清燥潤肺合劑質(zhì)量標準研究

清燥潤肺合劑質(zhì)量尺度研究周娟娟,潘金火,盧歡,朱寧靜,潘文【摘要】目的創(chuàng)立清燥潤肺合劑的質(zhì)量尺度。要領(lǐng)接納薄層色譜法對制劑中桑葉、甘草、北沙參、麥冬、枇杷葉舉行定性區(qū)分；接納高效液相色譜法對制劑中甘草酸含量舉行測定。結(jié)果薄層色譜中陰性無滋擾,專屬性強；甘草酸在0.2031～1.6921μg范疇內(nèi)線性干系精良,r＝0.9998,均勻接納率為98.24%,rsd＝2.62%。結(jié)論本試驗創(chuàng)立的要領(lǐng)輕便、快捷,重復性好,可用于清燥潤肺合劑的質(zhì)量操縱。【關(guān)鍵詞】清燥潤肺合劑；質(zhì)量尺度；甘草酸；高效液相色譜法；薄層色譜法keyrds：qingzarunfeiixture；qualitystandard；glyyrrhiziaid；hpl；tl清燥潤肺合劑由桑葉、石膏、甘草、黑芝麻、北沙參、麥冬、枇杷葉等9味藥材構(gòu)成。具有清燥潤肺之效,用于燥氣傷肺、干咳無痰、氣逆而喘、咽干鼻燥、心煩口渴等病癥。筆者按照處方構(gòu)成藥物的理化性子[1]及重復試驗,對桑葉、甘草、北沙參、麥冬、枇杷葉舉行了區(qū)分,同時,接納高效液相色譜法測定了制劑中甘草酸的含量,創(chuàng)立了可靠、不變、簡樸的質(zhì)量操縱要領(lǐng)。1儀器與試藥agilent1100高效液相色譜儀,agilent1100紫外檢測器,hphestatins事情站。清燥潤肺合劑10批樣品由揚州市三藥制藥消費并提供(批號為061101、061102、061103、061104、061105、061106、061107、061126、061128、061130)；甘草藥材購自揚州市藥材公司(由揚州市三藥制藥提供,批號為060912、060920、060928),經(jīng)南京中醫(yī)藥大學王春根傳授斷定為豆科植物甘草的枯燥根及根莖；甘草酸銨比較品購自中國藥品生物成品檢定所(批號110731-202211)。硅膠g由青島海洋化工場消費；全部試劑由上海久億化學試劑消費,均為闡發(fā)純或色譜純。2定性區(qū)分2.1桑葉取桑葉比較藥材2g,加石油醚(60～90℃)20l,超聲處置懲罰20in,棄去石油醚液,藥渣揮干,加無水乙醇30l,超聲處置懲罰20in,濾過,濾液蒸干,殘渣加水30l使溶解,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1l使溶解,作為比較藥材溶液。取本品20l,蒸干,殘渣加80%乙醇50l,超聲處置懲罰20in,濾過,濾液蒸干,殘渣加水30l使溶解,濾過,濾液蒸干,殘渣加甲醇1l使溶解,作為供試品溶液。取除桑葉以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品20l,用與供試品溶液制備雷同的要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述3種溶液各5μl,別離點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠g薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)的上層溶液為睜開劑,置于睜開劑預飽和20in的睜開缸內(nèi),睜開,取出,晾干,置紫外光燈(365n)下檢視。供試品色譜中,在與比較藥材色譜對應的位置上,表現(xiàn)雷同顏色的熒光斑點,而陰性比較液無此斑點。2.2甘草[2]取甘草比較藥材1g,加乙醚30l,超聲處置懲罰20in,濾過,藥渣揮干,加甲醇30l,超聲處置懲罰20in,濾過,濾液揮干,殘渣加水30l使溶解,濾過,用水飽和的正丁醇萃取2次,每次20l,歸并正丁醇液,用水洗滌2次,每次20l,取正丁醇液,蒸干,殘渣加甲醇1l使溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,加乙醚30l,超聲處置懲罰20in,靜置分層,置分液漏斗中,分出水層,用水飽和的正丁醇提取2次,每次20l,歸并正丁醇液,用水洗滌2次,每次20l,取正丁醇液,蒸干,殘渣加甲醇1l使溶解,作為供試品溶液。取除甘草以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述3種溶液各5μl,別離點于同一硅膠g薄層板上,以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為睜開劑,睜開,取出,晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清楚。供試品色譜中,在與比較藥材色譜相應位置上,顯雷同顏色的斑點,陰性比較液無滋擾。2.3北沙參取北沙參比較藥材5g,加乙醚30l,加熱回流1h,濾過,濾液揮干,殘渣加乙醇1l使溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,蒸干,殘渣加乙醇20l使溶解,濾過,濾液蒸干,殘渣加乙醇1l使溶解,作為供試品溶液。取除北沙參以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述3種溶液各10μl,別離點于同一硅膠g薄層板上,以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(1∶1)為睜開劑,睜開,取出,晾干,置氨缸內(nèi)熏40in,紫外光燈(365n)下檢視。供試品色譜中,在與比較藥材色譜對應的位置上,表現(xiàn)雷同顏色的熒光斑點,陰性比較液無滋擾。2.4麥冬取麥冬比較藥材2g,加水20l,加鹽酸2l,煮沸2in,放冷,濾過,濾液用三氯甲烷10l萃取,取三氯甲烷液,蒸干,殘渣加三氯甲烷0.5l溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,加鹽酸1l,煮沸2in,放冷,濾過,濾液用三氯甲烷10l萃取1次,取三氯甲烷液,蒸干,殘渣加三氯甲烷0.5l使溶解,作為供試品溶液。取除麥冬以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述溶液各約5μl,別離點于同一硅膠g薄層板上,以三氯甲烷-甲醇(20∶1)為睜開劑,睜開,取出,晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清楚。供試品色譜中,在與比較藥材色譜相應位置上,顯雷同顏色的斑點,陰性比較液無滋擾。2.5枇杷葉取枇杷葉比較藥材5g,加水200l煎煮2h,濾過,濾液用5%的氫氧化鈉溶液調(diào)ph值至10,用乙酸乙酯40l萃取,濃縮,殘渣加1l甲醇溶解,作為比較藥材溶液。取本品10l,加水20l稀釋,搖勻,濾過,用5%的氫氧化鈉溶液調(diào)ph值至10,用乙酸乙酯40l萃取,濃縮,殘渣加1l甲醇溶解,作為供試品溶液[3]。取除枇杷葉以外的別的8味藥材按處方比例制得的陰性樣品10l,按供試品溶液制備要領(lǐng)制得陰性比較液。汲取上述溶液各約10μl,別離點于同一硅膠g薄層板上,以三氯甲烷-甲醇-水(8∶4∶1)為睜開劑,睜開,取出,晾干,噴以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清楚。供試品色譜中,在與比較藥材色譜相應位置上,顯雷同顏色的斑點,陰性比較液無滋擾。3含量測定3.1色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為添補劑；以甲醇-水-冰醋酸(63∶36.6∶0.4)為活動相；檢測波長為250n；柱溫30℃。理論塔板數(shù)按甘草酸峰盤算應不低于3000。3.2比較品溶液的制備細密稱取甘草酸銨比較品,加甲醇制成0.2073g/l的溶液。細密量取5l,置10l量瓶中,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得0.10365g/l的比較品溶液。3.3供試品溶液的制備取10個批號的樣品,每批取2份,別離細密量取20l,加水飽和的正丁醇20l,超聲30in,置分液漏斗中取正丁醇液。下層加水飽和的正丁醇20l萃取,歸并正丁醇液,蒸干,殘渣用甲醇定量轉(zhuǎn)移至10l量瓶中,定容,搖勻,即得。3.4空缺試驗取除甘草以外的別的8味藥材,按處方比例制得陰性樣品,按供試品溶液的制備要領(lǐng)制得陰性比較液。細密汲取10μl,一連進樣3次。結(jié)果表白,空缺比較液未檢出與甘草酸銨比較液對應的色譜峰,視為空缺無滋擾。色譜圖見圖1。3.5線性干系觀察別離汲取濃度為0.10365g/l的甘草酸銨比較品溶液(折合甘草酸為0.10153g/l)2、4、6、8、10l,用甲醇定容至10l,各進樣10μl。以甘草酸銨均勻峰面積為縱坐標,進樣量(μg)為橫坐標舉行線性回歸,得回歸方程：y＝721.62x－16,r＝0.9998,指標身分甘草酸的線性范疇為0.2031～1.6921μg。3.6細密度試驗細密汲取同一比較品溶液10μl,一連進樣5次,結(jié)果測得甘草酸銨峰面積值的rsd＝0.71%。3.7不變性試驗細密汲取批號為061105的樣品溶液10μl,每隔斷2h進樣1次,一連觀察10h,峰面積的rsd＝0.74%,表白指標身分在10h內(nèi)比力不變。3.8重復性試驗取同一批號(061105)的樣品5份,按“樣品測定〞項下要領(lǐng)測得樣品中甘草酸銨的含量,rsd＝2.11%,表白重復性精良。3.9加樣接納率試驗取含量同一批號(061105)的樣品6份,細密量取10l,別離細密參加濃度為0.10365g/l的甘草酸銨比較液4l,按供試品溶液的制備要領(lǐng)制得供試液。照“樣品測定〞項下要領(lǐng)測定,盤算樣品中甘草酸銨含量及加樣接納率,結(jié)果見表1。表1加樣接納率試驗結(jié)果〔略〕3.10樣品測定取10個批號的樣品適量,按供試品溶液的制備要領(lǐng)制成供試品溶液。按上述色譜條件,別離進樣10μl,各進2針,用尺度曲線法盤算含量。10個批號樣品甘草酸含量測定結(jié)果依次為0.0318、0.0383、0.0393、0.0371、0.0389、0.0386、0.0385、0.0389、0.0391、0.0391g/l。4討論在定性區(qū)分的拔取上,由于苦杏仁中的重要身分是苦杏仁苷,且其他身分的含量很少,而枇杷葉中也同樣含有苦杏仁苷,故未對苦杏仁舉行試驗；而阿膠、黑芝麻的區(qū)分,顛末試驗,陰性均有滋擾；故暫未創(chuàng)立此3味藥的區(qū)分要領(lǐng)。試驗表白,上述桑葉、甘草、北沙參、麥冬、枇杷葉的區(qū)分專屬性強,重復性好,操縱輕便。本試驗曾以甲醇為活動相a,水相為活動相b,此中水相由水-冰醋酸(100∶1)構(gòu)成,a∶b＝66∶34,試驗結(jié)果表現(xiàn),甘草酸銨峰