免疫學(xué)技術(shù)-免疫血清制備課件

抗體制備一、免疫動(dòng)物動(dòng)物選擇：種類多。哺乳類或禽類。選擇適齡、健壯的動(dòng)物原則：需要血清量、抗原從何種種屬動(dòng)物分離獲得，需要單抗時(shí)，有多少抗原可使用。常用種類：兔、小鼠、大鼠、豚鼠、中國(guó)倉鼠商品用動(dòng)物：豬、馬、牛、羊多抗制備常用兔（得到500ml血清?。┒嗫寺】贵w制備動(dòng)物選擇動(dòng)物血清最大量單抗可能性純系評(píng)價(jià)兔500有可能否常用于多抗制備小鼠2是是常用單抗制備大鼠20是是生產(chǎn)單抗中國(guó)倉鼠20否否抗原少時(shí)生產(chǎn)多抗豚鼠30否否難以采血雞50否否對(duì)高度保守的哺乳動(dòng)物抗原較好小鼠6周左右成熟，大鼠6-8周，兔12周成熟數(shù)量：小鼠3-5只，兔最少兩只抗原及抗原劑量的選擇：所用抗原應(yīng)具備抗原特異性和較高的純度。而且可被降解抗原劑量根據(jù)其種類、免疫次數(shù)、注射途徑及動(dòng)物種類、免疫周期等不同?？乖瓌┝窟^低或過高均不能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體在一定范圍內(nèi)，抗體效價(jià)隨注射抗原劑量而增高二、抗原抗原溶液最好為中性生理學(xué)緩沖液（如PBS）從丙烯酰胺凝膠中純化抗原：電泳后蛋白定位、制備凝膠碎片（對(duì)于大動(dòng)物）、電洗脫凝膠、轉(zhuǎn)膜（硝酸纖維素膜）后超聲半抗原：交聯(lián)載體（BSA，KLH，藍(lán)載體）多肽抗原：肽長(zhǎng)度、合成難度，肽的活動(dòng)性。最安全的選擇是制備多個(gè)不同區(qū)域的10-15個(gè)氨基酸的合成肽。偶聯(lián)策略三、佐劑的應(yīng)用顆粒性抗原或全細(xì)胞抗原不需要佐劑可溶性抗原須用佐劑，以增強(qiáng)抗原的免疫原性或改變免疫反應(yīng)的類型，刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答佐劑種類：弗氏（Freund’s）佐劑、脂質(zhì)體佐劑、氫氧化鋁佐劑，SAF-1和RASIFA：羊毛脂1份，石蠟油5份，每毫升IFA中加入1-20mg卡介苗即為CFA。四、注射途徑兔：較大體積注射采用多點(diǎn)皮下小鼠：大體積顆粒性抗原通過腹腔注射、皮下注射（含佐劑可溶性抗原），靜脈注射不適于顆粒性抗原或含佐劑。緩慢釋放抗原：肌肉或皮下注射、皮下注射立即釋放抗原：靜脈注射（常在強(qiáng)化免疫時(shí)用）靜脈注射防止發(fā)生過敏性休克含佐劑的抗原不可只在一點(diǎn)注射用于小鼠的免疫原推薦劑量、免疫方式抗原類型例子基礎(chǔ)或加強(qiáng)免疫終加強(qiáng)免疫途徑劑量佐劑途徑劑量佐劑可溶性蛋白酶等ip,sc5-50ug+iv5-50ug-顆粒性蛋白病毒、細(xì)菌ip,sc5-50ug+iv5-50ug-不溶性蛋白包涵體等ip,sc5-50ug+iv5-50ug-活細(xì)胞ip105-107-iv

106-活瘤細(xì)胞ip104-106-iv106-碳水化合物ip10-50ugiv10-50ug-六、免疫效果評(píng)價(jià)檢測(cè)免疫血清以免疫前血清作為陰性對(duì)照鑒定抗體特異性、效價(jià)、交叉反應(yīng)性。方法：ELISA，W