微生物基礎(chǔ)知識(shí)及無(wú)菌操作課件

微生物基礎(chǔ)知識(shí)及無(wú)菌操作2011\8\25目錄一、微生物概論二、微生物的類(lèi)群和形態(tài)結(jié)構(gòu)三、微生物的污染源及其污染途徑四、藥品變質(zhì)與微生物五、消毒與滅菌六、藥品的衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)七、無(wú)菌操作一、微生物概論微生物（microorganism,microbe）是一類(lèi)個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，肉眼不可見(jiàn)或看不清楚的微小生物的統(tǒng)稱。微生物的特點(diǎn)：

個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單:細(xì)胞大小以微米和納米計(jì)量。

種類(lèi)繁多、分布廣泛：一克沃土中含菌量高達(dá)幾億甚至幾十億

生長(zhǎng)繁殖快，代謝能力強(qiáng)：大腸桿菌（Escherichiacoli）在適宜的條件下，每20分鐘即繁殖一代，24小時(shí)即可繁殖72代。

遺傳穩(wěn)定性差，容易發(fā)生變異：自發(fā)突變頻率為10-6左右

二、微生物的類(lèi)群和形態(tài)結(jié)構(gòu)細(xì)菌（例：金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、沙門(mén)氏菌等）；霉菌（毛霉屬、根霉屬、曲霉屬、青霉屬等）；酵母菌（酵母屬、假絲酵母屬等）；

細(xì)菌是一類(lèi)細(xì)胞細(xì)而短（細(xì)胞直徑約0.5μm,0.5-5μm）、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、細(xì)胞壁堅(jiān)韌以二等分裂方式繁殖和水生性較強(qiáng)的原核微生

物，分布廣泛。霉菌是絲狀真菌的俗稱，意即"發(fā)霉的真菌"，它們往往能形成分枝繁茂的菌絲體，但又不象蘑菇那樣產(chǎn)生大型的子實(shí)體。在潮濕溫暖的地方，很多物品上長(zhǎng)出一些肉眼可見(jiàn)的絨毛狀、絮狀或蛛網(wǎng)狀的菌落，那就是霉菌。構(gòu)成霉菌營(yíng)養(yǎng)體的基本單位是菌絲。根據(jù)菌絲中是否存在隔膜，可把霉菌菌絲分成兩種類(lèi)型霉菌的菌絲上：無(wú)隔膜菌絲；下：有隔膜菌絲霉菌菌絲的變態(tài)吸器假根菌網(wǎng)和菌環(huán)a.菌環(huán)；b.簡(jiǎn)單菌網(wǎng)；c.復(fù)雜菌網(wǎng)三、微生物的污染源及其污染途徑微生物污染：因微生物產(chǎn)生、附著而給特定的環(huán)境帶來(lái)的不良影響。如果細(xì)菌得到了必要的養(yǎng)料、一定量的水份和合適的溫度，它們就能迅速繁殖，它們繁殖的速度快得驚人。通常一個(gè)細(xì)菌在僅僅2小時(shí)后可產(chǎn)生出281兆(百萬(wàn))個(gè)的細(xì)菌。水—微生物在純水中是不能生長(zhǎng)的。但是，所有的各類(lèi)水，不管怎樣仔細(xì)地蒸溜或過(guò)濾，總會(huì)含有一定量的可溶性有機(jī)物和鹽類(lèi)。正是這些可溶性的物質(zhì)可被微生物利用作為它們生長(zhǎng)的養(yǎng)料源泉。水用于生產(chǎn)中，還用于設(shè)施、設(shè)備清洗中。措施：用經(jīng)過(guò)處理的水進(jìn)行藥品生產(chǎn)人—人體是一個(gè)永不休止的污染媒介。人的頭發(fā)和皮膚：每分鐘從人類(lèi)皮膚中要散發(fā)出約10,000個(gè)微生物嘴巴和鼻子——水滴：呼吸、咳嗽和噴嚏將產(chǎn)生出大量水滴，這種水滴既含有塵粒污染也含有微生物污染。咳嗽一次的發(fā)菌量為70～700個(gè)(min·人)，噴嚏一次的發(fā)菌量為4000～60000個(gè)(min·人).衣著：潔凈室內(nèi)當(dāng)工作人員穿無(wú)菌服時(shí)，靜止時(shí)的發(fā)菌量為10～300個(gè)/(min·人)，軀體一般活動(dòng)時(shí)的發(fā)菌量為150～1000個(gè)(min·人)，快步行走時(shí)的發(fā)菌量為900～2500個(gè)(min·人)化妝品和珠寶手飾：發(fā)膠、氣霧除臭劑、眼臉膏、香粉等，為微生物污染提供了極好的源泉。耳環(huán)、戒指、項(xiàng)鏈、手鏈等首飾，因?yàn)樗鼈冸y于清洗，所以可能成為感染源或污染源。生產(chǎn)過(guò)程中的人為差錯(cuò)：當(dāng)員工沒(méi)有按照SOP進(jìn)行工作時(shí)，車(chē)間的污染程度增加。五勤培養(yǎng)藥品生產(chǎn)人員良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣，做到“五勤”

勤洗澡

勤理發(fā)

勤刮胡須

勤修剪指甲

勤換衣服四、藥品變質(zhì)與微生物營(yíng)養(yǎng)豐富微生物代謝產(chǎn)物金屬離子促進(jìn)微生物生長(zhǎng)微生物污染的結(jié)果：

藥品變質(zhì)；服用了染致病菌的藥物患?。ɡ纾嚎赡芪廴敬竽c桿菌、沙門(mén)菌等致病菌的制劑會(huì)導(dǎo)致腸道傳染病的發(fā)生和流行）；產(chǎn)生內(nèi)毒素、熱原質(zhì)（肌體發(fā)熱，腹瀉，出血性休克或其他組織損傷）五、消毒與滅菌1、滅菌（Sterilization)→殺滅物體中所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物）的繁殖體和芽胞的方法。2、消毒(Pisinfection)→殺死病原微生物的方法。具有消毒作用的物質(zhì)叫做消毒劑。一般消毒劑在常用濃度下，只對(duì)細(xì)菌的繁殖體有效，對(duì)于細(xì)菌芽胞是無(wú)殺滅作用的。3、無(wú)菌(Aspsis)→沒(méi)有活的微生物存在的意思。

防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的方法叫無(wú)菌技術(shù)或無(wú)菌操作。常用的除菌方法物理滅菌法→火焚、火焰滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法、紫外線化學(xué)滅菌法→用化學(xué)藥物進(jìn)行滅菌的方法。機(jī)械除菌法→過(guò)濾除菌等。物理滅菌法高溫殺菌原理：菌體中蛋白質(zhì)包括酶類(lèi)在內(nèi)，過(guò)熱后引起凝固變性，失去活性，使代謝發(fā)生障礙而引起菌體死亡。特點(diǎn)；高壓蒸汽滅菌法：通過(guò)加壓提高蒸汽溫度，其具有穿透力強(qiáng)、溫度高、滅菌效果好的特點(diǎn)，是簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、可靠、無(wú)毒的安全滅菌方法。紫外線滅菌原理：

1、260nm波長(zhǎng)輻射對(duì)細(xì)菌有殺滅作用。

2、產(chǎn)生微量臭氧也有一定殺菌作用。

特點(diǎn)穿透力較弱，僅適用于物體表面、空氣消毒。

使用時(shí)注意人員個(gè)人防護(hù)六、藥品的衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)菌落（colony）：?jiǎn)蝹€(gè)（或聚集在一起的一團(tuán)）微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)、繁殖到一定程度可以形成肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞生長(zhǎng)群體。細(xì)菌、霉菌、酵母菌的菌落特征因種而異。可作為鑒定微生物種類(lèi)的依據(jù)。菌落單位為CFU(Colony-FormingUnits)菌落形態(tài)細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤(rùn)、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。酵母菌大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細(xì)菌相似，但比細(xì)菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤(rùn)、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個(gè)別為黑色。啤酒酵母的菌落

紅酵母的菌落各種酵母菌的菌落評(píng)價(jià)藥品的一般污染時(shí)采用菌落單位CFU(Colony-FormingUnits)（每克或每毫升）表示。一方面可以判明藥品被細(xì)菌污染的程度，以及生產(chǎn)單位所用的原料、工具設(shè)備、工藝流程、操作者的衛(wèi)生狀況。另一方面可以推測(cè)致病微生物存在的可能性?；旧铣尸F(xiàn)正相關(guān)。評(píng)價(jià)藥品微生物污染的指標(biāo)菌是大腸埃希氏菌，來(lái)源于人和溫血?jiǎng)游锏募S便，檢出該菌說(shuō)明產(chǎn)品已被糞便污染，有可能存在其他腸道致病菌或寄生蟲(chóng)等病原體的危險(xiǎn)?？诜瑒┪⑸锵薅燃?xì)菌數(shù)≤1000cfu/g霉菌和酵母菌數(shù)≤100cfu/g大腸埃希菌不得檢出/g七、無(wú)菌操作無(wú)菌(Aspsis)→沒(méi)有活的微生物存在的意思。

防止微生物進(jìn)入機(jī)體或物體的方法叫無(wú)菌技術(shù)或無(wú)菌操作。要求1、操作前將界面上的細(xì)菌和病毒等微生物殺滅。2、操作過(guò)程中是界面與外界隔離,避免微生物的侵入。無(wú)菌操作原則一、在執(zhí)行無(wú)菌操作時(shí)，必須明確物品的無(wú)菌區(qū)和非無(wú)菌區(qū)。二、執(zhí)行無(wú)菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并將手擦干，注意空氣和環(huán)境清潔。三、夾取無(wú)菌物品，必須使用無(wú)菌持物鉗。無(wú)菌操作間四、進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí)，凡未經(jīng)消毒的手、臂、均不可直接接觸無(wú)菌物品或超過(guò)無(wú)菌區(qū)取物。五、無(wú)菌物品必須保存在無(wú)菌包或滅菌容器內(nèi)，不可暴露在空氣中過(guò)久。無(wú)菌物與非無(wú)菌物應(yīng)分別放置。無(wú)菌包一經(jīng)打開(kāi)即不能視為絕對(duì)無(wú)菌，應(yīng)盡早使用。凡已取出的無(wú)菌物品雖未使用也不可再放回?zé)o菌容器內(nèi)。六、無(wú)菌包應(yīng)按消毒日期順序放置在固定的柜櫥內(nèi)，并保持清潔干燥，與非滅菌包分開(kāi)放置，并經(jīng)常檢查無(wú)菌包或容器是否過(guò)期，其中用物是否適量。七、無(wú)菌鹽水及酒精、新潔爾滅棉球罐每周消毒一次，容器內(nèi)敷料如干棉球、紗布?jí)K等，不可裝得過(guò)滿，以免取用時(shí)碰在容器外面被污染。無(wú)菌操作技術(shù)及注意事項(xiàng)1、玻璃器皿的消毒和清潔清潔:一般試管或容器、細(xì)菌培養(yǎng)用的試管和培養(yǎng)皿、吸管洗滌劑浸泡洗刷滅菌：將玻璃器具中的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、試管、吸管等按上述方法洗凈烘干后，用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，裝入干凈的鋁盒或鐵盒中，于160～170℃的干燥箱中干燥滅菌2小時(shí)，取出備用。2、保持工作區(qū)的無(wú)菌、清潔在操作前20～30分鐘要先啟動(dòng)超凈臺(tái)和紫外燈，并認(rèn)真洗手和消毒。在操作時(shí)，嚴(yán)禁喧嘩，嚴(yán)禁用手直接拿無(wú)菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的鑷子等。培養(yǎng)瓶應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)操作，并且在開(kāi)啟和加蓋瓶塞時(shí)需反復(fù)用酒精燈燒。對(duì)于吸管應(yīng)先用手拿后1/3處，戴上膠皮乳頭，并用酒精燈燒烤之后再吸液體。