動物細胞培養(yǎng)(三佰)課件

1、細胞工程 細胞工程是指應用細胞生物學和分子生物學的原理和方法，通過 或細胞器水平上的操作，按照人們的意愿來改變細胞內(nèi)的遺傳物質(zhì)或獲得細胞產(chǎn)品的一門綜合科學技術。按操作對象分植物細胞工程動物細胞工程研究的水平研究的目的細胞水平一、概念動物細胞工程：動物細胞培養(yǎng)、動物細胞核移植、動物細胞融合、生產(chǎn)單克隆抗體等 動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎選修3 現(xiàn)代生物科技專題教學目標重點難點問題探討教學過程知識結構教學反饋課后習題教學參考2.1 動物細胞培養(yǎng)問題討論燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，請同學們想一想如何來治療該病人？取該

2、患者的皮膚進行細胞培養(yǎng),獲得足量的細胞后再移植情景導入暢想動物細胞培養(yǎng) 從動物機體中取出相關的組織或器官，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。原理：細胞增殖概念結果：獲得細胞群1、無菌、無毒的環(huán)境 （添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、動物血清、血漿等。）3、溫度和PH 36.5 +0.5度 ；PH為7.2-7.4。4、氣體環(huán)境： O2和CO2（95%空氣和5% CO2 ）補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)動物細胞培養(yǎng)條件防止代謝產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害 溫熱的鹽水：滿足細胞對水分、溫度和無機鹽的要求，同時，無機鹽離子對維持

3、細胞生存所必需的滲透壓平衡，離子平衡，PH恒定都起著重要作用。動物血清：提供基本的營養(yǎng)物質(zhì)，如：氨基酸、維生素、無機物、脂質(zhì)、核酸衍生物等，它們都是細胞生長所必需的物質(zhì)，還可以提供激素和各種生長因子，如：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素、血小板生長因子等。雞胚浸出液：與動物血清相似，含有多種促進細胞生長的營養(yǎng)物質(zhì) 培養(yǎng)器皿動物細胞培養(yǎng)請同學們閱讀課本后，簡述動物細胞培養(yǎng)的基本過程？ 注意關鍵詞: 細胞貼壁 接觸抑制 原代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng)培養(yǎng)過程思考題1、為什么選用動物胚胎或幼齡動物的組織、器官做動物培養(yǎng)材料？2、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？3、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？4、胰蛋白

4、酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質(zhì)是什么成份？這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細胞的生長和增殖先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質(zhì)細胞間的成份是蛋白質(zhì)思考題5、細胞膜的主要成份是什么？6、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？7、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？8、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？蛋白質(zhì)和磷脂能注意時間的控制不能，因為兩的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近思考題11、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？12、傳代培養(yǎng)的細胞能有些為何能一直傳下去？上述過程中，在

5、第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是原代培養(yǎng)，之后轉(zhuǎn)移到其它培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就是傳代培養(yǎng)發(fā)生突變，朝著癌細胞方向發(fā)展動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液10代細胞50代細胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細胞加培養(yǎng)液原代培養(yǎng)胰蛋白酶剪碎過程：細胞株細胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變細胞株：原代細胞一般傳至10代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)細胞存活到4050代，這種傳代細胞為細胞株。 細胞系：細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培

6、養(yǎng)。解答概念原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。解答概念原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)時間機體取出后立即培養(yǎng)將原代細胞分瓶繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)代數(shù)110代 10代以后遺傳物質(zhì)是否改變不改變改變，并有癌細胞特點細胞名稱細胞懸浮液細胞株、細胞系（1）生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品：酶、生長因子、病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（2）獲得大量自身的皮膚細胞，用于植皮。（3）用于檢測有毒物質(zhì)和藥物。（4）用于生理、病理、藥理等方面的研究，為治療和預防疾病提供理論依據(jù)動物細胞培養(yǎng)技術的應用知識小結動物細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)的應用和概念細胞培養(yǎng)的過程細胞培養(yǎng)的條件細胞培養(yǎng)技術的應用教學參考 1.進行動物細胞傳代培養(yǎng)時用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質(zhì)主要是什么成分？用胃蛋白酶行嗎？ 細胞間的成分主要是蛋白質(zhì)。胃蛋白酶適宜的PH約為2，當PH6時，胃蛋白酶就會失去活性，而胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境PH為7.2-8.4，多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜PH為7.2-7.4，胃蛋白酶在此環(huán)境中沒有活性。胰蛋白酶在此環(huán)境中活性較高，因此胰蛋白酶適宜用于細胞培養(yǎng)時的消化。 2.胰蛋白酶真的不會把細胞消化掉嗎？為什么？ 胰蛋白酶除了可以消化細胞間的蛋白質(zhì)外，長時間的作用也會消化細胞