細(xì)菌的檢驗(yàn)技術(shù)

關(guān)于細(xì)菌的檢驗(yàn)技術(shù)許欣1第1頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣2第一節(jié)樣本的采集與送檢在公共衛(wèi)生及預(yù)防醫(yī)學(xué)領(lǐng)域所涉及的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本種類繁多，包括來自食品、化妝品、涉水產(chǎn)品、消毒及衛(wèi)生用品、環(huán)境及物品（水、土壤、空氣，各種物品）、正常人體及臨床等的樣本。第2頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣3一、臨床樣本的采集與送檢（一）血及骨髓樣本的采集1.采樣時(shí)間：發(fā)熱期、用藥之前、病情發(fā)展2.采樣部位及頻率：多部位、高頻率3.樣本采集的量：成人血量10ml，嬰兒1ml～2ml，兒童3ml～5ml；當(dāng)懷疑為真菌感染時(shí)，應(yīng)采集雙份量，分別作雙相培養(yǎng)(37℃/28℃)。骨髓1ml～2ml。4.樣本的送檢：盡快，室溫5.注意事項(xiàng)：同時(shí)需氧和厭氧培養(yǎng)第3頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣4一、臨床樣本的采集與送檢（二）尿液樣本的采集1.采樣時(shí)間：晨尿、用藥前2.采樣方法：10ml，中段尿、腎盂尿、導(dǎo)尿3.注意事項(xiàng)：無菌操作，用藥前（三）糞便樣本的采集1.采樣時(shí)間：急性期、新鮮糞便2.采樣方法：自然排便、直腸拭子、Cary-Blair運(yùn)送培養(yǎng)基或pH7.0的甘油PBS3.注意事項(xiàng)：無菌操作、可能厭氧培養(yǎng)第4頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣5一、臨床樣本的采集與送檢（四）痰及上呼吸道樣本的采集1.采樣時(shí)間：晨痰、鼻咽拭子2.采樣方法：自然咳痰法、支氣管鏡采集法、胃內(nèi)采痰法、氣管穿刺法等；咽拭子3.注意事項(xiàng)：先漱口、結(jié)核分枝桿菌和真菌可4℃保存

第5頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣6一、臨床樣本的采集與送檢（五）其它臨床樣本化膿和創(chuàng)傷樣本：棉拭子

腦脊液、膽汁、胸水、腹水、心包液、關(guān)節(jié)液和鞘膜液等：穿刺生殖道：棉拭子

組織樣本：內(nèi)鏡炎癥或組織壞死部位：手術(shù)

第6頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣7二、食品衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本（一）樣品采集原則注意代表性，防止樣品受污染、變質(zhì)和細(xì)菌生長大樣(一整批)、中樣(混合200g)和小樣(檢樣25g)（二）樣品采集方法無菌用具、包裝完好、混合、震搖、冷凍、冷藏（三）采樣的數(shù)量根據(jù)食品種類的不同，采樣的數(shù)量也應(yīng)不同（四）注意事項(xiàng)3h內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，無菌操作第7頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣8三、化妝品細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本（一）采樣數(shù)量每批兩個(gè)大包裝抽取4個(gè)包裝，10g或10ml（二）樣本的處理1.液體樣品：10倍稀釋，油性物用液體石蠟、土溫-80

2.膏霜乳劑樣品：親水性-玻璃珠，疏水性-先行乳化3.固體樣品的處理：均質(zhì)后取上清液

（三）樣品送檢原則及注意事項(xiàng)1.維持樣品污染原狀（出廠污染狀態(tài)）2.去除殘留防腐劑及抑菌劑（吐溫-80和卵磷脂）3.注意事項(xiàng)（室溫存放，多項(xiàng)目時(shí)先做微生物）第8頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣9四、生活飲用水細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)樣本（一）水樣采集許多水體隨時(shí)間和空間會(huì)發(fā)生很大變化，要采集具有代表性的樣品，必須定出合理的采樣規(guī)劃。（二）采樣點(diǎn)的選擇注意樣品的代表性，河水、湖水、地下水、自來水（三）采樣器具采樣瓶、自動(dòng)采樣器、容器可加硫代硫酸鈉（四）樣品送檢及注意事項(xiàng)4h內(nèi)檢驗(yàn)、可冷藏第9頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣10五、消毒及衛(wèi)生用品（一）醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)消毒及衛(wèi)生用品物表：5cm×5cm滅菌規(guī)格板，100cm2

區(qū)域空氣：高度150cm、距墻100cm；面積≤30m2，設(shè)一條對(duì)角線上內(nèi)、中、外3點(diǎn)；面積＞30m2，設(shè)4角及中央5點(diǎn)，暴皿5min；或用采樣器手/皮膚粘膜：含中和劑棉拭子，5cm×5cm規(guī)格板醫(yī)療用品：破壞、棉拭子消毒劑：1ml加至9ml中和劑中第10頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣11五、消毒及衛(wèi)生用品（二）一次性使用的衛(wèi)生用品同一批號(hào)3個(gè)運(yùn)輸包裝中至少隨機(jī)抽取12個(gè)最小包裝量；1/4用于檢測、1/4用于留樣、2/4就地封存準(zhǔn)備復(fù)測。第11頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣12六、空氣樣本平板沉降法和采樣器采集法（一）空氣微生物采樣器分類按照采樣方式的不同可分為兩類(Ⅰ和Ⅱ類)，Ⅰ類是將微生物直接采到固體培養(yǎng)基上(如Andersen采樣器)，Ⅱ類是把微生物先采到液體或其它介質(zhì)上，再轉(zhuǎn)種到培養(yǎng)基或細(xì)胞上顯示(如Porton采樣器)。第12頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣13六、空氣樣本按照流量的有效數(shù)字分，3位數(shù)以上為大流量(≥500L/min)，2~3位數(shù)為中流量(499L/min～11L/min)，1位數(shù)為小流量(≤10L/min)。按照采樣器所用介質(zhì)性質(zhì)又可分為固體及液體采樣器。按采樣器的工作原理可分為六種：撞擊式、沉降式、過濾式、靜電吸附式、旋風(fēng)式和離心撞擊式采樣器。第13頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣14六、空氣樣本（二）空氣中細(xì)菌等微生物采樣的介質(zhì)采樣介質(zhì)(包括培養(yǎng)基)對(duì)細(xì)菌等微生物具有支撐、黏附、保護(hù)和生長作用。常用有凡士林、聚硅酮，氧化烯二十二烷酮(OED)和SGB(糖、甘油、牛血清白蛋白)（三）空氣中細(xì)菌等微生物采樣方法及送檢1.平板沉降法：參見醫(yī)院空氣采樣規(guī)定。2.空氣采樣器采樣：常用Andersen采樣器第14頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣15第二節(jié)細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查法了解標(biāo)本中有無細(xì)菌及其大致的數(shù)量。驗(yàn)證培養(yǎng)物是否為純種。形態(tài)檢查結(jié)果可做初步診斷。不染色檢查法和染色檢查法。借助顯微鏡對(duì)形態(tài)、大小、排列、結(jié)構(gòu)的直接觀察。第15頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣16一、顯微鏡檢查1、普通光學(xué)顯微鏡(lightmicroscope)：分辨率0.2μm，用于細(xì)菌染色標(biāo)本的觀察。2、暗視野顯微鏡(dark-fieldmicroscope)：具有暗視野聚光器，用于觀察不染色標(biāo)本活菌的形態(tài)、運(yùn)動(dòng)方式。3、相差顯微鏡(phasecontrastmicroscope)：具有環(huán)狀光柵聚光器和相差物鏡，既可觀察活體細(xì)胞的外形和運(yùn)動(dòng)方式，又能觀察其內(nèi)部細(xì)微結(jié)構(gòu)及這些結(jié)構(gòu)的數(shù)量。第16頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣17二、不染色檢查細(xì)菌的活體觀察，主要用于觀察動(dòng)力懸滴法——凹玻片壓滴法——平玻片第17頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣18三、染色檢查常用堿性染料（美藍(lán)、孔雀綠、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫、沙黃等）單染色法，復(fù)染色法，特殊結(jié)構(gòu)染色法（鞭毛、芽孢、莢膜等），負(fù)染色法、熒光染色法，革蘭染色法（結(jié)晶紫、碘液、95%酒精、堿性復(fù)紅），抗酸染色法（分枝桿菌、石炭酸復(fù)紅、美藍(lán)）第18頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣19大腸桿菌革蘭染色陰性

第19頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣20金黃色葡萄球菌革蘭染色陽性

第20頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣21變形桿菌周身鞭毛第21頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣22綠膿桿菌單鞭毛第22頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣23肺炎鏈球菌莢膜第23頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣24鉤端螺旋體第24頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣25霍亂弧菌第25頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣26破傷風(fēng)芽胞桿菌第26頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣27第三節(jié)細(xì)菌的分離培養(yǎng)方法所謂細(xì)菌的分離培養(yǎng)就是提供某細(xì)菌生長所需的各種條件（營養(yǎng)、溫度、濕度、酸堿度和氣體），將其從微生物混合物中培養(yǎng)出來的方法。在細(xì)菌的分離培養(yǎng)過程中，必須采用無菌技術(shù)或稱無菌操作。

第27頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣28第28頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣29一、培養(yǎng)基的制備（一）培養(yǎng)基的種類：1.按用途分類基礎(chǔ)培養(yǎng)基：僅最基本的營養(yǎng)成分。營養(yǎng)培養(yǎng)基：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上加入葡萄糖、血液、血清等。增菌培養(yǎng)基：多為液體培養(yǎng)基，一般含有抑制劑，且是具有選擇性抑制作用的抑制劑。選擇性培養(yǎng)基：多為固體培養(yǎng)基，加有抑制物質(zhì)，抑制其它非目的菌的生長或使其生長不佳。鑒別培養(yǎng)基：主要供細(xì)菌生化反應(yīng)試驗(yàn)用。專用培養(yǎng)基：適用于特定細(xì)菌的專門的培養(yǎng)基。第29頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣30一、培養(yǎng)基的制備2.按物理性狀分類液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基（瓊脂含量0.3~0.8%）固體培養(yǎng)基（瓊脂含量1.2~2.0%）3.按成分分類：合成培養(yǎng)基：由化學(xué)物質(zhì)和成分已知的各種物質(zhì)所組成，可以是無機(jī)鹽類，或無機(jī)鹽類加有機(jī)物質(zhì)。天然培養(yǎng)基：化學(xué)成分不完全清楚，各批物質(zhì)的成分很難一致，如蛋白胨、牛肉膏、血液、雞蛋。第30頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣31一、培養(yǎng)基的制備（二）培養(yǎng)基的主要成分及其作用1.

營養(yǎng)物質(zhì)：碳源、氮源及其它營養(yǎng)物質(zhì)（蛋白胨、肉浸液、牛肉浸膏、糖類、血液、雞蛋、動(dòng)物血清、酵母粉、生長因子、無機(jī)鹽類）。2.

水分：常用蒸餾水。3.

凝固物質(zhì)：瓊脂4.

抑制劑和指示劑：如膽鹽、抗生素、染料等。第31頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣32一、培養(yǎng)基的制備3、制備培養(yǎng)基的一般程序調(diào)配、矯正pH、過濾澄清、分裝、滅菌、檢定、保存七個(gè)步驟。高壓蒸汽滅菌（121℃、115℃）、流動(dòng)蒸汽滅菌（100℃）、血清凝固器滅菌（80℃）、水浴低溫滅菌（56℃）第32頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣33二、細(xì)菌接種方法（二）細(xì)菌的接種方法1.平板劃線接種法（分離、鑒別）2.斜面接種法（純培養(yǎng)、轉(zhuǎn)種）3.半固體培養(yǎng)基接種法（觀察動(dòng)力和保存菌種）4.液體培養(yǎng)基接種法（富集培養(yǎng)、生化反應(yīng)等）5.平板涂布、傾注接種法（藥敏、活菌計(jì)數(shù)等）第33頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣34三、細(xì)菌的培養(yǎng)方法1.需氧培養(yǎng)法（常規(guī)培養(yǎng)）2.CO2培養(yǎng)法CO2孵箱法（CO2鋼瓶）燭缸法（CO2含量約為5％~10％，氧氣約16%）化學(xué)法（如碳酸氫鈉-鹽酸法）第34頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣35三、細(xì)菌的培養(yǎng)方法3.厭氧培養(yǎng)法液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)（凡士林、皰肉、還原劑等）固體培養(yǎng)基的培養(yǎng)（厭氧罐培養(yǎng)法，厭氧氣袋法，厭氧培養(yǎng)箱法，氣體噴射培養(yǎng)法（或稱轉(zhuǎn)管法））第35頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣36四、細(xì)菌的生長現(xiàn)象（一）細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上的生長現(xiàn)象菌落形狀、大小、表面性狀、邊緣情況、顏色、透明度、質(zhì)地、粘度、乳化性。血平板(α溶血、β溶血、γ、雙環(huán))卵黃瓊脂(卵磷脂酶和脂酶：沉淀環(huán)和“珍珠包膜”)蛋白水解(清晰的環(huán))色素(水溶性，如綠膿色素、熒光色素等，脂溶性色素，如金黃色葡萄球菌的金黃色菌落)第36頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣37四、細(xì)菌的生長現(xiàn)象氣味（假單胞菌屬：葡萄汁氣味；變形桿菌：巧克力燒焦的臭味；鏈球菌：霉臭；梭菌：糞臭、腐敗味；產(chǎn)黑色素類桿菌屬細(xì)菌：辛辣味）（二）細(xì)菌在液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象18h～24h，包括：發(fā)育程度、渾濁度、沉淀、液體表面性狀、其它（色素、氣味、產(chǎn)酸、氣體）（三）細(xì)菌在半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象動(dòng)力觀察第37頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣38第四節(jié)細(xì)菌的生化反應(yīng)檢查法一、糖類代謝試驗(yàn)1.糖(醇)發(fā)酵試驗(yàn)糖類是作為碳源和能量來源提供細(xì)菌合成菌體成分必需的原料，由于細(xì)菌各自具有不同的酶系統(tǒng)，故對(duì)糖(醇)類的分解能力不盡相同。酚紅、溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚紫和酸性復(fù)紅等指示劑液體、半固體、固體培養(yǎng)基雙糖(或三糖)高層斜面第38頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣39一、糖類代謝試驗(yàn)2.甲基紅（MR）試驗(yàn)分解葡萄糖→丙酮酸→乳酸、乙酸、甲酸→pH4.5以下→加入甲基紅指示劑→紅色。3.伏普(Voges-Proskauer)試驗(yàn)(V-P試驗(yàn))葡萄糖代謝→中性最終產(chǎn)物乙酰甲基甲醇。葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇→堿性溶液空氣氧化→二乙酰（丁二酮）→加入胍基（如肌酸或肌酐、α-萘酚等）→紅色化合物。第39頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣40一、糖類代謝試驗(yàn)4.β-半乳糖苷酶試驗(yàn)結(jié)構(gòu)酶和適應(yīng)酶（誘導(dǎo)酶）迅速，延遲，不發(fā)酵乳糖發(fā)酵乳糖的大腸菌能產(chǎn)生乳糖滲透酶和β-半乳糖苷酶鄰-硝基苯β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)證明有無β-半乳糖苷酶活性，可預(yù)測細(xì)菌發(fā)酵乳糖的能力。菌懸液+ONPG，無色的ONPG被水解，釋放出黃色化合物鄰-硝基苯酚(ONP)第40頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣41二、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)1.靛基質(zhì)(吲哚)試驗(yàn)細(xì)菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，吲哚可與試劑中的二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚，為紅色化合物。2.硫化氫試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸生成H2S，H2S可與加入培養(yǎng)基中的鉛或鐵離子生成黑色硫化物。第41頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣42二、氨基酸和蛋白質(zhì)代謝試驗(yàn)3.尿素酶試驗(yàn)有些細(xì)菌(如某些變形桿菌)具有尿素分解酶，能分解尿素形成大量的氨，使培養(yǎng)基pH上升，而變成堿性，使含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基變成紅色。

4.明膠液化試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌產(chǎn)生明膠酶可使明膠分解，失去凝固力，使其由半固體轉(zhuǎn)化為液體狀態(tài)。第42頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣43三、有機(jī)酸鹽和銨鹽利用試驗(yàn)1.檸檬酸鹽利用試驗(yàn)有些細(xì)菌能利用檸檬酸鹽作為唯一的碳源，能在除檸檬酸鹽外不含其它碳源的培養(yǎng)基上生長，分解檸檬酸鹽，生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變成堿性。2.馬尿酸鈉水解試驗(yàn)B群鏈球菌具有馬尿酸水解酶，可使馬尿酸水解為苯甲酸和甘氨酸。苯甲酸與三氯化鐵結(jié)合而沉淀或甘氨酸與茚三酮作用生成紫色化合物。第43頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣44三、有機(jī)酸鹽和銨鹽利用試驗(yàn)3.丙二酸鹽利用試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌利用丙二酸鹽作為唯一碳源時(shí)，丙二酸鈉可被分解生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變堿性。第44頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣45四、酶類試驗(yàn)1.氧化酶試驗(yàn)（Kovacs試驗(yàn)）氧化酶（又稱細(xì)胞色素氧化酶）是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的終末呼吸酶，能使還原型的細(xì)胞色素C氧化成氧化型的細(xì)胞色素C，氧化型細(xì)胞色素C又使對(duì)苯二胺氧化，生成紅色的醌類化合物。2.過氧化氫酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)）過氧化氫酶又稱觸酶，可使細(xì)菌代謝過程中的過氧化氫分解為水和氧。第45頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣46四、酶類試驗(yàn)3.硝酸鹽還原試驗(yàn)?zāi)承└锾m氏陰性桿菌在代謝過程中，硝酸鹽→還原為亞硝酸鹽→亞硝酸鹽+醋酸→亞硝酸+對(duì)氨基苯磺酸→重氮苯磺酸+α-萘胺→紅色的N-α萘胺偶氮苯磺酸。4.過氧化物酶試驗(yàn)過氧化物酶的作用是將過氧化氫中氧轉(zhuǎn)移給可被氧化的物質(zhì)。以聯(lián)苯胺作為被氧化的物質(zhì)，如為過氧化物酶陽性細(xì)菌，加入過氧化氫可使聯(lián)苯胺氧化成為藍(lán)色。第46頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣47第五節(jié)細(xì)菌的血清學(xué)檢驗(yàn)血清學(xué)鑒定（serologicalidentity）已知診斷血清鑒定分離的細(xì)菌血清學(xué)診斷（Serologicaldiagnosis）已知標(biāo)準(zhǔn)菌株測抗體，4倍上升（一）凝集試驗(yàn)（Agglutinationtest）玻片法和試管法（二）沉淀試驗(yàn)（precipitationtest）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)，絮狀沉淀試驗(yàn)，凝膠中沉淀試驗(yàn)第47頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣48第六節(jié)細(xì)菌毒素的檢測一、外毒素主要來自G+菌，蛋白質(zhì)，不耐熱，抗原性強(qiáng)，選擇毒性抗體與濾液反應(yīng)；已知細(xì)菌外毒素與患者血清反應(yīng)；動(dòng)物試驗(yàn)(如破傷風(fēng)痙攣毒素)1.白喉外毒素(diphtheriaexotoxin)：Elek平板、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)2.肉毒毒素(botulinictoxin)：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、中和試驗(yàn)第48頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣49二、內(nèi)毒素主要來自G-菌，LPS，耐熱，抗原性弱，普遍毒性1.家兔熱原試驗(yàn)（rabbitpyrogentest，RT）2.鱟試驗(yàn)（limulustest，LT）3.其它試驗(yàn)（免疫學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)發(fā)光、流式細(xì)胞術(shù)、高效液相等）第49頁，共55頁，2022年，5月20日，19點(diǎn)24分，星期五許欣50第七節(jié)細(xì)菌數(shù)量的測定一、物理計(jì)數(shù)法1.Breed計(jì)數(shù)法：100mm2區(qū)域，0.01ml涂片，亞