生物制品無菌檢驗操作及其注意事項

生物制品（另有規(guī)定者外）都不應該有外源微生物污染。滅活疫苗不得含有活的本菌或本毒。各類微生物制品必須按規(guī)定作無菌檢驗或純粹檢驗。全部操作應在無菌條件下進行。一、準備：應隨機取樣并注意代表性。制造疫苗用的原菌液，毒液和其它配苗組織乳劑，穩(wěn)定劑及半成品的無菌或純粹檢驗，應每瓶（罐）分別抽樣進行，抽樣量為2-10ml。成品的無菌或純粹檢驗應按每批或每個亞批進行，每批按瓶數(shù)百分之一抽樣，但不應少于5瓶，最多不超過10瓶，分別進行檢驗。（所抽樣品部門必須按前、中、后的代表屬性）(1)

在檢驗前兩天，將所用的培養(yǎng)基按規(guī)程規(guī)定的種類、數(shù)量準備妥當，而且須經(jīng)48h以上的培養(yǎng)鑒定。(2)

培養(yǎng)基如發(fā)現(xiàn)混濁，污染或其它異常現(xiàn)象時均不得使用。(3)

工作服、鞋帽必須經(jīng)高壓滅菌或甲醛熏蒸滅菌。(4)

檢驗用的器具必須高壓兩次，這些工作均須在前一天準備妥當。(5)樣品瓶塞消毒，如用帶臘分裝的瓶子，必須用小刀仔細刮掉封臘，再用汽油、短毛刷刷凈殘余臘清理干凈，經(jīng)充分溶解后，再將5%碘酒棉蓋子塞上，然后罩上塑料蓋或膠塞，以防碘酒迅速揮發(fā)，消毒2h以上。(6)把所用培養(yǎng)基逐管仔細排選，以后順次置入試管架內(nèi)，并以玻璃筆或油記號筆標好瓶號，管號編號，記明接管日期，把每種培養(yǎng)基多放1-2支備用。把酒精燈、火柴等先放好備用。二．操作：

(1)

首先更衣，將樣品、試管架用具移入無菌室。

(2)

操作：在雙手不接觸針頭、注射器內(nèi)壁等處，不要引起污染的原則下取出注射器，并立即安裝好，而后去掉樣品瓶的碘酒棉。左手拿樣品瓶（若凍干苗先用注射器在酒精燈控制下吸取滅菌兩次的餾水適量注入樣品瓶內(nèi)）并稍加振蕩，右手持注射器，當瓶塞通過火焰后，立即將針頭沿膠塞孔壁刺入瓶內(nèi)，抽取適量樣品，逐管接規(guī)定量，首先接種肉湯大管，厭氣大管，而后逐次接種小管，接種完了將注射器妥善放入消毒鍋內(nèi)，如此逐瓶進行檢驗。(3)

全部接種完后，熄滅酒精燈，將肉湯，厭氣大管，用原紙帽蓋好，除霉菌培養(yǎng)置25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)外，其它所有培養(yǎng)物送入37℃溫室培養(yǎng)3-5天。

(4)

根據(jù)規(guī)程規(guī)定的天數(shù)進行移植，要領同上，并通過無菌火焰后，吸取培養(yǎng)物約1ml，而后接種逐管。三．清場處理①

將用過的注射器煮沸消毒，一般煮沸開鍋后30分鐘。②

無菌室內(nèi)所有用具整理好，放回原位，而后全面整理如初，無菌室用的工作服，鞋帽等脫掉放回原處。③

將把消毒好的注射器等用具清洗干凈包好送高壓滅菌備用。四．觀察：（1）所有培養(yǎng)物每天逐管仔細觀察一次。（2）無檢瓶管無論任何培養(yǎng)基，均不得有任何細菌生長，液體培養(yǎng)基因疫苗種類不同表現(xiàn)各異。如血清應澄清，透明如初，羊三聯(lián)聯(lián)苗，牛、馬出敗菌等因含鋁膠，所以在24h前觀察時，培養(yǎng)物一般稍量混濁，48h通常均下沉，有的已完全下沉管底，培養(yǎng)基上半部或全部，可呈現(xiàn)較透明或完全透明。如加有牛奶或明膠保護劑的，雞Ⅰ系、雞Ⅱ系，羊痘，豬瘟凍干苗等，如若不污染苗在24-48h觀察時，管底有乳白絮狀小量沉淀，上透明。如若污染上部混濁，混濁度與污染苗多少、種類而異。（3）純粹檢驗瓶管判定較難，更須仔細觀察，由于菌苗種類不同表現(xiàn)也有所不同。

A.炭疽Ⅱ苗：在普通瓊脂上生長很快，檢驗時可以從正面和背面進行觀察一般24h可全面生長，灰白色半透明的，較干燥的菌苔，表面平坦，上部邊緣較薄，3-5天在菌苔表面形成，密集的子集落，初針尖大小的隆起小包，后變成平凹團狀形態(tài)，表面不平，在肉湯中24小時能生長良好，既無菌膜亦不平均混濁，震搖時，有散在渣狀物游離其中，易被搖散，稍呈混濁。在厭氣肉肝湯中亦可生長，但較差除呈現(xiàn)混濁外，無其他任何現(xiàn)象。

B.①

布氏桿菌豬Ⅱ號凍干苗：在普通瓊脂和蛋白胨上均能生長，一般在48小時生長既得顯著，底部往往呈現(xiàn)較圓隆起的菌苔上部呈乳白色平滑，

濕潤露滴狀完全透明并呈微藍色熒光的菌苔，在肉湯中一般24小時即可生長，48小時生長顯著無菌膜亦無菌塊，均混濁，但有時表面沿管壁周圍出現(xiàn)輕微的乳白色菌環(huán)，但易搖散，震搖時，沉淀管底的菌體呈紐帶狀緩緩上升，再震時即平均散開，沒有絮狀菌絲或菌塊在厭氣肉肝湯中生長較差，但呈較輕的平均混濁，其他無任何現(xiàn)象。在馬鈴薯斜面及糖發(fā)酵管上均生長良好。五．鑒定：

發(fā)現(xiàn)可疑菌落時，可按下列原則鑒定。（1）

鏡檢：將可疑菌落或可疑管，在無菌的條件下涂片，一般用革蘭氏染色后鏡檢。（2）

移植：將可疑菌落或瓶管，移植于同種或適于生長的培養(yǎng)基內(nèi)進行觀察。（3）分離：將可疑菌落或瓶管，根據(jù)生長情況，用馬丁瓊脂平板，普通瓊脂平板，或血平板進行劃線分離培養(yǎng)。

（4）判定：各種產(chǎn)品的培養(yǎng)物，在全部