乳腺癌細(xì)胞培養(yǎng)

1、, 培養(yǎng)基用 DMEM或 RPMI1640. 一般兩到三天傳一代1ml, 輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶, 培養(yǎng)基用 DMEM或 RPMI1640. 一般兩到三天傳一代1ml, 輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶 ,25min, 待細(xì)胞縮起變圓 , 將胰酶吸出加入培養(yǎng). 我一般都不用緩沖液沖刷, 感覺(jué)效果還不錯(cuò) . 因, 以免消化太過(guò) . 需要, 一般. 該細(xì)胞表達(dá)表皮生長(zhǎng)因子., 而EGF受體、 TGF-之巴公井開(kāi)創(chuàng)作時(shí)間：二 O 二一年七月二十九日MCF-7 是一種很好養(yǎng)的人乳腺癌細(xì)胞均可 , 10 15的小牛血清就能長(zhǎng)得很好傳代也很慣例 . 吸出培養(yǎng)基 , 加入的胰酶使胰酶流遍瓶壁 , 以去除殘余的培養(yǎng)基 . 再加入 2m

2、l 胰酶（ 25ml 培養(yǎng)瓶）靜置消化基 3ml 奏樂(lè)成單細(xì)胞懸液分瓶即可直接用胰酶沖刷一下以去除剩余血清的作用為 MCF-7消化較快 , 一般不放到培養(yǎng)箱中消化注意的是 MCF-7生長(zhǎng)較快如不及時(shí)傳代可呈現(xiàn)整瓶細(xì)胞浮起都來(lái)不及搶救 .MDA-MB-231人乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞中文名稱(chēng)人乳腺癌細(xì)胞細(xì)胞英文名稱(chēng) MDA-MB-231物種人細(xì)胞形態(tài)特征上皮樣細(xì)胞生長(zhǎng)特性貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞特種特性 MDA-MB-231是從一名 51 歲的白人女性乳腺癌患者的胸水中分離建立的受體和 WNT7B癌基因培養(yǎng)基 L15: Leibovitz Medium時(shí)間：二O二一年七月二十九日傳代；每周 23 次溶液, 消化傳代；

3、每周 23 次溶液, 消化 5-, 投入 37 , 加入 5 ml 37 預(yù)熱的培養(yǎng)min）, 棄去Hs 578Bst 規(guī)格： 70%密度的4-5 代左右包裝：內(nèi)血清 10%FBS細(xì)胞傳代方法 1:21:4細(xì)胞傳代情況 C5細(xì)胞凍存條件 MDA-MB-231 人乳腺癌細(xì)胞 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS支原體檢測(cè)陰性說(shuō)明培養(yǎng)基： DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%培養(yǎng)條件： 37 5% CO2消化條件： 0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA10min傳代的比例： 1：21：4換液時(shí)間： 23 天換液一次凍存液比例： 85%培養(yǎng)基

4、,10%FBS, 5% (v/v) DMSO凍存密度： 1-2 10 6/ 管 , 液氮保管MDA-MB-231 人乳腺癌細(xì)胞 復(fù)蘇方法：取出凍存管后水浴中 , 震蕩解凍 2 min, 酒精消毒管壁外側(cè)后 , 將其轉(zhuǎn)入超凈臺(tái)中, 將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中基, 并清洗凍存管一次 , 將離心管離心（ 1000 rpm,5 上清液 , 再加入 2 ml 培養(yǎng)基 , 轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng) .產(chǎn)物名稱(chēng)： 人正常乳腺細(xì)胞25cm2培養(yǎng)瓶的細(xì)胞一瓶特點(diǎn)：細(xì)胞代數(shù)為時(shí)間：二O二一年七月二十九日、ICLC 7 天, 如發(fā)現(xiàn), 死亡, 快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)E-mail 致銷(xiāo)售人員 , 我們將盡快為您, 、ICLC 7

5、天, 如發(fā)現(xiàn), 死亡, 快遞運(yùn)輸?shù)仍颍r(shí)E-mail 致銷(xiāo)售人員 , 我們將盡快為您, 須立即放入 37 水槽中1 分鐘內(nèi)全部融化 , 并注意水面不成, 是否應(yīng)馬上去除,10-15ml 新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中DMSO 即可, 如此可防止年夜部份. . 每一細(xì)胞株均, 若驟然使用和原先提供之培, 細(xì)胞年夜都無(wú)法立即適應(yīng). 血清是細(xì)胞, 應(yīng)出具書(shū)面DMSO？除少數(shù)特別注, 造成細(xì)胞無(wú)法存層無(wú)菌自封袋；專(zhuān)用防壓泡沫盒；外層防壓保溫氣泡袋；說(shuō)明書(shū)細(xì)胞來(lái)源： ATCC、sciencell貨期： 1-2 周運(yùn)輸方式：快遞運(yùn)輸售后：收到細(xì)胞后細(xì)胞有質(zhì)量問(wèn)題（如污染質(zhì)量問(wèn)題陳說(shuō)并及時(shí)傳真或解決.細(xì)胞培養(yǎng)罕見(jiàn)

6、問(wèn)題分析細(xì)胞培養(yǎng)1、冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后快速解凍 , 輕搖冷凍管使其在超越冷凍管蓋沿 , 否則易發(fā)生污染情形 . 另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí) , 必需注意平安 , 預(yù)防冷凍管之爆裂 . 2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí)明對(duì) DMSO 敏感之細(xì)胞外 , 絕年夜部份細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）在解凍之后 , 應(yīng)直接放入含有待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題3、可否使用與原先培養(yǎng)條件分歧之培養(yǎng)基？不能有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基養(yǎng)條件分歧之培養(yǎng)基活. 4、可否使用與原先培養(yǎng)條件分歧之血清種類(lèi)？不能時(shí)間：二O二一年七月二十九日, 所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)細(xì)胞的. 來(lái)自分歧物種

7、的血清 , 在一些物質(zhì)或分, 血清使用毛病常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存）和 FCS （fetal calf serum, FCS 乃毛病的使用字, 所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)細(xì)胞的. 來(lái)自分歧物種的血清 , 在一些物質(zhì)或分, 血清使用毛病常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存）和 FCS （fetal calf serum, FCS 乃毛病的使用字眼 , 請(qǐng)不要5 % 或 10% CO2？或根本沒(méi)有影響？一般培HCO3-/CO32-/H+ 作為 pH 的緩沖系統(tǒng) , 而培養(yǎng)CO2 濃度. 當(dāng)培養(yǎng)10 % , 或遵照細(xì)胞株基本, 一般正. trypsin-EDTA 濃度？應(yīng)如何處trypsin-EDTA , 保管于）是相濃度為

8、0.05% trypsin-培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源生長(zhǎng)會(huì)發(fā)生極年夜的影響子的量或內(nèi)容物上都有所分歧活. 5、何謂 FBS, FCS, CS, HS ? FBS （fetal bovine serum同的意思 , 兩者都是指胎牛血清再使用 .CS （calf serum ）則是指小牛血清 .HS （horseserum ）則是指馬血清 . 6、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用養(yǎng)基中年夜都使用基中 NaHCO3 的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的基中 NaHCO3 含量為每公升 3.7 g 時(shí), 細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中 NaHCO3 為每公升 1.5 g 時(shí), 則應(yīng)使用 5 % CO2 培養(yǎng)細(xì)胞 .

9、 7、何時(shí)須更換培養(yǎng)基？視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間 , 按時(shí)更換培養(yǎng)基即可 . 8、培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？除于特殊篩選系統(tǒng)中外常培養(yǎng)狀態(tài)下 , 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素9、附著性細(xì)胞繼代時(shí)所使用之置？一般使用之0.53mMEDTA.4 Na.次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中時(shí)間：二O二一年七月二十九日trypsin , 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當(dāng)濃度, 其離心速率應(yīng)為幾多轉(zhuǎn)速？欲回300 xg （約 1,000rpm ）,5 - 10 . 細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞. 5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxidetrypsin , 加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至

10、適當(dāng)濃度, 其離心速率應(yīng)為幾多轉(zhuǎn)速？欲回300 xg （約 1,000rpm ）,5 - 10 . 細(xì)胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細(xì)胞. 5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide. 注意：由于, 故不成將 DMSO 直接加入細(xì)胞液. DMSO 之 DMSO （如 Sigma D2650）, 次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì)之活性降低 , 并可減少, 重）和 90 , 保,20 , 防止反復(fù)冷凍解凍造成污染之機(jī)會(huì) . 10、懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何繼代處置？一般僅需繼續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中 , 稀釋細(xì)胞濃度即可 , 若培養(yǎng)液太多時(shí) , 可將

11、培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高 , 直到無(wú)法容納為止 . 分瓶時(shí)取出一部份含細(xì)胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶復(fù)前述步伐即可 . 11、欲將一般植物細(xì)胞離心下來(lái)收植物細(xì)胞 , 其離心速率一般為分鐘, 過(guò)高之轉(zhuǎn)速 , 將造成細(xì)胞死亡 . 12、細(xì)胞之接種密度為何？依照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤(pán)之比例接種即可無(wú)法生長(zhǎng)之一重要原因13、細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成分為何？植物細(xì)胞冷凍保管時(shí)最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含- 95 % 原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出年夜量熱能中, 必需使用前先行配制完成14、DMSO 之品級(jí)和無(wú)菌過(guò)濾之方式為何？冷凍保管使用之品級(jí), 必需為 Tissue cul

12、ture grade其自己即為無(wú)菌狀況管于 4, 防止反復(fù)冷凍解凍造成時(shí)間：二O二一年七月二十九日. 若要過(guò)濾 DMSO,則須使用耐 DMSO 之 Nylon : 冷凍管置于 . 若要過(guò)濾 DMSO,則須使用耐 DMSO 之 Nylon : 冷凍管置于 41-3 至 80 以. 1x106 cells/ml vial,為宜. . 主要的污染原因?yàn)闊o(wú)菌把持技術(shù)不妥、. 嚴(yán)格之無(wú)菌把持技, 應(yīng)如何處置？加入相應(yīng)抗生素, 年夜大都遭受支原體污染的細(xì)胞融合瘤細(xì)胞則以.5x106 并可減少污染之機(jī)會(huì)材質(zhì)濾膜 . 15、冷凍保管細(xì)胞之方法？冷凍保管方法一3060 分鐘（ -20 30 分鐘*） -80 1

13、618 小時(shí)（或隔夜） 液氮槽 vaporphase 長(zhǎng)期貯存 . 冷凍保管方法二 : 冷凍管置于已設(shè)定法式之可法式降溫機(jī)中每分鐘降下, 再放入液氮槽 vapor phase 長(zhǎng)期貯存 .*-20 不成超越 1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)年夜 , 造成細(xì)胞年夜量死亡 , 亦可跳過(guò)此步伐直接放入-80 冰箱中 , 惟存活率稍微降低一些15、細(xì)胞欲冷凍保管時(shí) , 細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有幾多細(xì)胞濃度？冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為cells/ml vial 16、應(yīng)如何防止細(xì)胞污染？細(xì)胞污染的種類(lèi)可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌把持室環(huán)境欠安、污染之血清和污染之細(xì)胞等術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)基配

14、制是減低污染之方法 . 17、如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)直接滅菌后拋棄之 . 18、支原體（ mycoplasma）污染的細(xì)胞 , 是否能以肉眼觀(guān)察出異狀？不能 . 除極有經(jīng)驗(yàn)之專(zhuān)家外株, 無(wú)法以其外觀(guān)分辨之 . 時(shí)間：二O二一年七月二十九日, 代謝及研究之任一數(shù)據(jù). . 4 冰箱中 , 顏色會(huì)偏暗紅色 , 且 pH值會(huì)4 , 代謝及研究之任一數(shù)據(jù). . 4 冰箱中 , 顏色會(huì)偏暗紅色 , 且 pH值會(huì)4 冰箱中 , 培養(yǎng)基內(nèi)之 CO2 會(huì)逐. 而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑（通. 培養(yǎng)基偏. 若培養(yǎng)基偏堿時(shí) , 可以通入dish,flask, 惟少數(shù)細(xì)胞則可能因使用廠(chǎng)而有顯著之生長(zhǎng)不同 . , 為何會(huì)

15、發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情, 罕見(jiàn)原因可歸納為：培養(yǎng)基使用毛病或. 解凍過(guò)程毛病 . 培, 瓶蓋有裂紋 , 或瓶蓋脫落之原因？冷. 故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前 , 必需是否均相同？分歧廠(chǎng)牌的19、支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù)確認(rèn)細(xì)胞為 mycoplasma-free, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義20、CO2 培養(yǎng)箱之水盤(pán)如何堅(jiān)持清潔？按期（至少每?jī)芍芤淮危┮詿o(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子水更換之21、為何培養(yǎng)基保管于越來(lái)越偏堿性？培養(yǎng)基保管于漸溢出 , 造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性常為 phenol red ）的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅堿之結(jié)果 , 將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡無(wú)菌過(guò)濾之

16、CO2,以調(diào)整 pH 值. 22、各種細(xì)胞培養(yǎng)用的dish 或 flask, 其所 coating 的 polymer 分歧, 制造法式亦分歧 ,雖對(duì)年夜部份細(xì)胞沒(méi)有太年夜之影響牌分歧之 dish 或 flask 23、購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后形？購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率欠安可能原因？研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)呈現(xiàn)存活率欠安培養(yǎng)基品質(zhì)欠安 . 血清使用毛病或血清的品質(zhì)欠安冷凍細(xì)胞解凍后 , 加以洗滌細(xì)胞和離心 . 懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞養(yǎng)溫度使用毛病 . 細(xì)胞置于 80太久 . 24、收到之冷凍管瓶身破裂時(shí)間：二O二一年七月二十九日. 另冷凍管瓶蓋松, 冷凍管有可能因此而造成細(xì), 均應(yīng)立刻將冷凍管再

17、一, 各種目的無(wú)血清培養(yǎng)首選. 脫失落氨基后 . 另冷凍管瓶蓋松, 冷凍管有可能因此而造成細(xì), 均應(yīng)立刻將冷凍管再一, 各種目的無(wú)血清培養(yǎng)首選. 脫失落氨基后 ,L- 谷氨酰胺可.L- 谷氨, 可是確切的降解率一直沒(méi)有, 而氨對(duì)一些細(xì)胞具有GlutaMAX-I ？這個(gè)二, 釋放 L-谷氨酰胺, 如果在相同條件下 ,L- 谷AIM V凍管瓶蓋裂紋 , 或瓶身破裂 , 可能是因?yàn)榘殉终邐A取冷凍管時(shí)用力不妥, 造成冷凍管裂損 , 建議使用止血鉗小心夾取動(dòng)或松脫 , 乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象胞污染 , 故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)次扭緊 . 25、如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某一類(lèi)型細(xì)胞沒(méi)有固定的培養(yǎng)

18、條件 . 在 MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞 , 很可能在 DMEM或 M199中同樣很容易生長(zhǎng) . 總之 , 首選 MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、 RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開(kāi)始（12005）培養(yǎng)基（ SFM）. 26、L- 谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L- 谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、介入卵白質(zhì)的合成和核酸代謝酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解最終定論 .L- 谷氨酰胺的降解招致氨的形成毒性. 27、GlutaMAX-I 是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用肽有多穩(wěn)定？GlutaMAX-I 二肽是一個(gè) L- 谷氨酰胺的衍生物 , 其不穩(wěn)定的 alpha-氨基用 L- 丙氨酸來(lái)呵護(hù) . 一種肽酶逐漸裂解二肽供利用 .GlutaMAX-I 二肽非常穩(wěn)定 , 即使在 121磅滅菌 20分鐘,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解時(shí)間：二O二一年七月二十九日. , 酸性時(shí)為黃色 , 堿性時(shí)為紫色 . 研, （特別是雌激素） . , 酸性時(shí)為黃色 , 堿性時(shí)為紫色 . 研, （特別是雌激素） . 為防, 不使用, 可是, 如果. EDTA的.EDTA用來(lái)螯合游, 以便堅(jiān)持抑制胰卵白酶的活性HBS）和, 在 Eagles （）中比CO2平衡, 以維持溶液CO2 中, 溶液會(huì)變堿 ,Han