氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)

1、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)（一） 靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚）。吲哚與對(duì)二甲氨基苯甲醛結(jié)合，可形成紅色化合物，即玫瑰吲哚，以此鑒別細(xì)菌。 應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。2、試驗(yàn)方法所用試劑:（1）柯凡克(Kovacs)試劑或（2）歐-波試劑將待檢菌小量接種于培養(yǎng)基中，于361 培養(yǎng)2448h時(shí)后，加入柯凡克試劑數(shù)滴，輕搖試管，呈紅色者為陽(yáng)性?；蜓卦嚬鼙诰徛尤霘W-波試劑約0.5ml覆蓋液面，兩液接觸處呈現(xiàn)玫瑰紅色者，為陽(yáng)性反應(yīng)，無(wú)紅色者為陰性反應(yīng)。3、結(jié)果觀察與記錄：呈現(xiàn)玫瑰紅色，為陽(yáng)性反應(yīng)，記+無(wú)紅色者，為陰性反應(yīng)，記-（二）

2、硫化氫（H2S）試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌可分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸或含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽可生成黑色沉淀物PbS或FeS，以此鑒別細(xì)菌2、試驗(yàn)方法：挑取待檢菌，用穿刺接種法接種于三糖鐵培養(yǎng)基上，于361培養(yǎng)2448h，觀察結(jié)果。3、結(jié)果觀察與記錄培養(yǎng)基底部呈黑色，為陽(yáng)性，記+培養(yǎng)基底部無(wú)黑色，為陰性，記-應(yīng)用：用于腸道桿菌鑒定試驗(yàn)，如：沙門(mén)氏菌屬、愛(ài)德華菌屬、枸櫞酸桿菌屬及變形桿菌等為陽(yáng)性；腸道桿菌中其他菌屬為陰性，沙門(mén)菌屬中的甲型副傷寒沙門(mén)菌也為陰性。（三） 尿素酶試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解產(chǎn)生氨，氨使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，使培養(yǎng)基中的酚紅指示劑呈粉紅色，培養(yǎng)

3、基由黃色變?yōu)榧t色，為陽(yáng)性。以此鑒別細(xì)菌。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬的鑒定。奇異變形桿菌和普通變形桿菌尿素酶陽(yáng)性，雷氏普羅威登斯菌和摩氏摩根菌陽(yáng)性，斯氏和產(chǎn)堿普羅威登斯菌陰性。2、試驗(yàn)方法：挑取大量培養(yǎng)1824h的待試菌，濃密涂布接種于尿素瓊脂斜面上，不要到達(dá)底部，留底部作變色對(duì)照。培養(yǎng)2、4和24h分別觀察一次結(jié)果，培養(yǎng)基變?yōu)榉奂t色為陽(yáng)性，顏色不變者為陰性。如陰性應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至4天，作最終判定。3、結(jié)果觀察與記錄：培養(yǎng)基變呈粉紅色，為陽(yáng)性，記 +培養(yǎng)基顏色不變，為陰性，記 -（四） 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌能產(chǎn)生氨基酸脫羧酶, 可使賴(lài)氨酸、鳥(niǎo)氨酸生產(chǎn)脫羧作用, 生成胺類(lèi)物質(zhì)和C

4、O2。胺類(lèi)物質(zhì)使培養(yǎng)基呈堿性變紫色，為陽(yáng)性, 如呈黃色為陰性，以此鑒別細(xì)菌。2、試驗(yàn)方法：取待檢菌，分別接種于含有氨基酸的培養(yǎng)基內(nèi)和不含氨基酸的對(duì)照培養(yǎng)基內(nèi)，在361 培養(yǎng)14天，每天觀察結(jié)果。3、結(jié)果觀察與記錄：試驗(yàn)管呈紫色，對(duì)照管呈黃色，為陽(yáng)性，記 +試驗(yàn)管、對(duì)照管都呈黃色，為陰性，記 -。陽(yáng)性反應(yīng)試驗(yàn)管顏色變化過(guò)程：紫色黃色紫色原理：對(duì)照管呈黃色，說(shuō)明有細(xì)菌生長(zhǎng)。在培養(yǎng)的早期（1012h），細(xì)菌發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸使培養(yǎng)液pH下降，指示劑溴甲酚紫由紫色變?yōu)辄S色，以后由于氨基酸脫羧生成胺，pH又回升至堿性，指示劑顯紫色。應(yīng)用：沙門(mén)菌屬中除傷寒和雞沙門(mén)菌外，其余沙門(mén)菌的鳥(niǎo)氨酸和賴(lài)氨酸脫羧酶試劑均為

5、陽(yáng)性。志賀菌除宋氏和鮑氏志賀菌外其他志賀菌均陽(yáng)性。故可作為腸桿菌科細(xì)菌鑒定的重要方法。此外，對(duì)鏈球菌和弧菌科細(xì)菌的鑒定也有重要價(jià)值。（五） 苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)1、原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶，使苯丙氨酸脫去氨基，形成苯丙酮酸，苯丙酮酸與氯化鐵作用生成綠色化合物，以此鑒別細(xì)菌。2、試驗(yàn)方法：從待檢菌瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物，接種于苯丙氨酸培養(yǎng)基上，在361 培養(yǎng)1824h后，加入氯化鐵溶液45滴，轉(zhuǎn)動(dòng)試管，使試劑與菌苔表面充分接觸，立即觀察結(jié)果。3、結(jié)果觀察與記錄試驗(yàn)管立即出現(xiàn)綠色，為陽(yáng)性，記 +無(wú)色為陰性，記 -。應(yīng)用：本試驗(yàn)特異性較高，主要用于腸桿菌科細(xì)菌鑒定。變形桿菌屬、摩根菌屬和普羅威登菌屬細(xì)菌均為強(qiáng)陽(yáng)性，腸桿菌科中其他細(xì)菌均為陰性。（六） 明膠液化試驗(yàn)1、原理：有些細(xì)菌具有明膠酶（亦稱(chēng)類(lèi)蛋白水解酶），能將明膠先水解為多肽，又進(jìn)一步將多肽水解為氨基酸，明膠失去凝膠性質(zhì)，使培養(yǎng)基由固態(tài)變?yōu)橐簯B(tài)。2、試驗(yàn)方法：挑取培養(yǎng)1824h的待試菌，以較大量穿刺接種于明膠高層約2/3深度。于2022培養(yǎng)714天。明膠高層亦可培