液質(zhì)聯(lián)用缺點及解決辦法,藥物分析課件

1、LC-MS法在體內(nèi)藥物分析研究中的常見問題姓名：黃小燕班級：D2J6班1測定對象的局限性2多種待測物的同時測定3基質(zhì)效應4專屬性結果的可靠性5殘留效應 雖然 LC-MS 技術在體內(nèi)藥物分析中的適用范圍極廣, 但是仍有一些類型的化合物不適合直接采用LC-MS 進行測定, 或者在特定的條件下直接采用LC-MS 分析不能達到靈敏度等要求。通常這樣的情況還需要采用衍生化法或者其他更進一步的處理而使得檢測復雜化。一、測定對象的局限性1、小分子非極性化合物 目前利用大氣壓化學離子化(APCI)、大氣壓光電離化(APPI)等基于氣相的離子化技術分析非極性化合物能夠獲得較為理想的質(zhì)譜響應，但是對于某些極性極弱

2、的小分子化合物，由于缺乏可解離的基團，無論采用何種離子化模式均難滿足測定的需求，其中比較有代表性的是一些小分子醛、酮類化合物。2 、小分子極性化合物 該類化合物中一些極性基團雖然能夠有效地促進待測物解離,但是往往缺乏適當?shù)氖杷Y構以幫助其更好地霧化，同時也缺乏在常用的反相色譜柱上的適當色譜保留。如氨基酸類、含有羧基的小分子化合物以及嘌呤嘧啶拮抗物。含有羧基的小分子化合物 大多數(shù)羧基化合物在負離子條件下都能獲得較高的質(zhì)譜響應，但是對于一些結構較小并且極性較大的羧酸化合物，無論是質(zhì)譜響應還是色譜保留行為均不理想，同時由于其較強的親水性，也不利于樣品的處理。嘌呤、嘧啶拮抗物 通過干擾 DNA 的合成

3、抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中必經(jīng)的代謝路徑，臨床上通常用于白血病的治療。但是其極性很強，且缺乏合適的離子化官能團而難以直接用液質(zhì)聯(lián)用進行檢測。4、蛋白質(zhì)以及多肽 目前常用的手段之一就是將待測蛋白質(zhì)酶解為肽段后進行 LC-MS 分析。然而該法在實際操作中極其困難, 其中一個主要的問題就是蛋白經(jīng)酶解后生成的肽段親水性太強，不利于樣品的處理和色譜保留。 對于復方制劑，當存在兩種或多種藥物的劑量相差懸殊的情況時，通常會導致各個待測物在生物體液中的濃度相差巨大，因而符合它們各自藥代動力學研究的藥物濃度的線性范圍也相差甚遠。此時需要對各個待測物的質(zhì)譜響應、線性范圍和靈敏度三者進行綜合考慮。二、多種物質(zhì)的同時測定

4、 雖然也有研究者嘗試采用曲線回歸法校正濃度與響應之間的非線性關系, 但是該法的耐用性仍然是個未知數(shù)。若不進行濃縮處理甚至為了保證良好的線性而稀釋待測成分, 血藥濃度低的成分的質(zhì)譜響應就會降低，可能不能滿足藥動學研究所需要達到的靈敏度。 基質(zhì)效應是指色譜分離時共洗脫的物質(zhì)改變了待測成分的離子化效率，所引起的信號的抑制或提高。 由于基質(zhì)效應的出現(xiàn)可能在很大程度上破壞響應的穩(wěn)定性以及結果的重現(xiàn)性，因此許多學者將其視為 LC-MS 技術最大的軟肋。三、基質(zhì)效應 有文獻報道，即便在方法學的考察中證明了沒有基質(zhì)效應的存在，在實際的樣品測定中仍然需要對所得結果進行仔細的檢驗和分析，因為不同批次的空白樣本、不

5、同的受試者樣本以及長時間的連續(xù)分析等因素都可能造成“新的”基質(zhì)效應。方法依據(jù) 調(diào)節(jié)色譜保留 適當?shù)纳V保留可以使待測物與引起基質(zhì)效的內(nèi)源性物質(zhì)分開，并使大多數(shù)內(nèi)源性基質(zhì)在死時間附近被洗脫，不進入質(zhì)譜系統(tǒng) 改善色譜峰形 內(nèi)源性基質(zhì)造成的競爭性離子化抑制往往具有濃度依賴性，良好的色譜峰形可以保證待測物流出色譜柱時盡可能得到富集和濃縮，進而降低基質(zhì)效應產(chǎn)生的可能性梯度洗脫 當基質(zhì)效應是來自未完全洗脫的前一次或前幾次進樣引入的內(nèi)源性物質(zhì)時，采用梯度洗脫是必需的。即等待測物出完色譜峰后，大幅度提高流動相的洗脫能力，將本次進樣帶入色譜系統(tǒng)的內(nèi)源性物質(zhì)全部洗脫下來，以免干擾后續(xù)樣品的分析 加入添 加劑 在流

6、動相中加入少量添加劑，如甲酸、乙酸、醋酸銨等，能夠有效地降低基質(zhì)帶來的背景干擾 改善色譜條件消除基質(zhì)效應的主要方法及其依據(jù) 雖然目前質(zhì)譜的選擇性是其他檢測器難以比擬的，但高通量 LC-MS 分析有時會導致假陽性結果的出現(xiàn)，進而降低測定結果的可靠性。特別是當待測樣品中存在原型藥物的 II相代謝物時，假陽性結果出現(xiàn)的幾率會更高。這是因為這類代謝物容易在離子源內(nèi)發(fā)生中性丟失反應形成與母體藥物相同的離子，從而影響對后者的準確定量 質(zhì)譜的專屬性有時還會受到其自身分辨力的限制，尤其是當監(jiān)測對象為單個離子或是偽離子對時，這種現(xiàn)象更為明顯。四、專屬性結果的可靠性 殘留效應是指在高濃度的樣品進樣分析后，在進樣系

7、統(tǒng)中殘留了一定量的待測物，從而影響了下一次進樣時低濃度樣品測定結果的準確度。生物樣品中待測物的濃度相差很大，高濃度樣品與低濃度樣品中待測物的濃度可能相差幾百倍甚至幾千倍，因此殘留效應是LC- MS 在體內(nèi)藥物分析中遇到的“常見問題”。 殘留效應產(chǎn)生的原因可能是清洗自動進樣針的溶劑選擇不當、洗針和進樣程序設計不合理或者是進樣針座吸附了待測物五、殘留效應 現(xiàn)在要檢測一個化合物，但是在這個過程中受到另個化合物的影響。影響物質(zhì)比目標藥物的分子量小1，而且它的濃度是被監(jiān)測的目標藥物的20倍，以0.1%的甲酸水和甲酸乙腈溶液為流動相分析時，保留時間非常接近，跑了20min也沒有分開。這個問題該怎么解決呢？1）嘗試不同的色譜柱（費時間，可行性不大）尋求兩組分的分