乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)課件_第1頁
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文檔簡介

實驗材料實驗方法操作步驟及人員落實預(yù)期結(jié)果實驗?zāi)康囊饬x

目的：掌握原代細(xì)胞培養(yǎng)的一般方法和步驟及培養(yǎng)過程中的無菌操作技術(shù)，熟悉原代培養(yǎng)細(xì)胞的觀察方法。意義：原代培養(yǎng)是指直接從機體取出細(xì)胞、組織和器官后立即置于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞得以生存、生長和繁殖。原代培養(yǎng)細(xì)胞離體時間短，細(xì)胞保持體內(nèi)原有的基本性質(zhì)，適用于研究。一般說來，幼稚狀態(tài)的組織和細(xì)胞（如動物的胚胎、幼仔的臟器）等更容易進行原代培養(yǎng)。前期準(zhǔn)備實驗取材消化組織培養(yǎng)細(xì)胞將備用物品（手術(shù)器械、培養(yǎng)皿、燒杯、離心管等）進行高壓滅菌；用酒精擦拭層流臺，將高壓滅菌后的物品放入層流臺，紫外線消毒30分鐘。前期準(zhǔn)備用鑷子夾住小鼠尾巴將小鼠在酒精中浸泡兩次，約2~3秒；用剪刀將小鼠頭部剪去；將動物固取材器官范圍的被毛，定在解剖板上并將胸部剪開暴露出心臟，用另一個剪刀將小鼠心臟剪下；放入裝有預(yù)冷的Hanks液的培養(yǎng)皿中，將心臟剪開,剪碎組織至1mm3左右，清洗殘留的血液。將心肌組織轉(zhuǎn)移至另一個裝有預(yù)冷的Hanks液的培養(yǎng)皿中進一步剪碎心臟后，加入等體積的0.125％胰酶；將心肌組織轉(zhuǎn)移至離心管中，用吸管反復(fù)吹打（使消化下來的細(xì)胞徹底從組織團快上掉下來）10min,靜置2min后，棄上清；再次加入Hanks液和等體積的0.125％胰酶，常溫下用吸管反復(fù)吹打10min，靜置2min后將上層液轉(zhuǎn)移至100ml容器中，加入含10%小牛血清的1640培養(yǎng)基終止消化；重復(fù)

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