基因工程導(dǎo)論課件

基因工程曹永長教授華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院基因工程曹永長教授生物技術(shù)生物技術(shù)(Biotechnology)是一門新興的綜合的學(xué)科,有時(shí)也稱生物工程(Bioengineering)，是指人們以現(xiàn)代生命科學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合先進(jìn)的工程技術(shù)手段和其他學(xué)科的技術(shù)原理，按照預(yù)先的設(shè)計(jì)改造生物體或加工生物原料，為人類生產(chǎn)出所需產(chǎn)品或達(dá)到某種目的。生物技術(shù)生物技術(shù)(Biotechnology)是一門生物技術(shù)的種類1、基因工程(geneengineering)2、細(xì)胞工程(cellengineering)3、酶工程(enzymeengineering)4、發(fā)酵工程(fermentationengineering)5、蛋白質(zhì)工程(proteinengineering)生物技術(shù)的種類1、基因工程(geneengineerin五大技術(shù)之間的關(guān)系基因工程微生物發(fā)酵工程工程菌蛋白質(zhì)或酶動(dòng)植物個(gè)體或細(xì)胞產(chǎn)品細(xì)胞工程蛋白質(zhì)工程或酶工程優(yōu)良動(dòng)植物品系五大技術(shù)之間的關(guān)系基因工程微生物發(fā)酵工程工程菌蛋白質(zhì)或酶動(dòng)植基因工程應(yīng)用人工方法把生物的遺傳物質(zhì)(DNA)分離出來,在體外進(jìn)行切割、拼接和重組。然后將重組了的DNA導(dǎo)入某種宿主細(xì)胞或個(gè)體,從而改變它們的遺傳品性;有時(shí)還使新的遺傳信息在新的宿主細(xì)胞或個(gè)體中大量表達(dá)，以獲得基因產(chǎn)物(多肽或蛋白質(zhì))。這種創(chuàng)造新生物并給予新生物以特殊功能的過程就稱為基因工程,又叫DNA重組技術(shù)。基因克?。╣enecloning），DNA克?。―NAcloning），分子克?。╩olecularcloning)，基因工程（geneengineering），遺傳工程（geneticengineering）等術(shù)語常與重組DNA技術(shù)通用?；蚬こ虘?yīng)用人工方法把生物的遺傳物質(zhì)(DNA)分離出來,在體基因工程理論依據(jù)1、不同基因具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)。2、基因是可以切割的。3、基因是可以轉(zhuǎn)移的。4、多肽與基因之間存在對(duì)應(yīng)關(guān)系。5、遺傳密碼是通用的。6、基因是可以遺傳的?；蚬こ汤碚撘罁?jù)1、不同基因具有相同的物質(zhì)基礎(chǔ)。遺傳物質(zhì)——DNA遺傳物質(zhì)——DNA在每輪DNA復(fù)制過程中，DNA分子的每條鏈均被用作合成其互補(bǔ)鏈的模板。因此，經(jīng)過多代復(fù)制之后，其遺傳信息仍然保持完整。

DNA復(fù)制是“半保留”的，因?yàn)樽哟鶧NA雙螺旋由一條親代鏈與一條新合成的鏈組成。DNA的復(fù)制在每輪DNA復(fù)制過程中，DNA分子的每條鏈均被用作合成其互補(bǔ)中心法則DNA是遺傳信息的一級(jí)載體，能夠被轉(zhuǎn)錄成RNA，并進(jìn)行蛋白質(zhì)的合成，這就是遺傳信息流。

DNARNA蛋白質(zhì)中心法則DNA是遺傳信息的一級(jí)載體，能夠被轉(zhuǎn)錄成RNA，并進(jìn)瞧這一家子！瞧這一家子！ProkaryoticcellEukaryoticcellProkaryoticcellEukaryoticcel基因工程導(dǎo)論課件兩種動(dòng)物性別決定基因的部分比較人與鯨的外形十分不同，但他們?nèi)匀挥纱篌w上相同的蛋白質(zhì)組成。盡管人與鯨的分化時(shí)間已經(jīng)很長，但他們?cè)S多基因的核苷酸序列還非常相似。圖中展示了人與鯨中編碼雄性決定蛋白基因的一部分序列，陰影部分是兩者完全相同的部分。兩種動(dòng)物性別決定基因的部分比較各種生物共享相同的分子機(jī)制圖中顯示嬰兒及小鼠的前額部都有相似的白班，因?yàn)樗麄兏髯缘膋it基因都有缺陷。色素細(xì)胞的發(fā)育和存活都需要這個(gè)基因。各種生物共享相同的分子機(jī)制基因工程研究發(fā)展史準(zhǔn)備階段：1944年，Avery等通過細(xì)菌轉(zhuǎn)化研究，證明DNA是基因載體。1953年，Watson和Crick建立DNA分子的雙螺旋模型。1958—1971，確立中心法則，破譯64種密碼子。1960—1970，發(fā)現(xiàn)限制性內(nèi)切酶和DNA連接酶。1972年，首次構(gòu)建重組DNA分子。基因工程研究發(fā)展史準(zhǔn)備階段：基因工程問世1973年，Cohen等首次完成了重組質(zhì)粒DNA對(duì)大腸桿菌的轉(zhuǎn)化；同時(shí)，他們將非洲爪蟾含核糖體基因的DNA片段與質(zhì)粒pSC101重組，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，轉(zhuǎn)錄出相應(yīng)的mRNA?；蚬こ虇柺?973年，Cohen等首次完成了重組質(zhì)粒DNA基因工程迅速發(fā)展階段（1）1980—1990年代，基因工程基礎(chǔ)研究趨于成熟，發(fā)展了一系列新的基因操作技術(shù)，構(gòu)建了多種載體，獲得了大量轉(zhuǎn)基因菌株。（2）1980年培育第一個(gè)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物——超級(jí)鼠。（3）1983年培育出第一例轉(zhuǎn)基因植物——轉(zhuǎn)基因煙草。（4）大量的基因工程藥物研究成功?；蚬こ萄杆侔l(fā)展階段（1）1980—1990年代，基因工程基基因工程的基本程序分—載體和目的基因的分離切—限制性內(nèi)切酶接—載體與目的基因連接成重組體轉(zhuǎn)—基因序列轉(zhuǎn)入細(xì)胞篩—目的基因序列克隆的篩選和鑒定基因工程的基本程序分—載體和目的基因的分離分—載體和目的基因的分離

目的基因的來源和分離基因文庫cDNA文庫人工化學(xué)合成聚合酶鏈(PCR)反應(yīng)分—載體和目的基因的分離

目的基因的來源和分離基因工程導(dǎo)論課件切—限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用切—限制性內(nèi)切酶的應(yīng)用限制性內(nèi)切酶

（restrictionendonuclease）

該酶有三類，即限制性內(nèi)切酶Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ。實(shí)際工作應(yīng)用的為限制性內(nèi)切酶Ⅱ，它能識(shí)別和切割雙鏈DNA的特異順序，產(chǎn)生特異的DNA片段。Ⅱ型具有嚴(yán)格的識(shí)別、切割順序。它以核酸內(nèi)切方式水解DNA鏈中的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生的DNA片段5′端為P，3′端為OH。識(shí)別順序一般為4-6個(gè)堿基對(duì)。限制性內(nèi)切酶

（restrictionendonuclea不同限制性核酸內(nèi)切酶

切割的三種情況產(chǎn)生3′突出粘性末端（cohesiveend):以EcoRI為例：

5′---GAATTC---3′5′---GP

OHAATTC---3′3′---CATAAAG---5′EcoRI3′---CTTAAOHPG---5′產(chǎn)生5′突出粘性末端:以PstI為例：

5′---CTGCAG---3′5′---CTGCApOHG---3′3′---GACCTC---5′PstI3′---GOHpACGTC---5′產(chǎn)生平末端（bluntend):以NruI為例：

5′---TCGCGA---3′5′---TCGpOHCGA---3′3′---AGCGCT---5′NruI3′---AGCOHpGCT---5′不同限制性核酸內(nèi)切酶

切割的三種情況產(chǎn)生3′突出粘性末端（c接—載體與目的基因

連接成重組體

粘性末端連接平端連接接—載體與目的基因

連接成重組體粘性末DNA連接酶

T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶：MW=68kD，催化兩個(gè)獨(dú)立DNA片段5′磷酸基與3′羥基之間形成磷酸二酯鍵DNA連接酶T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接基因工程導(dǎo)論課件轉(zhuǎn)—基因序列轉(zhuǎn)入細(xì)胞

轉(zhuǎn)化感染轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)—基因序列轉(zhuǎn)入細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因工程導(dǎo)論課件篩—目的基因序列克隆的篩選和鑒定

按重組載體的標(biāo)志進(jìn)行篩選核酸雜交法核苷酸序列測定PCR免疫學(xué)方法DNA限制性內(nèi)切酶圖譜分析篩—目的基因序列克隆的篩選和鑒定按重組載體的標(biāo)志進(jìn)基因克隆的載體

載體（vector）是攜帶靶DNA片斷進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的工具。載體的本質(zhì)是DNA，具備以下特征：自主復(fù)制；有篩選標(biāo)記；適當(dāng)大小的分子量適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切酶酶切位點(diǎn)；在細(xì)胞中拷貝數(shù)高。

質(zhì)粒載體（plasmid）載體噬菌體載體（bacteriophage）基因克隆的載體載體（vector）是攜帶靶DNA片斷進(jìn)質(zhì)粒載體

質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外小型雙鏈環(huán)狀DNA。質(zhì)粒DNA在細(xì)菌中的復(fù)制有兩種類型，即嚴(yán)緊型和松馳型，后者為高拷貝質(zhì)粒，常用于基因克隆實(shí)驗(yàn)。常用的質(zhì)粒載體有pBR322，pUC18和pUC19。質(zhì)粒載體質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外小型雙鏈環(huán)狀DNA。質(zhì)粒DN基因工程導(dǎo)論課件基因工程導(dǎo)論課件噬菌體載體-噬菌體載體：gt10、gt11、EMBL4、粘粒載體M-13噬菌體載體T4噬菌體載體噬菌體載體-噬菌體載體：gt10、gt11、EMBL噬菌體載體

插入載體(Subsitutionvector):

gt10和gt11，只有單一的EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，只容許幾個(gè)kB的外源DNA插入。此類載體主要同于cDNA文庫的構(gòu)建。

替代載體（replacevector)：EMBL4，含有EcoRⅠ(E)、SalⅠ(S)和BamHⅠ(B)三個(gè)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)。酶切后可用外源性DNA取代。指入片段長度為9-22kb。主要用于構(gòu)建基因組文庫。噬菌體載體插入載體(Subsitutionvect基因工程導(dǎo)論課件基因工程導(dǎo)論課件基因工程導(dǎo)論課件M13噬菌體載體

M13噬菌體含約64kb的單鏈閉環(huán)DNA分子。在菌細(xì)胞內(nèi)形成過度階段的雙鏈環(huán)狀復(fù)制型DNA（RF）。雙鏈外源DNA可插入到M13噬菌體，雙鏈復(fù)制型DNA中并進(jìn)行高拷貝復(fù)制。亦很容易地從感染細(xì)胞中純化得到并重新導(dǎo)入宿主細(xì)胞，進(jìn)入宿主細(xì)胞后，這種雙鏈DNA很快又重新進(jìn)入復(fù)制周期，產(chǎn)生子代噬菌體顆粒。子代噬菌體DNA是單鏈的，只含有外源DNA的一條鏈。

主要用于DNA測序和制備單鏈放射性探針M13噬菌體載體M13噬菌體含約64kb的單鏈閉環(huán)DN

利用T4噬菌體頭部表面的非必需外殼蛋白，將目的蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌體表面。具有操作方便、容量大、拷貝數(shù)高，表達(dá)產(chǎn)物保持相對(duì)獨(dú)立的空間構(gòu)象和生物學(xué)活性、易于分離、免疫原性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。T4噬菌體表面蛋白展示系統(tǒng)利用T4噬菌體頭部表面的非必需外殼蛋白，將目的T4噬菌體表面蛋白展示系統(tǒng)

質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)：表達(dá)質(zhì)粒大腸桿菌噬菌體展示系統(tǒng)：缺失突變型T4-Z1整合質(zhì)粒大腸桿菌T4噬菌體表面蛋白展示系統(tǒng)質(zhì)粒表達(dá)系統(tǒng)：表達(dá)質(zhì)粒T4噬菌體表面蛋白展示系統(tǒng)SOCgp23SOC-VP2SOCgp23surfacelatticeabcT4噬菌體表面蛋白展示系統(tǒng)SOCgp23SOC-VP2SOC基因工程研究內(nèi)容基礎(chǔ)研究應(yīng)用研究基因工程研究內(nèi)容基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)研究（1）基因工程克隆載體研究（2）基因工程受體系統(tǒng)研究（3）目的基因研究（4）基因工程工具酶研究（5）基因工程新技術(shù)研究基礎(chǔ)研究（1）基因工程克隆載體研究應(yīng)用研究（1）新藥開發(fā)（2）轉(zhuǎn)基因植物（3）轉(zhuǎn)基因動(dòng)物（4）其他方面——酶制劑工業(yè)、食品工業(yè)、化學(xué)與能源工業(yè)、環(huán)境保護(hù)等應(yīng)用研究（1）新藥開發(fā)新藥開發(fā)1、抗生素：6000多種抗生素，其中約100種被廣泛使用，每年市場銷售額約100億美元。利用重組DNA技術(shù)，提高抗生素產(chǎn)量和生產(chǎn)效率。2、激素：生長激素、生長激素釋放抑制激素、胰島素、心鈉素等。3、其他藥物：干擾素、腫瘤壞死因子、集落刺激因子等。新藥開發(fā)1、抗生素：6000多種抗生素，其中約100種被廣泛用基因工程方法生產(chǎn)的部分人類蛋白質(zhì)藥物（1）蛋白質(zhì)名稱用途a1抗胰蛋白酶治療肺氣腫促腎上腺皮質(zhì)激素治療風(fēng)濕B細(xì)胞生長因子治療免疫系統(tǒng)功能失調(diào)降鈣素治療軟骨病集落刺激因子治療血液病、腫瘤輔助治療絨毛膜促性腺激素治療不排卵癥內(nèi)啡肽和腦啡肽鎮(zhèn)痛劑上皮生長因子促進(jìn)傷口愈合紅細(xì)胞生成素治療貧血用基因工程方法生產(chǎn)的部分人類蛋白質(zhì)藥物（1）蛋白質(zhì)名稱用基因工程方法生產(chǎn)的部分人類蛋白質(zhì)藥物（2）蛋白質(zhì)名稱用途凝血因子VIII治療血友病凝血因子IX治療血友病生長激素促進(jìn)生長生長激素釋放因子促進(jìn)生長胰島素治療糖尿病干擾素抗病毒、抗腫瘤白細(xì)胞介素治療癌癥淋巴細(xì)胞毒素抗腫瘤巨嗜細(xì)胞激活因子抗腫瘤用基因工程方法生產(chǎn)的部分人類蛋白質(zhì)藥物（2）蛋白質(zhì)名稱用基因工程方法生產(chǎn)的部分人類蛋白質(zhì)藥物（3）蛋白質(zhì)名稱用途神經(jīng)生長因子促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)損傷的修復(fù)血小板衍生因子治療動(dòng)脈粥樣硬化松弛素助產(chǎn)劑血清白蛋白血漿補(bǔ)充物生長調(diào)節(jié)素生長調(diào)節(jié)素組織型纖溶酶原激活劑溶栓劑腫瘤壞死因子抗腫瘤尿抑胃素抗?jié)兯幬锬蚣っ溉芩▌┯没蚬こ谭椒ㄉa(chǎn)的部分人類蛋白質(zhì)藥物（3）蛋白質(zhì)名稱我國已批準(zhǔn)上市的基因工程藥物名稱適應(yīng)癥重組人干擾素a1b(外用)病毒性角膜炎重組人干擾素a1b乙肝、丙肝等重組人干擾素a2a尖銳濕疣、皰疹、乙肝、丙肝等重組人干擾素a2b乙肝、丙肝重組人干擾素-r類風(fēng)濕、癌癥輔助治療重組人白細(xì)胞介素-2癌癥輔助治療重組人粒細(xì)胞集落刺激因子化療生白細(xì)胞重組人紅細(xì)胞生成素再生障礙性貧血堿性成纖維細(xì)胞生成因子創(chuàng)傷、燒傷我國已批準(zhǔn)上市的基因工程藥物名稱基因工程與疫苗甲型、乙型病毒性肝炎疫苗腸道傳染病疫苗（霍亂、痢疾等）寄生蟲疫苗（血吸蟲、瘧疾等）流行性出血熱疫苗、EB病毒疫苗等愛滋病毒疫苗避妊疫苗：精子避妊疫苗、激素類避妊疫苗基因工程與疫苗甲型、乙型病毒性肝炎疫苗轉(zhuǎn)基因的定義轉(zhuǎn)基因動(dòng)物Transgenicanimal

–在受精卵時(shí)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移，使最后獲得含有外源基因的動(dòng)物，獲得新基因的特性雜合動(dòng)物Chimericanimal

–采用胚胎干進(jìn)行基因轉(zhuǎn)移，使動(dòng)物的某些細(xì)胞獲得外源基因，這些細(xì)胞局限于某些組織中，而其它組織細(xì)胞中則并無外源基因，因此呈雜合狀態(tài)基因敲除Knockoutmutation

–采用同源重組的方法使某個(gè)基因發(fā)生缺失或滅活，從而失去功能，通常當(dāng)對(duì)受精卵進(jìn)行基因敲除則產(chǎn)生的動(dòng)物便因某種基因缺失，而對(duì)其生長、發(fā)育及其它代謝過程產(chǎn)生影響轉(zhuǎn)基因的定義轉(zhuǎn)基因動(dòng)物Transgenicanimal–轉(zhuǎn)基因的物種模型Arabadopsis(plant)C.elegans(worm)FruitfliesXenopus(frog)ZebrafishMiceRatsPigsSheepGoatsCows轉(zhuǎn)基因的物種模型Arabadopsis(plant)Rat被轉(zhuǎn)移基因的類型小分子重組DNA(SmallrecombinantDNAmolecules)–采用基因或其cDNAs構(gòu)建適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載體，以基因轉(zhuǎn)移技術(shù)導(dǎo)入宿主細(xì)胞中以獲得外源基因的表達(dá)報(bào)告基因(Reporterconstructs)——目標(biāo)基因的啟動(dòng)子與某些較易檢測的基因相連構(gòu)建成表達(dá)盒子，采用檢測報(bào)告基因的表達(dá)來分析目標(biāo)基因的啟動(dòng)子的強(qiáng)弱及其調(diào)控，這些報(bào)告基因有GFP,lacZ,luciferase）大分子天然DNA(LargenativeDNAmolecules)酵母人工染色體(yeastartificialchromosomes,YACs)

細(xì)菌人工染色體(bacterialartificialchromosomes,BACs)被轉(zhuǎn)移基因的類型小分子重組DNA(Smallrecombi青蛙是最早進(jìn)行轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)的動(dòng)物之一當(dāng)時(shí)并非采用分離DNA的技術(shù)，而是采用核轉(zhuǎn)移技術(shù)，即現(xiàn)在采用的動(dòng)物克隆技術(shù)當(dāng)時(shí)建立了核的顯微注射技術(shù)青蛙是最早進(jìn)行轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)的動(dòng)物之一轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因小鼠是最早問世的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。1982年將生長激素基因轉(zhuǎn)入小鼠獲得成功，轉(zhuǎn)基因小鼠的體重是正常個(gè)體的二倍，被稱為“超級(jí)鼠”。轉(zhuǎn)基因小鼠證明了生物技術(shù)可以改變動(dòng)物的天然屬性，顯示了轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的廣闊應(yīng)用前景。轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因小鼠是最早問世的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。1982年將生長轉(zhuǎn)基因小鼠的產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠的產(chǎn)生ExampleoftransgenicmouseExampleoftransgenicmouse基因靶向技術(shù):基因敲除小鼠或突變小鼠基因靶向技術(shù):基因敲除小鼠或突變小鼠Generationofmutant(chimeric)mousestrainelectroporatetargetingvectormicroinjectionintoblackembryoX+/+EScellshomologousrecombination+/-EScellsscreenchimeraprogeny+/++/++/-Generationofmutant(chimeric基因敲除小鼠對(duì)于發(fā)現(xiàn)有價(jià)值基因十分有益，尤其是某些自然狀態(tài)下不存在的突變株特別提示研究發(fā)現(xiàn)，基因敲除小鼠通常并不受基因缺失的影響，許多基因表現(xiàn)為非依賴性，即非必需基因大多數(shù)基因表現(xiàn)為多能性，具有多種生物學(xué)功能，它們?cè)诓煌慕M織中，以不同的方式進(jìn)行表達(dá)，尤其在發(fā)育的不同的階段的表達(dá)對(duì)于其生物學(xué)功能，從更全面的層次進(jìn)行理解基因敲除小鼠對(duì)于發(fā)現(xiàn)有價(jià)值基因十分有益，尤其是某些自然狀態(tài)下應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究解救突變體以轉(zhuǎn)基因鼠作為生物反應(yīng)器合成人單克隆抗體合成其它有價(jià)值蛋白結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系研究人類疾病的小鼠模型分析疾病的細(xì)胞與分子機(jī)制指導(dǎo)治療藥物的篩選指導(dǎo)基因治療應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究解救突變體按受累的器官和組織系統(tǒng)列表的鼠疾病模型中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病–11視覺與聽覺障礙疾病–7骨、皮膚和結(jié)締組織相關(guān)疾病–16神經(jīng)和神經(jīng)肌肉障礙性疾病–22腫瘤–11免疫學(xué)和血液系統(tǒng)疾病–17激素和代謝障礙性疾病–24多因性人類疾病–6按受累的器官和組織系統(tǒng)列表的鼠疾病模型中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病–遺傳性疾病的小鼠模型舉例鐮刀狀細(xì)胞貧血(Sicklecelldisease)–采用基因敲除和轉(zhuǎn)基因建立小鼠的鐮刀狀細(xì)胞貧血，特性地將內(nèi)源性球蛋白基因缺失，造成小鼠的鐮刀狀細(xì)胞貧血肺中囊性纖維化(Cysticfibrosis)–主要采用基因敲除模型，也有少數(shù)采用轉(zhuǎn)基因多囊腎疾病治療(Polycystickidneydisease)–y主要采用基因敲除技術(shù)嗜眠癥(Narcolepsy)–基因敲除模型及思考遺傳性疾病的小鼠模型舉例鐮刀狀細(xì)胞貧血(Sicklecel轉(zhuǎn)基因魚1984年，朱作言等首次采用人生長激素基因(hGH)構(gòu)建了轉(zhuǎn)基因金魚。目前已有鯽魚、鯉魚、泥鰍、鱒魚、大馬哈魚、鯰魚、羅非魚、魴魚等被用于轉(zhuǎn)基因研究。已有多種哺乳動(dòng)物和鳥類的基因被成功地整合到魚類基因組中。轉(zhuǎn)基因魚1984年，朱作言等首次采用人生長激素基因(hGH)轉(zhuǎn)基因魚轉(zhuǎn)基因魚的主要目的是：（1）提高魚類生長速度和抗逆性。生長激素基因(哺乳動(dòng)物、鳥類、魚類)；抗凍蛋白基因（擬鰈）（2）作為發(fā)育生物學(xué)研究的模型。轉(zhuǎn)基因魚轉(zhuǎn)基因魚的主要目的是：轉(zhuǎn)基因雞家禽受精卵從輸卵管排出需要20多個(gè)小時(shí)，產(chǎn)出時(shí)的卵已有6000多個(gè)細(xì)胞。蛋產(chǎn)出前的操作：受精后第一次卵裂前取出單細(xì)胞卵，在體外進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作，然后用代用蛋殼作為培養(yǎng)器皿在體外培養(yǎng)至孵化。英國Perryetal采用顯微注射法獲得了轉(zhuǎn)基因雞。精子載體法是很有前途的轉(zhuǎn)基因家禽方法。轉(zhuǎn)基因雞家禽受精卵從輸卵管排出需要20多個(gè)小時(shí)，產(chǎn)出時(shí)的卵已轉(zhuǎn)基因雞蛋產(chǎn)出后的操作：胚胎干細(xì)胞(ES)法和原生殖細(xì)胞(primordialgermcell,PGC)法。轉(zhuǎn)基因家禽主要以抗病性和改良生產(chǎn)性狀為目標(biāo)。（抗流感病毒基因Mx1、生長激素基因）用雞蛋生產(chǎn)外源蛋白。轉(zhuǎn)基因雞蛋產(chǎn)出后的操作：胚胎干細(xì)胞(ES)法和原生殖細(xì)胞(p轉(zhuǎn)基因家畜哺乳動(dòng)物體外受精餓胚胎移植技術(shù)為轉(zhuǎn)基因家畜的成功提供了有效的技術(shù)手段。提高抗病性和改善生產(chǎn)性能。因?yàn)榧倚笈c人的生物學(xué)相似性，在器官移植、藥物生產(chǎn)和特殊疾病模型等方面顯示出特殊的價(jià)值。轉(zhuǎn)基因家畜哺乳動(dòng)物體外受精餓胚胎移植技術(shù)為轉(zhuǎn)基因家畜的成功提In1997,researchersatScotland'sRoslinInstitutesparkedinternationaldebatewhentheyannouncedthecloningofasheepnamedDolly.Theeventbroughthumankindtoanothercrossroadsofscientific