本微生物感染的檢查法第7章課件

1、1第7章 細菌與病毒的微生物學(xué)檢查法p83病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室 潘鳳蘭 副教授 聯(lián)系方式：81487384 (o)2病例分析 某女50歲，咳嗽發(fā)燒（39）入院，診斷為細菌感性氣管炎，青霉素常規(guī)治療3天病情未有好轉(zhuǎn)，后根據(jù)檢驗報告改用紅霉素治療， 2天病情明顯好轉(zhuǎn)，5天后病人康復(fù)出院。 檢驗科對病人做了什么檢驗？3一 實驗室診斷方法:1 顯微鏡2 分離培養(yǎng)3 免疫學(xué)技術(shù)4 分子生物學(xué)方法4二 標(biāo)本采集與送檢原則1 無菌操作2 選擇感染部位、病變明顯部位3 最佳時間、適宜標(biāo)本4 細菌：使用抗生素前 病毒：應(yīng)加入抗生素 5 查抗體：急性期 恢復(fù)期 升高4倍6 及時送檢：病毒標(biāo)本加入含抗生素的50

2、%甘油緩沖鹽水液中冷藏速送5第一節(jié) 細菌感染的微生物檢查法一 細菌學(xué)診斷（一）形態(tài)學(xué)檢查Escherichia coliStaphylococcus aureus7（三）生化試驗8（四）血清鑒定 抗原 + 抗體102 接種途徑 3 內(nèi)毒素檢測：鱟試驗11（六）毒力檢測 體內(nèi)： LD50 ID50 體外：Elek平板12（七）藥物敏感試驗 紙碟法、試管法 14（二）核酸的檢測1 核酸雜交技術(shù)（1）原理 （2）種類：Southern印跡雜交（ Southern blot） Northern印跡雜交（Northern blot） 斑點雜交 原位雜交 （3）優(yōu)點：快速、敏感（0.05pg/l）、特異1

3、52、聚合酶鏈反應(yīng)（ polymerase chain reaction ，PCR ）體外DNA擴增技術(shù)（106），在DNA擴增儀上進行適用于難以培養(yǎng)的細菌引起的疾病如結(jié)核、慢性淋病、梅毒等優(yōu)點：快速、敏感（pg/l）、特異17第7章 第二節(jié)p88 病毒感染的微生物學(xué)檢查法18病毒實驗室檢查內(nèi)容病毒的形態(tài)學(xué)檢查病毒分離培養(yǎng)的方法病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的鑒定指標(biāo)病毒的成分檢測病毒抗體的檢測19病毒體的形態(tài)學(xué)檢測 Morphology1.光學(xué)顯微鏡： 細胞病變：包涵體，多核巨細胞2. 電鏡檢查：直接電鏡法免疫電鏡法20輪狀病毒負(fù)染的電鏡照片21動物接種:利用已知或建立新動物模型雞胚接種:適用多種病毒

4、接種組織培養(yǎng):器官培養(yǎng),組織培養(yǎng),細胞培養(yǎng) 細胞培養(yǎng): *原代細胞系 （23代） *二倍體細胞系 （4050代） *傳代細胞系（Henrietta Lacks cells - HeLa cells） 病毒分離培養(yǎng)的方法22絨毛尿囊膜接種痘病毒單純皰疹病毒卵黃囊接種嗜神經(jīng)病毒羊膜腔接種流感病毒初次分離尿囊腔接種流感病毒腮腺炎病毒氣室24細胞病變效應(yīng)(cytopathic effect ,CPE) 多數(shù)病毒在細胞內(nèi)增殖,可引起細胞形態(tài)學(xué)改變。 細胞圓縮、溶解、脫落甚至死亡 形成多核巨細胞 在細胞核或漿內(nèi)形成包涵體25正常細胞病變細胞27red bloodcell紅細胞凝集virus+suscept

5、iblecells+viruses releasedfrom the cells 28 病毒干擾作用 某些病毒感染細胞后，不產(chǎn)生CPE及其它變化，但卻能阻止后一種病毒在該細胞內(nèi)的增殖。 通過此現(xiàn)象可測出一些不引起CPE、血凝或血吸現(xiàn)象的病毒。29YYY+virusknownantiserumCPE ?virusblockedsusceptiblecellsYYYYYYYY+中和試驗30空 斑 plaque由病毒感染細胞后在培養(yǎng)瓶的瓊脂層上形成的一個壞死病灶空斑形成單位 PFU (plaque formation unit) 一個病毒感染細胞形成的空斑31免疫熒光技術(shù)(IFA)酶免疫技術(shù)(EIA

6、)四、病毒成分檢測 （一）病毒抗原檢測32Enzyme Immuno Assay (EIA) AgAb331、核酸雜交 dot blot hybridization Southern blot hybridization Northern blot hybridization in situ hybridization 2、聚合酶鏈反應(yīng) PCR 核酸擴增（二） 病毒核酸的檢測34五、病毒抗體的檢測（血清學(xué)診斷）方法：紅細胞凝集抑制試驗 酶聯(lián)免疫吸附試驗抗體效價+病人血清（未知抗體）病毒或其抗原（已知）351、紅細胞凝集抑制試驗 檢查血凝素抗體2、ELISA36雙份血清IgG抗體效價4倍升高，具有診斷價值Re-infection371、進行病毒病原學(xué)檢查的組織標(biāo)本遞送要求是 A、暖箱保存 B、室溫保存 C、加入防腐劑 D、冷藏