專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課件

1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 一、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 1.微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) (1)培養(yǎng)基 概念:人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求, 配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。 分類(lèi)a按培養(yǎng)基的物理性質(zhì)可以分為液體培養(yǎng)基 和固體培養(yǎng)基。b按培養(yǎng)基的用途可以分為選擇培養(yǎng)基和鑒 別培養(yǎng)基。 培養(yǎng)基配方及營(yíng)養(yǎng)要素 基本營(yíng)養(yǎng)要素：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽。此外還要滿足不同微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的需求。 無(wú)菌技術(shù)主要操作要求 a實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)操作空間、操作人員消毒，對(duì)所用器具和培養(yǎng)基滅菌。 b實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)需在酒精燈火焰周?chē)鸁o(wú)菌區(qū)操作，另外要避免已滅菌處理材料再次污染。 (2)無(wú)菌技術(shù) 用

2、酒精消毒時(shí)，70%的酒精殺菌效果最好， 原因是：濃度過(guò)高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保 護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中； 濃度過(guò)低，殺菌力減弱。 2純化大腸桿菌以及菌種的保藏 (1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基： 計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板?！居亚樘嵝选科桨謇淠螅笊w上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的溫度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)；又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(2)純化大腸桿菌 原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其長(zhǎng)成單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是一個(gè)純化的細(xì)菌菌落。 （2）接種操作: 第一步:灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微 生物污

3、染培養(yǎng)基； 每次劃線前:灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后， 接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)， 接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末 端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃 線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落 劃線結(jié)束后:灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的 菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 (3)菌種的保藏 短期保存：固體斜面培養(yǎng)基上4 保存，菌種 易被污染或產(chǎn)生變異。 長(zhǎng)期保存：20 甘油管在冷凍箱中保藏。 (3)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌及消毒方法依次是() 化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法 A B C D 【答案】

4、(1)葡萄糖尿素 (2)有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏┮坏?，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng) (3)A 二、土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù) 1分離的原理 土壤中的細(xì)菌能合成脲酶，能把尿素分解成無(wú)機(jī)物。2分離分解尿素的細(xì)菌所使用的特定培養(yǎng)基培養(yǎng)基:選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的氮源只有尿素，理論上只有能合成脲酶的微生物才能在上面生長(zhǎng)。 KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO47H2O 0.2 g 葡萄糖 10.0 g 尿素(惟一氮源) 1.0 g 瓊脂 15.0 g 將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000 mL。3統(tǒng)計(jì)菌體數(shù)目的方法 (1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 原理：

5、利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量。 方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。 (2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法) 原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。 【例2】可以鑒定出分解尿素的細(xì)菌的方法是() A以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑 B以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入二苯胺試劑 C以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入蘇丹試劑 D以尿素為惟一氮源的培養(yǎng)基中加入雙縮脲試劑 A (2)實(shí)驗(yàn)流程 土壤取樣：富含纖維素的環(huán)境。 選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基

6、培養(yǎng)，以增加纖維素分解菌的數(shù)量。 梯度稀釋 涂布平板：將樣品涂布于鑒別(含CR的)纖維素分解菌的培養(yǎng)基(固體)。 挑選產(chǎn)生透明圈的菌落：產(chǎn)生纖維素酶的菌落周?chē)霈F(xiàn)透明圈。1.(2011新課標(biāo))有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出能高效降解原油的菌株?；卮饐?wèn)題：(1)在篩選過(guò)程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以 為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上。從功能上講，該培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。(2)純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，即 和 。原油選擇平板劃線法稀釋涂布平板法2.某同學(xué)在做細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)：某種細(xì)菌(記作S)的周?chē)渌?xì)菌的生長(zhǎng)繁殖

7、受到抑制。他認(rèn)為，最可能的原因是S細(xì)菌產(chǎn)生了一種不利于其他細(xì)菌生存的物質(zhì)。為驗(yàn)證這一假設(shè)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均使用相同的培養(yǎng)基，正確的接種方法應(yīng)是( )DA實(shí)驗(yàn)組接種S細(xì)菌，對(duì)照組接種其他細(xì)菌B實(shí)驗(yàn)組接種其他細(xì)菌，對(duì)照組接種S細(xì)菌C實(shí)驗(yàn)組接種其他細(xì)菌，對(duì)照組不接種，一段時(shí)間后，除去其他細(xì)菌，兩組再分別接種相同的S細(xì)菌D實(shí)驗(yàn)組接種S細(xì)菌，對(duì)照組不接種，一段時(shí)間后，除去S細(xì)菌，兩組再分別接種相同的其他細(xì)菌 【解析】根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康目芍?，?shí)驗(yàn)的變量是S細(xì)菌所產(chǎn)生的物質(zhì)，所以實(shí)驗(yàn)組先接種S細(xì)菌，一段時(shí)間后去除S細(xì)菌，其產(chǎn)生的物質(zhì)殘留在培養(yǎng)基中，而對(duì)照組不接種，然后再分別接種相同的其他細(xì)菌來(lái)檢驗(yàn)抑制物質(zhì)是否存在。3.請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：(1)稀釋涂布平板法分離純化土壤中