTGCATGTTACTACTAGTTTCTs

56、drC248-271不匹配120F5RAGCGGCAATAGGTATTACTACAACTCGAATGTACCATCGTTAAATTCATfib39-63不匹配unknowF2RAcggtccaagagaaaagaaaccttgtccagactacttgcatctgcfib98-119不匹配657F4RGATTCTGACCCAGGTTCAGACTGTATCTGGTAATGGTTCTTTclfA1756-17753106-3127945F6RTGCAACTACGGAAGAAACGCCGCCTCCGCATTTGTATTGCTTGATTGclfA387-408466-490103F7RCATAAATT

57、GGGAGCAGCATCAATCAGCAGCTGAATTCCCATTfnbA151-171不匹配127F3RGATACAAACCCAGGTGGTGGTGTGCTTGACCATGCTCTTCfnbA2026-20452197-2216191F6RCGACACAACCTCAAGACAATAGCGGCGTGGCTTACTTTCTGATGCCGTTCfnbA503-527611-63513275微生物之葡萄球菌Primer nameSequence（53）TargetPrimer nameSequence（53）TargetingLocationProduct size(bp)Bbp-17Bbp-2A

58、ACTACATCTAGTACTCAACAACAGATGTGCTTGAATAACACCATCATCTbbp525-5491074-1098575bbpF17bbpR1ATTACGGATGATTTCACACCAGTTGTTAAATCAAATGTTCCCTTCGCTATTbbp1204-12281254-127976F5RCGGCTAGTGATAATAAAGAAGTAGTGCTTGTTGGAGCTGTAGCAACTGGTTTBbp401-426925-950549F2RCtgacagaggcgttagtgaacgggtcaacgacttgtgtctttccmap773-794不匹配unknowF4R

59、ATGGTGATTCAGCAGTAAATCCCATTATTTGGTGGTGTAACTCTTcflB1634-16552946-2971880F6RTGCAAGTGCAGATTCCGAAAAAAACCCGTCGGTTGAGGTGTTTCATTTGcflB201-225371-394193F5RATTAGTGCAAACACAAACAGTGCGAGTTCCTTGCGCATTGGAAATCGTcflB277-300559-58230576微生物之葡萄球菌Primer nameSequence（53）Target葡萄球菌屬（金黃色葡萄球菌）耐藥基因檢測(cè)77微生物之葡萄球菌葡萄球菌屬（金黃色葡萄球菌）耐藥

60、基因檢測(cè)77微生物之葡萄球SCCmec 簡介SCCmec( staphlocal cassette chromosome )是金葡菌耐藥島，依據(jù)其上的ccr（重組酶）和mec基因序列的不同，分為6類，即、， 大小21-67 kb不等，醫(yī)院獲得性耐藥金葡菌（hospital acquired mutidrug-resistent staphylococcus aureus ,HA）常攜帶、類SCCmec,社區(qū)獲得性耐藥金葡菌（community acquired mutidrug-resistent staphylococcus aureus,CA ）常攜帶、類SCCmec。、類SCCmec基因