試驗五 血液葡萄糖的測定課件

試驗五血液葡萄糖的測定福林——吳憲氏法葡萄糖是一種多羥基醛類化合物，具有還原性，在與堿性銅試劑混合加熱時，將二價銅還原為磚紅色的氧化亞銅沉淀。＋Cu2+COOHCu2O↓＋OHOHOHOHOHO氧化亞銅可使磷鉬酸還原生成鉬藍，使溶液呈藍色。生成藍色的深度與血濾液中的葡萄糖濃度成正比，從而間接測定葡萄糖濃度。H3PO4·12MoO3＋Cu2O↓鉬藍鉬藍是鉬以混合價態(tài)所形成的一系列氧化物和氫氧化物混合型化合物之總稱。因呈深藍色。鉬的平均化合價在5～6之間。用不同的還原方式可以得到不同狀態(tài)的鉬藍。由溫和的還原劑（如二價錫、二氧化硫、聯(lián)氨或硫化氫等）還原微酸性的鉬酸鹽稀溶液時，得懸膠狀的鉬藍；后者用于鉬的比色測定。由氫化鋁鋰還原氧化鉬，則得晶體鉬藍，例如：Mo4O10(OH)2及Mo8O15(OH)6等。

工作原理不同物質(zhì)的吸收光譜是不同的.因此根據(jù)吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì).

當(dāng)一束單色光照射待測物質(zhì)的溶液時，當(dāng)某一定頻率（或波長）的可見光所具有的能量（hf）恰好與待測物質(zhì)分子中的價電子的能級差相適應(yīng)（即ΔE=E2-E1=hf）時，待測物將對該頻率（波長）的可見光產(chǎn)生選擇性的吸收。用可見分光光度計可以測量和記錄其吸收程度（吸光度）。由于在一定條件下，吸光度A與待測物質(zhì)的濃度C及吸收池長度L的乘積成正比，即A＝KCL

在測得吸光度A后，可采用標準曲線法、比較法以及標準加入法等方法進行定量分析。分光光度計分光光度計的分類:

紅外分光光度計:

測定波長范圍為大于760

nm的紅外光區(qū)

可見光分光光度計:

測定波長范圍為400~760

nm的可見光區(qū)(本次試驗波長:420nm)

紫外分光光度計:

測定波長范圍為200～400

nm的紫外光物質(zhì)的吸收光譜:如果在光源和棱鏡之間放上某種物質(zhì)的溶液,光源發(fā)射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,使得屏上所顯示的光譜不再是光源的光譜,它出現(xiàn)了幾條暗線,即這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜.分光光度計用法調(diào)波長到420nm處開蓋調(diào)零，關(guān)蓋調(diào)100%（透射比處）讀數(shù)（吸光度處）用完后將蓋打開，否則光電管會一直工作，損害較大實驗試劑1/6mol/L硫酸溶液葡萄糖貯存標準液葡萄糖應(yīng)用標準液1：4磷鉬酸稀釋液實驗步驟一、無蛋白血濾液的制備4.9ml蒸餾水

0.7ml全血

0.7ml2/3NH2SO4混勻即得血濾液放置5min,2500rpm離心10分鐘,取上清備用.0.7ml10%鎢酸鈉

實驗步驟三、計算葡萄糖含量測定管光密度值標準管光密度值測定管濃度標準管濃度

=按以下公式計算葡萄糖含量：1、加磷酸鉬試劑之前，溶液要充分混勻，待水沸騰后，精確煮沸8分鐘，沸水浴中加熱過程中不要搖動，冷卻時也切勿搖動血糖管。---避免生成的亞銅被氧氣再氧化。3、先加入磷鉬酸2.0ml，再加入1：4的磷鉬酸溶液至25ml，加樣時注意不要加錯。4、分光光度