人乳頭瘤病毒（HPV）疫苗的研究進(jìn)展

人乳頭瘤病毒〔HPV〕疫苗的研究希望[關(guān)鍵詞]宮頸癌康健網(wǎng)訊:李娟王佑春宮頸癌是嚴(yán)峻危害婦女康健和生命的疾病，每年約有50萬(wàn)新發(fā)病例，25萬(wàn)人死亡，是引起婦女殞命的第二大緣故原由，此中大部門(mén)在生長(zhǎng)中國(guó)度，占80%擺布［1］。1977年德國(guó)粹者ZurHausen等從宮頸癌標(biāo)本中創(chuàng)造白人乳頭瘤病毒〔huanpapillavirus，HPV〕DNA，推測(cè)HPV熏染與宮頸癌產(chǎn)生有關(guān)。進(jìn)一步的分子盛行病學(xué)證據(jù)表白，HPV與人類(lèi)多種癌癥，特殊是與宮頸癌有著嚴(yán)密的干系。由國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)〔IAR〕構(gòu)造在22個(gè)國(guó)度舉行了針對(duì)引起侵襲性宮頸癌〔I〕的HPV范例的觀察［2］。構(gòu)造學(xué)確診為I的1000個(gè)病例中有99.7%創(chuàng)造HPVDNA陽(yáng)性，其上HPV的范例重要為HPV16〔53%〕和HPV18〔15%〕。1機(jī)體對(duì)HPV熏染的免疫反響HPV屬乳頭多瘤空泡病毒科〔Papvaviridae〕乳頭瘤病毒屬，是一類(lèi)熏染表皮和粘膜鱗狀上皮的小DNA病毒。其基因組為雙鏈環(huán)狀DNA，長(zhǎng)7.5～8.0kb，含8個(gè)開(kāi)放閱讀框〔penreadingfraes，RFs〕，依成效差異分3個(gè)區(qū):〔1〕早期區(qū)〔earlyregin，E區(qū)〕:別離編碼E1、E2、E4、E5、E6、E7等六個(gè)早期卵白，到場(chǎng)病毒DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯調(diào)控和轉(zhuǎn)化等成效。〔2〕晚期區(qū)〔lateregin，L區(qū)〕:編碼重要外殼卵白L1和次要外殼卵白L2。〔3〕非編碼區(qū)〔undingregin，UR〕或上游調(diào)控區(qū)〔URR〕:含有HPV基因組DNA的復(fù)制出發(fā)點(diǎn)和HPV表達(dá)所必須的調(diào)控元件。根據(jù)HPV熏染與宮頸癌產(chǎn)生的傷害性，將HPV分為低危型〔HPV1，6，11等〕和高危型〔HPV16，18，31，45等〕。低危型HPV重要引起表皮細(xì)胞良性增生，如HPV6和11型可引起生殖器疣和兒童復(fù)發(fā)性乳頭瘤。高危型HPV與宮頸上皮內(nèi)瘤的產(chǎn)生和惡變以及其他上皮性腫瘤的產(chǎn)生相干。HPV熏染在人群中較為平凡，大部門(mén)人在性生存開(kāi)始后，都熏染過(guò)該病毒。病毒通過(guò)受損的上皮構(gòu)造進(jìn)入基底層細(xì)胞，其復(fù)制周期受?chē)?yán)酷的調(diào)治，并依靠于病毒編碼的卵白質(zhì)和宿主上皮細(xì)胞的分化程度。病毒熏染通常為局部限定性，不引起炎癥反響。大多數(shù)人都能自行掃除病毒，只有一小部門(mén)人由于免疫體系的緣故原由無(wú)法掃除病毒，造成HPV連續(xù)存在，繼而生長(zhǎng)為宮頸癌。很多證據(jù)表白HPV熏染能引發(fā)宿主免疫反響，如大多數(shù)皮膚疣兩年內(nèi)可自覺(jué)消退，且多處熏染灶同時(shí)消退［3］。大多數(shù)人在性生存開(kāi)始后，都熏染過(guò)HPV，隨后熏染率低落，說(shuō)明免疫體系可以掃除病毒并恒久產(chǎn)生庇護(hù)作用。HPV中和抗體可以庇護(hù)機(jī)體免受病毒的熏染，但對(duì)已經(jīng)存在的病毒，那么必要細(xì)胞免疫來(lái)掃除已感染的細(xì)胞。在宮頸損傷病人的消退歷程中大多可檢測(cè)到細(xì)胞免疫反響的升高［4］;而免疫按捺如器官移植時(shí)，病人患疣的機(jī)率增大;HIV病人比康健人患鋒利濕疣的機(jī)率高2～7倍;由此可見(jiàn)，細(xì)胞介導(dǎo)的免疫機(jī)制對(duì)付操縱HPV熏染有緊張的作用。2HPV疫苗研究近況由于從熏染灶構(gòu)造中很難分散到病毒體，迄今未能創(chuàng)立體外造就體系舉行病毒造就。如今對(duì)宮頸癌的治療根本以手術(shù)和放療為主，給病人帶來(lái)很大的痛楚。防范HPV相干癌癥的最有用的要領(lǐng)是研制特異性的疫苗，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，引發(fā)庇護(hù)性免疫反響，到達(dá)有用防范與癌癥相干型的HPV流傳的目的，低落宮頸癌的發(fā)生率，而且大概低落與HPV熏染弱相干的癌癥如肛門(mén)、外陰或扁桃體癌的產(chǎn)生率。由于E6、E7卵白具有轉(zhuǎn)化活性，利用全病毒做疫苗有致癌的傷害，因此，如今的研制標(biāo)的目的重要會(huì)合在亞單元疫苗方面。根據(jù)其成效差異，疫苗分為防范性疫苗和治療性疫苗。防范性疫苗多以HPV的重要衣殼卵白L1體外表達(dá)形成的病毒樣顆粒〔VLPs〕為靶抗原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性的中和抗體。治療性疫苗那么以HPV早期卵白如改造過(guò)的E6、E7卵白作為靶抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的細(xì)胞免疫反響，用于IN和宮頸癌的免疫治療。比年來(lái)研究的如嵌合型病毒樣顆粒疫苗、HPV假病毒疫苗等同時(shí)具有防范和治療雙重成效。2.1病毒樣顆?！睼LPs〕HPV有兩種衣殼卵白，重要衣殼卵白L1和次要衣殼蛋白L2。在天然HPV病毒顆粒形成歷程中，衣殼卵白包裝病毒DNA形成成熟的病毒顆粒。研究表白，在很多表達(dá)體系如哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母和細(xì)菌［5，6］中，單獨(dú)L1或L1和L2共表達(dá)后可自行組裝成不含病毒DNA的病毒樣顆?！睼LPs〕，這種VLPs布局與天然的病毒顆粒相似，用來(lái)免疫動(dòng)物誘導(dǎo)產(chǎn)生高滴度的中和抗體，證明在VLP外貌存在中和抗體的表位［7］。由于L1抗體識(shí)別構(gòu)象依靠的型特異表位，因此，保持必然的空間構(gòu)象對(duì)VLP的免疫原性非常緊張。當(dāng)其變性后便失去誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體的本領(lǐng)。HPVVLPs還能通過(guò)HI途徑誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫。HPV16型L1裝配成的VLPs經(jīng)鼻免疫小鼠后，可在脾及陰道淋巴構(gòu)造中產(chǎn)生淋巴細(xì)胞增殖。以產(chǎn)生IFN-γ的D4+T細(xì)胞增為主，髂骨淋巴細(xì)胞中增生的T淋巴細(xì)胞具有TL活性，說(shuō)明VLPs可誘導(dǎo)HI類(lèi)限定性D8+反響［8］。動(dòng)物實(shí)行證明VLP誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體對(duì)動(dòng)物的庇護(hù)率險(xiǎn)些到達(dá)100%，說(shuō)明體液免疫充足庇護(hù)機(jī)體免受病毒的熏染。對(duì)VLP疫苗舉行的一些臨床試驗(yàn)也證明白其寧?kù)o有用性。在康健人群中舉行的隨機(jī)、雙盲實(shí)行對(duì)HPV16L1VLP的寧?kù)o性和免疫原性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果表白全部的疫苗均有極好的耐受性，受試者均產(chǎn)生血清陽(yáng)轉(zhuǎn)，在沒(méi)有佐劑的環(huán)境下也有很好的免疫原性［9］。HPV11L1VLP在康健志愿者中舉行的Ⅰ期臨床試驗(yàn)得到相似的結(jié)果。由erk，GlaxSithKline和NIH消費(fèi)的VLPs疫苗和差異的早期卵白與L1/L2卵白構(gòu)成嵌和病毒樣顆粒VLP正在舉行Ⅲ期臨床試驗(yàn)［10］。Ⅰ和Ⅱ期臨床實(shí)行證明HPVVLPs疫苗是寧?kù)o的，并有高度的免疫原性，VLPs免疫后誘導(dǎo)產(chǎn)生的中和抗體效價(jià)是天然熏染的100倍。1998年10月～1999年11月，在美國(guó)女性中舉行了HPV16L1VLP臨床試驗(yàn)。酵母表達(dá)的VLP純化后吸附于鋁佐劑，免疫組抗體效價(jià)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于比較組。免疫后17.4個(gè)月跟蹤觀察表現(xiàn)，比較組HPV16連續(xù)熏染率為3.8%，免疫組為0。全部9例HPV16相干的宮頸上皮內(nèi)瘤均產(chǎn)生在比較組［11］。該實(shí)行結(jié)果充實(shí)說(shuō)明白VLP是最有前程的疫苗之一。高危型HPV的早期卵白E6、E7連續(xù)表達(dá)于HPV熏染的腫瘤細(xì)胞上，因此，可作為誘導(dǎo)腫瘤特異性TL反響的最正確靶抗原。uller等［12］用HPV16E7卵白部門(mén)序列取代L1卵白端34的氨基酸，構(gòu)建了VLP。實(shí)行證明端插入60個(gè)氨基酸不影響VLP的形成，免疫動(dòng)物后誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體。因此，利用這一特點(diǎn)，端還可以插入別的HPV特異序列或非HPV特異序列，如的腫瘤抗原的T細(xì)胞表位。種種研究證明差異HPV誘導(dǎo)的中和抗體的庇護(hù)作用具有型特異性。利用ELISA和交織中和實(shí)行對(duì)九種HPV〔6，11，16，18，31，33，35，39，45〕亞型舉行了免疫活性闡發(fā)，HPV衣殼卵白具有高度的免疫原性和型特異性，但差異范例之間的交織中和活性很低［13］。體外熏染實(shí)行表白只有同型的VLP抗血清才氣中和假病毒顆粒。因此，很多疫苗接納多型混淆免疫的計(jì)謀，如包羅16，18，31和45的VLPs可以或許防范75%的宮頸癌［1］。在防范性疫苗VLPs中至少還應(yīng)該包羅一種非癌基因型HPV，如HPV6重要引起生殖疣，針對(duì)它的抗體與HPV11有交織中和活性，而HPV11是引起生殖疣的第二大緣故原由。包羅低危型HPV的多價(jià)疫苗有大概辦理生殖疣高頻率產(chǎn)生的題目和治療上的困難。2.2DNA疫苗DNA疫苗是將編碼外源卵白基因的質(zhì)粒DNA直接導(dǎo)入體內(nèi)，外源基因表達(dá)后呈遞給免疫體系，別離誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫和體液免疫應(yīng)答。在已往的十多年里，DNA疫苗研究已經(jīng)從實(shí)行室生長(zhǎng)到開(kāi)端的臨床試驗(yàn)階段，成為防治熏染并腫瘤的研究熱門(mén)。如今研究的HPVDNA疫苗既有包羅早期基因的治療性疫苗，也有包羅晚期基因的防范性疫苗。HPV16L1DNA疫苗能有用刺激陰道D8+T細(xì)胞，這對(duì)消除病毒熏染的細(xì)胞非常緊張。當(dāng)生殖道粘膜基底層鱗狀上皮細(xì)胞表露于病毒時(shí)，就會(huì)熏染HPV。有用防范HPV熏染的疫苗應(yīng)該在病毒入侵的局部提供免疫庇護(hù)作用。排泄型IgA能夠與病毒結(jié)合，制止其附著上皮細(xì)胞，因此，具有病毒中和活性的SIgA在防范局部熏染和疾病的產(chǎn)生中起著緊張的作用，是防范病毒侵入的第一道防地。在人和猴子的生殖道粘膜構(gòu)造中檢測(cè)細(xì)胞免疫和抗體排泄細(xì)胞證明，適當(dāng)?shù)拿庖咄緩娇梢曰蛟S在生殖道誘發(fā)產(chǎn)生抗體和TL反響。HPV16L1DNA疫苗鼻腔免疫BALB/后，產(chǎn)后細(xì)胞免疫和陰道粘膜局部免疫，但只能誘發(fā)弱的體液免疫反響。因此，鼻內(nèi)免疫不克不及作為一個(gè)有用的途徑，可以與HPV16L1VLP結(jié)合利用，加強(qiáng)VLP的免疫本領(lǐng)［14］。其他的一些實(shí)行證明粘膜免疫不但產(chǎn)生在疫苗注射部位，還可產(chǎn)生在遠(yuǎn)端粘膜部位［15］。HPV16E7DNA疫苗免疫小鼠，誘導(dǎo)產(chǎn)生較強(qiáng)的E7特異性TL反響，庇護(hù)小鼠免受腫瘤細(xì)胞的打擊。利用突變的E7DNA疫苗免疫產(chǎn)生的庇護(hù)作用優(yōu)于野生型DNA疫苗免疫結(jié)果。由于E7卵白的轉(zhuǎn)化活性，接納差異要領(lǐng)將其突變來(lái)消除轉(zhuǎn)化活性，增長(zhǎng)疫苗的寧?kù)o性［16］。利用改革過(guò)的DNA免疫57BL/6小鼠，不但誘導(dǎo)產(chǎn)生E7特異性TL，還能庇護(hù)小鼠免受E7陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的打擊。DNA疫苗的寧?kù)o性，特殊是免疫后質(zhì)粒的構(gòu)造漫衍和整合是限定其應(yīng)用的重要題目。差異實(shí)行室對(duì)此類(lèi)題目舉行了多方面的研究［17，18］，沒(méi)有創(chuàng)造外源DNA與基因組整合的證據(jù)，同時(shí)還證明DNA疫苗接種后不會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生自身DNA抗體，引起免疫體系成效紊亂。19GaL，hainB，Sinlair，etal.Iunerespnsethuanpapillˉavirustype16E6geneinalivevainiavetr.JurnalfGeneralVirlgy，1994，75:157-164.20Dariusz，Kalzyk.VaineregienfrpreventinfsexuallytransittedinfetinsithHPV16.Vaine，2001，19:3583-3590.21LndnLP，hatfieldS，TindleR，etal.IunizatinfieusingSalnellatyphiuriuexpressingHPV16E7epitpesinsertedinthepatitisBvirusreantigen.Vaine，1996，14:545-552.22JabbarIA，F(xiàn)ernandGJP，Sa