高中生物必修二實(shí)驗(yàn)十一DNA的粗提取與鑒定

高中生物必修二實(shí)驗(yàn)十一DNA的粗提取與鑒定高中生物必修二實(shí)驗(yàn)十一DNA的粗提取與鑒定高中生物必修二實(shí)驗(yàn)十一DNA的粗提取與鑒定V:1.0精細(xì)整理，僅供參考高中生物必修二實(shí)驗(yàn)十一DNA的粗提取與鑒定日期：20xx年X月實(shí)驗(yàn)十一DNA的粗提取與鑒定教學(xué)目的初步掌握DNA粗提取和鑒定的方法。觀察提取出來的DNA物質(zhì)。實(shí)驗(yàn)原理DNA在NaCl溶液中的溶解度是隨NaCl的濃度變化而改變的。DNA在0．14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低，據(jù)此可使溶解于NaCl溶液中的DNA析出。DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些物質(zhì)可以溶于酒精溶液，據(jù)此可提取雜質(zhì)較少的DNA。DNA＋二苯胺藍(lán)色（用于DNA的鑒定）實(shí)驗(yàn)步驟1．材料制備0.1G/ml檸檬酸鈉100ml500ml燒杯→玻璃棒攪拌→1000r/min離心2min→吸去上清液→活雞血180ml即得雞血細(xì)胞液（也可將上述燒杯置于冰箱中，靜置一天使雞血細(xì)胞自行沉淀）2．方法步驟取血細(xì)胞液5-10ml＋20ml蒸餾水，玻璃棒沿一個方向快速攪拌（1）提取血細(xì)胞核物質(zhì)紗布過濾，濾液中含DNA和其他核物質(zhì)，如蛋白質(zhì)原理：血細(xì)胞的細(xì)胞膜、核膜吸水脹破，玻璃棒快速攪拌機(jī)械加速血細(xì)胞破裂（2）溶解核內(nèi)DNA：濾液＋2mol/LNaCl溶液40ml，玻璃棒沿一個方向攪拌（3）析出含DNA的粘稠物：向上述溶液中緩緩加入蒸餾水，并輕輕地沿一個方向攪拌，出現(xiàn)絲狀物，當(dāng)絲狀物不再增加時，停止加水（此時NaCl溶液相當(dāng)于稀釋到0．14mol/L）（4）濾取含DNA的粘稠物：用多層紗布過濾，含DNA的粘稠物留在紗布上（5）DNA粘稠物再溶解：20ml2mol/LNaCl溶液50ml燒杯，上述粘稠物緩慢攪拌3min（6）過濾含DNA的2mol/LNaCl溶液：用2層紗布過濾，濾液中含DNA（7）提取含雜質(zhì)較少的DNA：上述溶液＋95%酒精，緩慢攪拌，出現(xiàn)乳白色絲狀物，用玻璃棒將絲裝物卷起。（8）DNA鑒定：實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵：本實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵是獲取較純凈的DNA，因此應(yīng)注意：1．充分?jǐn)嚢桦u血細(xì)胞液。DNA存在于雞血細(xì)胞核中。將雞血細(xì)胞與蒸餾水混合以后，應(yīng)用玻璃棒沿一個方向快速攪拌，使血細(xì)胞加速破裂，并釋放出DNA2．沉淀DNA必須用冷酒精。實(shí)驗(yàn)前必須準(zhǔn)備好大量95%的酒精，并在冰箱中（5℃以下）至少存放24小時。3．正確攪拌含有懸浮物的溶液。在第（3）、（5）步驟，玻璃棒不要直插燒杯底部，且攪拌要輕緩，以便獲得較完整的DNA分子。在步驟（7），要將玻璃棒插入燒杯溶液中間，用手緩慢轉(zhuǎn)動5-10min?！就愵}庫】．在“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中分別使用2mol／L、0．14mol／L、2mol／L、0015mol／L的氯化鈉溶液，其作用分別是（A）A．溶解、析出、溶解、溶解C．溶解、溶解、析出、溶解B．析出、溶解、析出、溶解D．溶解、析出、溶解、析出．下列圖示中能反映DNA溶解度與NaCI溶液濃度之間關(guān)系的是（C）．DNA在下列哪種濃度的NaCl溶液中溶解度最低（B）A．2．00mol/LB．0．14mol/LC．0．015mol/LD．0．10mol/L．在DNA的粗提取過程中，初步析出DNA和提取較純凈的DNA所用的藥品的濃度和名稱分別是（B）①0．1g/ml的檸檬酸鈉溶液②2．00mol/L的NaCl溶液③0．14mol/L的NaCl溶液④體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液⑤0．015mol/L的NaCl溶液⑥0．04mol/L的NaCl溶液A．①③⑤B．③④C．②④D．②③④．與析出DNA粘稠物有關(guān)的敘述，不正確的是（C）A．操作時緩緩滴加蒸餾水，降低DNA的溶解度B．在操作A時，用玻璃棒輕緩攪拌，以保證DNA分子完整C．加蒸餾水可同時降低DNA和蛋白質(zhì)的溶解度，兩者均可析出D．當(dāng)絲狀粘稠物不再增加時，此時NaCl的濃度約為0.14mol/L.．（多選）下列有關(guān)“DNA粗提取”的操作中，正確的是（ABCD）A．在雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水B．在“析出DNA粘稠物”時，要緩緩加入蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增多C．在用酒精凝集DNA時，要使用冷酒精D．用玻璃棒攪拌時要沿一個方向．“DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”中有三次過濾：（1）過濾用蒸餾水稀釋過的雞血細(xì)胞液。（2）過濾含粘稠物的0.14mol/LNaCl.（3）過濾溶解有DNA的2mol/LNaCl.以上三次過濾分別為了獲得（A）A．含核物質(zhì)的濾液、紗布上的粘稠物、含DNA的濾液B．含核物質(zhì)的濾液、濾液中DNA粘稠物、含DNA的濾液C．含核物質(zhì)的濾液、濾液中DNA粘稠物、紗布中DNAD．含較純的DNA濾液、紗布上粘稠物、含DNA的濾液．為獲取較純凈的DNA，采集來的血樣可用蛋白酶處理，然后用有機(jī)溶劑除去蛋白質(zhì)。下列有關(guān)敘述，正確的是（D）A．除去血漿中的蛋白質(zhì)B．除去染色體上的蛋白質(zhì)C．除去血細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)D．除去血細(xì)胞中所有的蛋白質(zhì)．在“DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”中，和“使用蛋白酶從染色體中提取DNA”中的蛋白酶具有相似作用的物質(zhì)是（D）A．NaCl溶液B．蒸餾水C．檸檬酸鈉D．冷卻的酒精．DNA不溶于下列何種溶液（D）A．NaCl溶液B．KCl溶液C．MgCl溶液D．酒精溶液．下列不同濃度的NaCl溶液中，使DNA析出最徹底和溶解度最高的是（A）①0.14mol/L②2mol/L③0.25mol/L④0.015mol/LA．①和②B．②和①C．②和③D．②和④．下列操作中，對DNA的提取量影響較小的是（B）A．使雞血細(xì)胞在蒸餾水中充分破裂，放出DNA等核物質(zhì)B．?dāng)嚢钑r，要用玻璃棒沿一個方向輕緩攪動C．在析出DNA粘稠物時，要緩緩加入蒸餾水，直至溶液中粘稠物不再增多D．在用酒精沉淀DNA時，要使用冷酒精，甚至再將混合液放入冰箱中冷卻E．在DNA的溶解和再溶解時，要充分?jǐn)嚢瑁凇癉NA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)”中：（1）實(shí)驗(yàn)中兩次使用蒸餾水，第一次目的是，第二次目的是。（2）說明不同濃度的NaCl溶液的作用：2mol/LNaCl的作用；0.14mol/LNaCl的作用；0.015mol/LNaCl的作用；（3）提純DNA的原理是，所用試劑為。攪拌要，目的。（4）能否用哺乳動物血液代替？簡述理由。

。[（1）使血細(xì)胞吸水破裂，溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA；降低NaCl溶液的濃度，降低DNA分子在NaCl溶液中的溶解度析出DNA分子（2）溶解含DNA的核物質(zhì)；使含DNA的絲狀粘稠物析出DNA分子；進(jìn)行DNA鑒定（3）DNA不溶于酒精溶液，但細(xì)胞中某些鹽類蛋白質(zhì)可溶于酒精溶液；95%的冷卻酒精；輕緩、同方向；保持DNA分子的完整性（4）不能，成熟的哺乳動物紅細(xì)胞沒有細(xì)胞核]．此實(shí)驗(yàn)中有幾次用玻璃棒攪拌，每次攪拌的方向是一致的；但每次攪拌的強(qiáng)度不同，請就此予以說明。（1）提取雞血細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)時，應(yīng)攪拌，目的是。（2）向含核物質(zhì)的2mol/LNaCl溶液滴加蒸餾水析出DNA粘稠物時，應(yīng)攪拌，目的是。（3）DNA粘稠物再溶解于2mol/LNaCl溶液時，應(yīng)攪拌，目的是。（4）用95%的冷卻酒精提取含雜質(zhì)較少的DNA時，應(yīng)攪拌，目的是。[（1）快速；加速血細(xì)胞破裂（2）輕緩；盡量保持DNA分子的完整性（3）輕緩；盡量保持DNA分子的完整性（4）輕緩；保持DNA分子的完整性]．以下是有關(guān)DNA的粗提取實(shí)驗(yàn)的閱讀材料：a．核酸極不穩(wěn)定，在較為劇烈的化學(xué)、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制備DNA時要加入DNA酶（水解DNA的酶）的抑制劑檸檬酸鈉，以除去Mg，防止DNA酶的激活。b．核酸中的DNA和RNA在生物體內(nèi)均以核蛋白（由核酸和蛋白質(zhì)組成）的形式存在，DNA核蛋白在1mol/LNaCl溶液中溶解度很大，但在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度很低；而RNA核蛋白溶于0.14mol/LNaCl溶液。c．用苯酚處理，可使蛋白質(zhì)變性，且留在苯酚層內(nèi)；在DNA溶液中加入2．5倍體積，濃度為95%的酒精，可將DNA分離出來。此時DNA十分粘稠，可用玻璃棒攪成團(tuán)取出。d．DNA在強(qiáng)酸性環(huán)境下，水解產(chǎn)生脫氧核糖等小分子物質(zhì)，它與二苯胺酸性溶液反應(yīng)，能生成藍(lán)色化合物。e．實(shí)驗(yàn)材料與器械：檸檬酸鈉溶液、石英砂、0.14mol/LNaCl溶液、1mol/LNaCl溶液、苯酚、95%的酒精、二苯胺試劑、濃硫酸、花椰菜、研缽、燒杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉網(wǎng)、酒精燈、吸管、試管等。以下是DNA粗提取實(shí)驗(yàn)的步驟，請根據(jù)以上閱讀材料回答有關(guān)問題：（1）研磨：取10克花椰菜加適量的、和石英砂，研磨成勻漿。（2）過濾。（3）將濾液稀釋6倍，其目的是：。（4）離心處理，產(chǎn)生沉淀。（5）取沉淀物，置于2毫升1mol/LNaCl溶液中，使DNA核蛋白再次溶解，再加2毫升苯酚充分震蕩后靜止，待其分層后棄其上層苯酚。這一步的目的是除去。（6）如何將剩余溶液中的DNA提取出來？。（7）如何證明提取物質(zhì)確實(shí)是DNA分子？。其實(shí)驗(yàn)過程的要點(diǎn)是向放有DNA的試管中加入適量該試劑，混合均勻后，將試管置于中5min，待試管后，觀察試管中的顏色變化。這個實(shí)驗(yàn)也說明DNA耐溫，前次溫度有利于，后次溫度則有利于DNA。[（1）檸檬酸鈉溶液、1mol/LNaCl溶液（3）使DNA核蛋白溶解度降低而析出（5）（DNA核蛋白中的）蛋白質(zhì)（6）向下層溶液中加2．5倍體積，濃度為95%的酒精，此時用玻璃棒攪動，玻璃棒上成團(tuán)的物質(zhì)即是DNA（7）用適量濃硫酸處理提取物，再滴加二苯胺酸性溶液數(shù)滴，如有藍(lán)色物質(zhì)出現(xiàn)即可證明提取物為DNA。沸水??；冷卻；高；加快染色反應(yīng)的速度；析出。]．“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)中，A、B、C、D、E五個小組除下表中所列處理方法不同外，其他操作步驟均相同，而且正確，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果卻不同。組別實(shí)驗(yàn)材料提取核物質(zhì)時加入的溶液去除雜質(zhì)時加入的溶液DNA鑒定時加入的試劑A雞血蒸餾水95％的酒精(25C)二苯胺B菜花蒸餾水95％的酒精(冷卻)雙縮脲，C人血漿蒸餾水95％的酒精(冷卻)二苯胺D人血細(xì)胞2mol／L的氯化鈉0．14mol／L的氯化鈉雙縮脲E雞血蒸餾水95％的酒精(冷卻)二苯胺(1)實(shí)驗(yàn)材料選擇錯誤的組別是。其原因是。(2)實(shí)驗(yàn)步驟(不包括實(shí)驗(yàn)材料)均正確，但得不到DNA的組別是。(3)沸水浴中試管顏色變藍(lán)的組別是；藍(lán)色較淡的是，其原因是。(4)B組實(shí)驗(yàn)不成功的最主要原因是。[(1)C、D人的血漿中沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，選用這些材料得不到DNA或得到的DNA很少(2)C(3)A、EA冷卻的酒精對DNA的凝集效果較佳，該組使用的是25℃的酒精(4)菜花細(xì)胞在蒸餾水中不能被破壞，得不到DNA(應(yīng)采用研磨的方法)]．在“DNA的粗提取與鑒定”的實(shí)驗(yàn)中，有同學(xué)按書本知識和自己的思路，試做了如下實(shí)驗(yàn)，請你判斷實(shí)驗(yàn)結(jié)果。(1)他把與檸檬酸鈉混合的新鮮血液放在幾層紗布上過濾，紗布上最主要的結(jié)構(gòu)是。(2)他在含有DNA、RNA及蛋白質(zhì)等的混合物中加入大量的物質(zhì)的量濃度為2．0mol/L的氯化鈉溶液后，通過攪拌后，放在幾層紗布上過濾，他得到的濾液中一定含有實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹行枰崛〉某煞质恰?3)他在上述濾液中加入冷酒精(體積分?jǐn)?shù)為95％)，并用玻璃棒向—個方向攪拌，溶液中的絲狀物的主要成分是。(4)他把含有DNA、RNA、蛋白質(zhì)與氯化鈉的混合溶液稀釋成物質(zhì)的量濃度為0．14mol/L的氯化鈉溶液后，放在幾層紗布上過濾，他得到的濾液中含量最多的成分是。[血細(xì)胞DNADNA水]．請利用如下實(shí)驗(yàn)材料做相關(guān)實(shí)驗(yàn)，再選擇其中的一種實(shí)驗(yàn)材料，設(shè)計一個實(shí)驗(yàn)，以展示你的科學(xué)素養(yǎng)和創(chuàng)新才能。(1)如用上述材料做觀察植物細(xì)胞的有絲分裂、葉綠體中色素的提取和分離、觀察植物的向性運(yùn)動等實(shí)驗(yàn)。你選擇的最佳材料依次是(填圖中序號即可)。(2)如用紫色洋蔥表皮做完細(xì)胞的質(zhì)壁分離及復(fù)原實(shí)驗(yàn)后，又用此裝片觀察細(xì)胞分裂，結(jié)果未觀察到處于分裂期的細(xì)胞。請解釋原因。(3)創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)設(shè)計方案實(shí)驗(yàn)課題：探究鎳為植物生活所必需的礦質(zhì)元素材料用具：完全營養(yǎng)液甲、缺鎳的完全營養(yǎng)液乙、適當(dāng)?shù)娜萜骱凸潭ú牧?、長