生物化學(xué)實驗免疫學(xué)課件

生物化學(xué)實驗——免疫學(xué)目錄兔抗人γ-球蛋白抗血清的制備抗血清效價的檢測兔抗人γ-球蛋白抗血清的制備實驗原理：免疫球蛋白是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的，其主要作用是與抗原起免疫反應(yīng)，生成抗原-抗體復(fù)合物，從而阻斷病原體對機體的危害。本實驗以人血清γ-球蛋白為抗原免疫家兔，從而制備兔抗人γ-球蛋白抗血清。實驗器材與試劑：健康家兔3-5只完全福氏佐劑不完全福氏佐劑γ球蛋白（10-15mg/ml，按照上述方法置備的γ球蛋白），以生理鹽水配制小玻璃瓶一次性注射器兔抗人γ-球蛋白抗血清的制備實驗步驟兔抗人γ-球蛋白抗血清的制備健康家兔四足腳掌皮下多點注射（抗原2mg），完全福氏佐劑0.4ml

10天后，背部皮下多點注射（抗原2mg），不完全福氏佐劑0.4ml

10天后，背部皮下多點注射（抗原2mg），不完全福氏佐劑0.4ml

實驗步驟兔抗人γ-球蛋白抗血清的制備10天后，雙向免疫擴散法檢測抗血清效價，方法見后如果抗血清效價低于1：32繼續(xù)免疫如果抗血清效價高于1：32頸動脈取血收集抗血清冷凍保存以備用注意事項使抗原與佐劑充分乳化動物健壯兔抗人γ-球蛋白抗血清的制備返回抗原抗體反應(yīng)免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)抗原抗體反應(yīng)多價抗原：抗原可結(jié)合多個抗體分子（半抗原不能形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）抗體：必須二價以上（單克隆抗體不能用沉淀法檢測）目的要求：學(xué)習(xí)并掌握雙向免疫擴散的實驗原理掌握雙向免疫擴散的實驗方法實驗一免疫雙向擴散實驗實驗器材與試劑：生理鹽水（0.9%）瓊脂人血清兔抗人γ-球蛋白抗血清載玻片濕盒實驗一免疫雙向擴散實驗實驗步驟用生理鹽水配制1.5%瓊脂糖，微波爐將其加熱、融化實驗一免疫雙向擴散實驗冷卻至30℃左右，將瓊脂糖平鋪在載玻片上，厚2-3mm實驗步驟實驗一免疫雙向擴散實驗俯視圖側(cè)面圖打孔

5μl人血清加入中央孔不同稀釋倍數(shù)的兔抗人血清5μl加入周圍孔實驗步驟實驗一免疫雙向擴散實驗效價：抗血清效價為64實驗結(jié)果實驗一免疫雙向擴散實驗注意事項鋪板后，瓊脂凝膠均勻，切忌凸凹不平；實驗一免疫雙向擴散實驗瓊脂凝膠溫度30℃左右時，鋪板。溫度過高或過低均不能得到理想凝膠板。實驗原理（間接法檢測抗體）：實驗二酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗A抗原吸附在固相載體表面（酶標(biāo)板凹孔）B加抗體，形成抗原抗體復(fù)合物C加酶標(biāo)抗抗體D加底物，底物降解量=抗體量ABCD目的要求：掌握ELISA的實驗原理和方法實驗二酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗掌握酶標(biāo)儀的使用方法實驗步驟：實驗二酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗顯色封閉包被洗滌加抗血清洗滌加酶標(biāo)抗抗體洗滌終止酶標(biāo)儀測OD值(在450nm/630nm雙波長下)實驗二酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實驗酶標(biāo)儀