藥物代謝動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)講義

1、實(shí)驗(yàn)一藥酶誘導(dǎo)劑及抑制劑對(duì)戊巴比妥鈉催眠作用的影響【目的】以戊巴比妥鈉催眠時(shí)間作為肝藥酶體內(nèi)活性指標(biāo)，觀察苯巴比妥及氯霉素對(duì)戊巴比妥鈉催眠作用的影響，從而了解它們對(duì)肝藥酶的誘導(dǎo)及抑制作用?！驹怼勘桨捅韧诪楦嗡幟刚T導(dǎo)劑，可誘導(dǎo)肝藥酶活性，使戊巴比妥鈉在肝微粒體的氧化代謝加速，藥物濃度降低，表現(xiàn)為戊巴比妥鈉藥理作用減弱，即催眠潛伏期延長(zhǎng)，睡眠持續(xù)時(shí)間縮短。而氯霉素則為肝藥酶抑制劑，能抑制肝藥酶活性，導(dǎo)致戊巴比妥鈉藥理作用增強(qiáng)，即催眠潛伏期縮短，睡眠持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)。【動(dòng)物】小白鼠8只，1822g【藥品】生理鹽水、0.75%苯巴比妥鈉溶液、0.5%氯霉素溶液、0.5%戊巴比妥鈉溶液【器材】天平、鼠籠、

2、秒表、注射器1mlX4.5號(hào)針頭X4【方法與步驟】一、藥酶誘導(dǎo)劑對(duì)藥物作用的影響1、取小鼠4只，隨機(jī)分為甲、乙兩組。甲組小鼠腹腔注射0.75%苯巴比妥鈉溶液0.1ml/10g,乙組小鼠腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g，每天1次，共2天。2、于第三天，給各小鼠腹腔注射0.5%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g，觀察給藥后小鼠的反應(yīng)。記錄給藥時(shí)間、翻正反射消失和恢復(fù)的時(shí)間，計(jì)算戊巴比妥鈉催眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間。二、藥酶抑制劑對(duì)藥物作用的影響1、取小鼠4只，隨機(jī)分為甲、乙兩組。甲組小鼠腹腔注射0.5%氯霉素溶液0.1ml/10g；乙組小鼠腹腔注射生理鹽水0.1ml/10g。2、30分鐘后，給各小鼠

3、腹腔注射0.5%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g，觀察給藥后小鼠的反應(yīng)。記錄給藥時(shí)間、翻正反射消失和恢復(fù)的時(shí)間，計(jì)算戊巴比妥鈉催眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間?！窘y(tǒng)計(jì)與處理】以全班結(jié)果（睡眠持續(xù)時(shí)間，分）作分組t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)用藥組與對(duì)照組有無(wú)顯著性差異。（參見(jiàn)“數(shù)理統(tǒng)計(jì)在藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用”）【注意事項(xiàng)】1、催眠潛伏期為開(kāi)始給藥到動(dòng)物翻正反射消失的間隔時(shí)間，睡眠持續(xù)時(shí)間為翻正反射消失至恢復(fù)的間隔時(shí)間。2、本實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，室溫不宜低于20C，否則戊巴比妥鈉代謝減慢，使動(dòng)物不易蘇醒。3、氯霉素溶液有結(jié)晶析出時(shí)可在水浴中加熱溶解。4、吸取氯霉素溶液的注射器應(yīng)預(yù)先干燥，否則易結(jié)晶堵塞針頭?！舅伎碱}】1、何謂肝藥酶

4、誘導(dǎo)劑與抑制劑？2、試從理論上解釋苯巴比妥及氯霉素對(duì)戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響。22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液實(shí)驗(yàn)二家兔血漿中水楊酸鈉濃度測(cè)定和藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)測(cè)定實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹恳运畻钏徕c為例了解血漿藥物濃度隨時(shí)間變化的時(shí)量關(guān)系。了解藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的臨床意義?！緦?shí)驗(yàn)材料】1.動(dòng)物：家兔1只，雌雄不限，體重（2.5+0.5）kg。10ml吸管、注射器（1ml、器材：試管10ml吸管、注射器（1ml、5ml、10ml）、手術(shù)器械、動(dòng)脈插管、動(dòng)脈夾、721分光光度計(jì)、離心機(jī)3.試劑和藥品：25%氨基甲酸乙酯、10%及0.02%水楊酸鈉溶液、10%三氯醋酸溶液、10

5、%三氯化鐵溶液。【實(shí)驗(yàn)步驟】實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：取離心管3支及試管取離心管3支及試管5支，編號(hào)備用，麻醉（烏拉坦4ml/Kg),1D3號(hào)離心管及4及4、5號(hào)試管中分別加入10%三氯醋酸7ml手術(shù)：頸動(dòng)脈取血2ml,放入1號(hào)離心管給藥：耳緣靜脈注入10%水楊酸鈉，150mg/Kg，OOD5,35min分別取血2ml放入2、3號(hào)離心管，4、5試管分別加入蒸餾水及0.02%水楊酸鈉2ml）離心：2000r/分，5min，取上清液6ml，加入10%三氯化鐵（12滴），比色（5min后，波長(zhǎng)510nm），計(jì)算結(jié)果?！咀⒁馐马?xiàng)】注意頸總動(dòng)脈插管術(shù)。凝固，每次取出血第lml棄去不用，再吸取凝固，每次取出血第lml棄去

6、不用，再吸取2ml置于離心管內(nèi)。給藥時(shí)間及給藥后取血時(shí)間要記清。ml數(shù)，ml數(shù)，5.計(jì)算Vd,CL時(shí)注意單位換算?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】管號(hào)光密度（X）水楊酸鈉濃度（Y）g/100ml標(biāo)準(zhǔn)管（5號(hào)）X0.02給藥后5min(2號(hào)）X1C1給藥后35min(3號(hào)）X2C2計(jì)算：1、半衰期（t）:1/2K=y/xC=kx,C=kx(單位：g/100ml)11221/20.301(logCl1/20.301(logCllogC2)/（單位：min)注：k注：k為清除速率常數(shù)，y為0.02g/100ml,X標(biāo)準(zhǔn)管即5號(hào)管的光密度值C1,C2分別為給藥后5C1,C2分別為給藥后5、35分鐘取血時(shí)的血藥濃度;t為兩

7、次取血的時(shí)間差。22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液2、表觀分布容積（Vd）：C=CDlg-i(0.301Dt/t)(單位：g/100ml)0111/2Vd=D/C(單位：L/KgD00注：D為用藥初始劑量（0150mg/Kg注：D為用藥初始劑量（03、清除率（CL）：CL=0.693/tDVd(單位：ml/min.KgD1/2實(shí)驗(yàn)三氨茶堿的血藥濃度測(cè)定及藥動(dòng)學(xué)研究實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹空莆昭逯邪辈鑹A血藥濃度的紫外測(cè)定法，掌握血清中茶堿提取法，驗(yàn)證氨茶堿的動(dòng)力學(xué)模型，掌握二房室動(dòng)力學(xué)模型的參數(shù)

8、計(jì)算方法。用有機(jī)溶劑將血清中的氨茶堿提出，用紫外測(cè)定法根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)出氨茶堿濃度，用殘差法運(yùn)用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、曲線描繪及參數(shù)計(jì)算，從而驗(yàn)證氨茶堿動(dòng)力學(xué)模型，使大家茶堿的動(dòng)力學(xué)模型，掌握二房室動(dòng)力學(xué)模型的參數(shù)計(jì)算方法。用有機(jī)溶劑將血清中的氨茶堿提出，用紫外測(cè)定法根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)出氨茶堿濃度，用殘差法運(yùn)用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理、曲線描繪及參數(shù)計(jì)算，從而驗(yàn)證氨茶堿動(dòng)力學(xué)模型，使大家22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液對(duì)藥動(dòng)學(xué)研究有一初步的了解。實(shí)驗(yàn)原理】,可用,可用有機(jī)溶劑從血清中提取出茶堿

9、，再用堿液將茶堿從有機(jī)溶劑中提出。測(cè)皿2740D298處的吸光度(A274為茶堿和本底，即溶劑、血清的吸光度，A298為本底的吸光度有機(jī)溶劑從血清中提取出茶堿，再用堿液將茶堿從有機(jī)溶劑中提出。測(cè)皿2740D298處的吸光度(A274為茶堿和本底，即溶劑、血清的吸光度，A298為本底的吸光度)，口A=A274-A298。22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液荼堿22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后

10、用肝素封管，避免血液本底2.氨茶堿經(jīng)靜脈進(jìn)入血液，I隨血液循環(huán)進(jìn)行組織分布，2.氨茶堿經(jīng)靜脈進(jìn)入血液，I隨血液循環(huán)進(jìn)行組織分布，達(dá)到平衡后轉(zhuǎn)入消除相。22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液時(shí)量曲線呈二房室動(dòng)力學(xué)模型3.房室模型是抽象的數(shù)學(xué)模型，它的劃分與解剖學(xué)部位或生理學(xué)功能無(wú)關(guān)。藥3.房室模型是抽象的數(shù)學(xué)模型，它的劃分與解剖學(xué)部位或生理學(xué)功能無(wú)關(guān)。藥29822取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用

11、肝素封管，避免血液物轉(zhuǎn)運(yùn)速率相同或相近的部位可劃分為同一房室。房室模型可以分為一室模型、二室模型、多室模型。大多數(shù)藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)即藥物靜二室模型、多室模型。大多數(shù)藥物在體內(nèi)的轉(zhuǎn)即藥物靜22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液脈注射入血后，首先快速進(jìn)入血流量大的組織，如心、肝、腎、肺、腦等，然后緩慢地向血流量小的組織，如脂肪組織、靜止的肌肉組織等轉(zhuǎn)移。實(shí)驗(yàn)材料】1、動(dòng)物家兔1只，雌雄不限，體重（2.5+0.5）kg2、藥品氨茶堿標(biāo)準(zhǔn)液3、試劑0.1mol/LHCl0.1mol/LNaOH異

12、丙醇：氯仿抽提液（5:95）。4、儀器754型紫外分光光度計(jì)液體渦旋混和器數(shù)學(xué)坐標(biāo)紙一張半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙一張。【實(shí)驗(yàn)方法】動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分1.1取健康家兔1只，稱(chēng)重，將家兔置于兔臺(tái)。待血管擴(kuò)張后，以左手拇指與食12號(hào)針頭自耳靜脈取血1-1.5ml待血管擴(kuò)張后，以左手拇指與食12號(hào)針頭自耳靜脈取血1-1.5ml，5、10、20、30、60、120、指壓住靜脈耳根端，使靜脈充盈，給藥前用7號(hào)針頭平行刺入靜脈，抽動(dòng)針管，見(jiàn)有回血即可推注。對(duì)其靜脈注射氨茶堿15mg/kg。1.3另一耳用銳利刀片切割取血。分別在給氨茶堿后180、300、420min取血。1.4分離血清，各管均取血清0.5ml于15ml1.4分

13、離血清，各管均取血清0.5ml于15ml試管中，加0.1mol/L鹽酸0.2ml、抽提液5ml,振搖混合，2500r/min離心10min。血藥濃度測(cè)定（紫外分光光度法）血藥濃度測(cè)定（紫外分光光度法）2.1吸取下層氯仿液4ml置另一試管中，加入0.1mol/LNaOH溶液4ml，振搖混2.1吸取下層氯仿液4ml置另一試管中，加入0.1mol/LNaOH溶液4ml，振搖混勻，2500r/min離心10min。2.2吸取上層堿液，以0.1mol/LNaOH溶液4ml作參比，振搖混勻，2500r/min離心離心10min。測(cè)定其皿274和口298處的吸收度（A274測(cè)定其皿274和口298處的吸收度

14、（A274和A298),計(jì)算A。制作茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5制作茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線：取5支試管，依次加入茶堿標(biāo)準(zhǔn)液各加入0.1mol/LNaOH溶液4ml,終濃度依次為20、40、60、80、100pl，0.5、1.0、1.5、2.0、2.5pg/ml，測(cè)定各管的測(cè)定各管的A274和A298,計(jì)算A。以茶堿濃度為橫坐標(biāo)，A為縱坐標(biāo)描點(diǎn)22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液繪圖，用Excel軟件求直線回歸方程，即為茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線方程（圖示）4.將測(cè)得血清樣品的A代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程，求得相應(yīng)的C,CD10繪圖，用Excel軟件求直線回歸方程，即為茶堿標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線方程（

15、圖示）4.將測(cè)得血清樣品的A代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程，求得相應(yīng)的C,CD10即為茶堿的血藥濃度。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，濃度對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，用CAPP軟件描點(diǎn)做圖，判斷氨茶堿在體內(nèi)代謝的房室模型。注意事項(xiàng)】紫外分光光度計(jì)使用前需預(yù)熱30min并激發(fā)氫燈。振搖混勻藥液時(shí)防止濺出并準(zhǔn)確加樣。樣品離心前需配平。測(cè)量時(shí)若更換波長(zhǎng)，必須重新調(diào)節(jié)0和100?！居懻摗堪辈鑹A的時(shí)量曲線呈幾房室模型？為什么？為何要測(cè)兩個(gè)波長(zhǎng)下茶堿的吸光度并取其差值？3.試述藥動(dòng)學(xué)參數(shù)VI、Vd、t1/2a、tl/2口、K10、K12、K21、Cl、AUC的含義。3.試述藥動(dòng)學(xué)參數(shù)22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管

16、，避免血液實(shí)驗(yàn)四體液對(duì)水楊酸鈉排泄的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?2取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液1學(xué)習(xí)尿液中水楊酸的檢測(cè)方法，意義。掌握體液pH對(duì)藥物排泄的影響及其臨床22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液2熟悉大鼠代謝籠的使用，鞏固大鼠的各種給藥方法。實(shí)驗(yàn)原理】22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取

17、血后用肝素封管，避免血液水楊酸鈉經(jīng)腎臟排泄物為水楊酸，尿液液呈酸性時(shí)僅排泄5%而尿液呈堿性時(shí)則排泄大約尿液中的水楊酸遇到三氯化鐵后可生成紫色絡(luò)合物，pH對(duì)水楊酸排泄影響非常大，當(dāng)尿85%。根據(jù)反應(yīng)后溶液紫色深22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液淺可以定性分析水楊酸鈉排泄量的多少。實(shí)驗(yàn)材料】叩動(dòng)物大白鼠，雌雄不限，200口300g。2器材大白鼠代謝籠兩個(gè)，天平一個(gè)，棉手套一只，大鼠灌胃器兩個(gè)，毫升注射器兩個(gè)，6號(hào)針頭兩個(gè)，30ml量筒1個(gè),50ml注射器2個(gè)。毫升注射器兩個(gè)，6號(hào)針頭兩

18、個(gè)，30ml量筒1個(gè),50ml注射器2個(gè)。3藥品5%碳酸氫鈉溶液，15%氯化氨溶液，（單盲法配制并編號(hào)為A、B），2%水楊酸鈉溶液，1%三氯化鐵溶液，5%葡萄糖生理鹽水，蒸餾水，苦味酸，1%速尿?！緦?shí)驗(yàn)方法】1取大白鼠兩只稱(chēng)重并編號(hào)。2口給其中一只按0.5ml/100g灌胃A藥液，給另一只以同樣劑量灌胃B藥液。330分鐘后給兩只大鼠灌胃5%葡萄糖生理鹽水2ml/100g。430分鐘后，分別給兩只大鼠腹腔注射2%水楊酸鈉溶液lml/100g及1%速尿0.2ml/100g。5收集各鼠30分鐘尿液，將收集的尿液分別用蒸餾水稀釋到30ml，加1%三氯化鐵5ml，比較紫色深淺。實(shí)驗(yàn)結(jié)果】表21體液pH值

19、對(duì)水楊酸鈉排泄的影響鼠號(hào)體重（g）藥物尿液反應(yīng)后顏色結(jié)果分析1A2B注意事項(xiàng)】1實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行到4后，再將集尿籠插入代謝籠中，以免收集尿液前將集尿籠污染。2叮驗(yàn)用燒杯、量筒、注射器、集尿籠應(yīng)清洗干凈，否則影響反應(yīng)pH,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確?！舅伎碱}】藥物的排泄途徑有哪些？影響藥物排泄的因素有哪些？體液pH還對(duì)藥物的哪些體內(nèi)過(guò)程有影響？有何臨床意義？實(shí)驗(yàn)中給予碳酸氫鈉、氯化氨、葡萄糖生理鹽水、速尿等藥物的目的各是什么？根據(jù)反應(yīng)后溶液紫色深淺為什么可以定性分析水楊酸鈉排泄量的多少？寫(xiě)出水楊酸與三氯化鐵的反應(yīng)式。22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液實(shí)驗(yàn)五酚磺酞藥代動(dòng)

20、力學(xué)參數(shù)的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹繙y(cè)定PSP在家兔體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。【實(shí)驗(yàn)原理】酚磺酞（PhenolsulfonphthaleinPSPQ,又名酚紅。靜脈注射后，不在體內(nèi)代謝，主要經(jīng)腎近曲小管分泌排泄，屬于一室模型一級(jí)動(dòng)力學(xué)消除。PSP在堿性環(huán)境中變?yōu)榧t色，可用可見(jiàn)分光光度計(jì)于波長(zhǎng)560nm處進(jìn)行定量測(cè)定?！緦?shí)驗(yàn)材料】1、動(dòng)物22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液22取血時(shí)，要先用0.1%肝素潤(rùn)濕注射器和針頭，取血后用肝素封管，避免血液家兔1只，2.5家兔1只，2.5口3.0kg,雌雄不限2、藥品0.6%PSP溶液、PSP標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.5、釋液（0.9%NaCl2

21、9ml+1mol/LNaOH3、器材兔臺(tái)、手術(shù)剪刀D2、止血鉗D2、眼科鑷子D1）、抗凝試管D5、試管架、離心機(jī)、分光光度計(jì)、比色杯（器（1mlD1,250口叩1）、燒杯、酒精棉球、干棉球、繩口置于備好的抗凝試管內(nèi),離心（2000轉(zhuǎn)/分）3、PSP標(biāo)準(zhǔn)液的平均吸收系數(shù)K的測(cè)定：取PSP標(biāo)準(zhǔn)液0.5、1、2Dmol/L及蒸餾水各0.05ml,于波長(zhǎng)560nm處比色，測(cè)得吸收度（值。【實(shí)驗(yàn)步驟】1、家兔稱(chēng)重,用3戊巴比妥（1板上,切開(kāi)頸部皮膚,暴露頸淺靜脈,從其下緣穿一線,備取血時(shí)用。2、用1ml干燥注射器從頸淺靜脈取血約PSP溶液，按0.4ml/kg給藥，注射后分別在1、2Dmol/L）、3%戊巴比妥溶液、稀1ml）2、注射器（5mlD1、2mlD0.5mlD5）、加液4、線ml/kg）耳緣靜脈麻醉，仰臥，固定于兔TOC o