二維液相色譜的分離基理

4/4二維液相色譜的分離基理二維液相色譜(2D—LC)是將分離機理不同而又相互獨立的兩支色譜柱串聯(lián)起來構(gòu)成的分離系統(tǒng)。樣品經(jīng)過第一維的色譜柱進入接口中，通過濃縮、捕集或切割后被切換進入第二維色譜柱及檢測器中。二維液相已經(jīng)越來越多的應(yīng)用到復(fù)雜樣品的分析中，跟小編一起來看看什么是二維液相吧。

二維液相色譜通常采用兩種不同的分離機理分析樣品，即利用樣品的不同特性把復(fù)雜混合物(如肽)分成單一組分，這些特性包括分子尺寸、等電點、親水性、電荷、特殊分子間作用(親和)等，在一維分離系統(tǒng)中不能完全分離的組分，可能在二維系統(tǒng)中得到更好的分離，分離能力、分辨率得到極大的提高。完全正交的二維液相色譜，峰容量是兩種一維分離模式單獨運行時峰容量的乘積。假如兩種分離系統(tǒng)都有100的峰容量，那么良好的二維系統(tǒng)理論上可產(chǎn)生10000的峰容量。

二維液相色譜大多使用兩支或多支色譜柱，并通過柱結(jié)合技術(shù)實現(xiàn)樣品的柱間切換。柱切換通?？煞譃椴糠趾驼w切換兩種模式。按切割組分是否直接進人二維中，二維分離又可分為離線和在線兩種方式。早期的中心切割技術(shù)，大都先在容器中收集一維洗脫產(chǎn)物，再進樣到第二維中。隨著現(xiàn)代儀器的發(fā)展和適應(yīng)自動化分離的需要，目前二維色譜大多采用在線方式，使一維洗脫產(chǎn)物(部分或全部)直接進入到第二維柱系統(tǒng)中進行分離分析。

部分模式即采用中心切割技術(shù)，只使第一維分離的部分感興趣的組分進入第二維中進一步分析。為了將樣品有效地轉(zhuǎn)移到下一維柱系統(tǒng)中，必須先在第一維分離模式中用標(biāo)準(zhǔn)物進行實驗，根據(jù)得到的分離信息設(shè)計切換程序。部分模式不能得到樣品所有組分的信息，此外，還有操作繁瑣、樣品易損失與污染及可能降低分辨率等缺點。

整體模式即全多維液相色譜模式(comprehensiveHPLC)?；贕iddings的理論，一般認(rèn)為全多維分離應(yīng)滿足3個條件：(1)樣品的每一部分都受到不同模式的分離；

(2)所有樣品組分以相等的比例(100％或稍低一些，即并不要求100％分析物，只要分流的部分能代表所有樣品組分信息即可)轉(zhuǎn)移到二維及檢測器中；

(3)在一維中已得到的分辨率基本上維持不變?！盎尽敝竿ㄟ^測量全二維中第一維軸上的某個特殊峰所對應(yīng)的第一維的分辯率與一維情況相比減少不超過10％。其中，第一條和第三條說明了傳統(tǒng)的中心切割技術(shù)與全二維的區(qū)別。

Schoenmakem等認(rèn)為在二維分離之前進行分流也可稱為全二維分離，進一步拓寬了全二維分離的概念。

高效液相色譜法是一種新型物質(zhì)分離檢測技術(shù)，世界上約有80%的有機化合物可以用高效液相色譜法來分析測定。液相色譜儀是對物質(zhì)或混合物的化學(xué)成分進行先分離,而后分析鑒定的實驗室主要的分析儀器。

GI-3000XY血藥濃度檢測儀系統(tǒng)，是一個具有在線固相萃取的全智能四元低壓梯度二維液相色譜系統(tǒng)，系統(tǒng)由前處理、自動進樣系統(tǒng)、雙四元梯度高壓恒流泵系統(tǒng)、二維綜合分離分析系統(tǒng)、UV紫外檢測器六單元部分以及功能強大的色譜軟件所組成。

二維液相色譜系統(tǒng)是通過多種閥控制接口技術(shù)，在一維液相色譜基礎(chǔ)上，構(gòu)建的集成化的多維液相色譜系統(tǒng)，系統(tǒng)構(gòu)成示意圖如下：

二維液相色譜儀包括依次連接有第1固相萃取色譜柱的第1流道、第二流道、分析流道、廢液流道、中間色譜柱（一級SPE固相萃取柱）、多流道切換閥以及寄存閥等，該二維液相色譜儀通過多流道切換閥與寄存閥之間閥的切換，可以改變中間色譜柱在流道中所處的位置，實現(xiàn)中間色譜柱的寄存功能。

該二維液相色譜儀采用第1級色譜柱實現(xiàn)在線固相萃取，分離后的截留部分暫緩寄存作為第二維液相系統(tǒng)的輸入，再經(jīng)二級分析色譜柱分離后，經(jīng)過紫外檢測器檢測出物質(zhì)成分及其含量，通過計算機合理控制，可實現(xiàn)第1維液相色譜與第二維液相色譜并行運行，同時進行不同樣品的處理工作?？稍O(shè)計控制流路實現(xiàn)對各種閥門的分時控制,以實現(xiàn)不同分離方法下的系統(tǒng)運行及物質(zhì)分離.縮短檢測時間，提高檢測效率。

固相萃取是當(dāng)前常用的樣品前處理技術(shù)，分為在線和離線兩種方式，用于樣品的凈化、除雜和富集。離線固相萃取具有試劑用量少、易于SOP等優(yōu)點。其缺點為SPE固相萃取柱僅能使用一次，操作麻煩。而在線固相萃取技術(shù)（onlineSPE）能把活化、平衡、除雜和洗脫等過程在封閉系統(tǒng)內(nèi)自動化完成，減少人工操作帶來的誤差，減少處理過程污染，提高方法的準(zhǔn)確性和精密度，不僅能