臨床免疫學(xué)檢驗知識點

(完整word版)臨床免疫學(xué)檢驗知識點(完整word版)臨床免疫學(xué)檢驗知識點臨床免疫學(xué)檢驗1、免疫：是機體識別和排斥抗原性異物的一種生理功能2、免疫防御（對外）；免疫自穩(wěn)（防自身免疫病)；免疫監(jiān)視(防腫瘤）。3、中樞免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官:淋巴結(jié)、脾臟（最大）、黏膜相關(guān)淋巴組織4、B細胞：通過識別膜免疫球蛋白來結(jié)合抗原,介導(dǎo)體液免疫；B細胞受體=BCR=mIg表面標(biāo)志：膜免疫球蛋白（SmIg)、Fc受體、補體受體、EB病毒受體和小鼠紅細胞受體。B：CD19CD20、CD21、CD22(成熟BmIgmIgMmIgD）CD5B1B2B細胞功能檢測方法：溶血空斑形成試驗（體液免疫功能）。5TTCD4;殺傷TCD8；T=TCR.T細胞和NK細胞的共同表面標(biāo)志是CD2（綿羊紅細胞受體）;CD3＋CD4＋CD8－=輔助性T細胞（Th）CD3＋CD4－CD8＋=細胞毒性T（TcCTL）（TCD4＋CD25＋=調(diào)節(jié)性T（TrTreg)T（PHA）刀豆素（CONA）TT*E花環(huán)試驗是通過檢測SRBC受體而對T細胞進行計數(shù)的一種試驗；6、NK細胞：具有細胞介導(dǎo)的細胞毒作用.直接殺傷靶細胞（腫瘤細胞和病毒感染的細胞）表面標(biāo)志:CD16(ADCC）、CD56。測定人NK細胞活性的靶細胞多用K562細胞株,而測定小鼠NK細胞活性則常采用YAC-1細胞株。7、吞噬細胞包括:單核-吞噬細胞系統(tǒng)(MPS，表面標(biāo)志CD14，包括骨髓內(nèi)的前單核細胞、外周血中的單核細胞和組織內(nèi)的巨噬細胞)和中性粒細胞。(表達MHCⅡ類分子）8、人成熟樹突狀細胞（DC）（專職抗原呈遞功能CD1a、CD11cCD83.9、免疫球蛋白可分為分泌型(sIg，主要存在于體液中,具有抗體功能）及膜型（mIg,作為抗原受體表達于B細胞表面,稱為膜表面免疫球蛋白）10:IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五類（按重鏈恒定區(qū)抗原性排序免疫球蛋白含量測定：單向環(huán)狀免疫擴散法、免疫比濁法。11、免疫球蛋白的同種型抗原決定簇位于恒定區(qū)、CL）12、抗體由漿細胞產(chǎn)生?？贵w分子上VH高變區(qū)）13、IgG：血清中含量最高的免疫球蛋白（IgG1最高），血液和細胞外液中的主要抗體。也是再次免疫應(yīng)答IgG，免疫學(xué)檢測中第二抗體也以IgG14、IgA：分血清型（單體存在）及分泌型；分泌型IgA（sIgA)為二聚體,性能穩(wěn)定,主要存在于胃腸道、支氣管分泌液、初乳、唾液、淚液中，局部濃度高,是參與黏膜局部免疫的主要抗體。15、IgM：為五聚體，主要存在于血液中，是Ig中分子量最大的(又稱巨球蛋白)。個體發(fā)育最早合成和分泌的抗體.抗原刺激后體液免疫應(yīng)答中最先產(chǎn)生的抗體,感染過程中血清IgM水平升高,說明近期感染。新生兒臍血中若IgM增高,提示有宮內(nèi)感染。16、IgE：為單體結(jié)構(gòu)，正常人血清中含量最低。IgE為親細胞抗體，介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng).特異性過敏反應(yīng)和寄生蟲早期感染患者血清中可升高。17（IgGIgM（雙鏈DNA），C1~C9）、替代途徑（病原微生物細胞壁成分（脂多糖）直接激活補體C3，然后完成C5～C9的激活過程）、MBL途徑（由急性炎癥期產(chǎn)生的甘露糖結(jié)合凝集素(MBL）與病原體結(jié)合后啟動激活）。18、補體系統(tǒng)中C3含量最多，C2含量最少。19、滅活：加熱56℃30分鐘，補體喪失活性20、補體清除免疫復(fù)合物的方式：吞噬調(diào)理;免疫粘附；免疫復(fù)合物抑制。21、完全抗原=反應(yīng)原性+免疫原性。半抗原=反應(yīng)原性（無免疫原性）22、抗原抗體結(jié)合力（分子間引力)：靜電吸引、范德華力、氫鍵、疏水作用力（最強)23、抗原抗體反應(yīng)的四大特點：特異性、可逆性、比例性、階段性；受反應(yīng)條件（如溫度、pH、電解質(zhì)、抗原抗體比例等）的影響。24、抗體過量-—前帶；抗原過量——后帶（鉤狀效應(yīng)）25秒至幾分鐘，但不出現(xiàn)可見反應(yīng)；第二階段為可見反應(yīng)階段，此階段反應(yīng)慢，往往需要數(shù)分鐘至數(shù)小時。26、顆粒性抗原出現(xiàn)凝集反應(yīng)?？扇苄钥乖霈F(xiàn)沉淀反應(yīng).單價抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合不出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象。27IgG2Fab+Fc;胃蛋白酶水解IgGF（ab）2+nFc。28、最常用于免疫動物的佐劑是弗氏佐劑，弗氏佐劑分為弗氏完全佐劑（弗氏不完全佐劑加卡介苗）和弗氏不完全佐劑兩種.29R(兔子）劑。H(馬）型抗血清是用馬等大動物免疫獲得的抗體，抗原抗體反應(yīng)比例合適范圍較窄，一般用作免疫治療.30、抗血清常見保存條件：2-8℃保存;冷凍保存（最常用);真空干燥保存（5-10年)。31水浴.32、凝集反應(yīng)分為兩個階段：①抗原抗體的特異性結(jié)合；②出現(xiàn)可見的顆粒凝聚。33、直接凝集反應(yīng)：細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原，在適當(dāng)?shù)碾娊赓|(zhì)（0.85%氯化鈉）參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)凝集。抗原=凝集原，抗體=凝集素。34、玻片凝集試驗:主要用于抗原的定性分析,AB0血型的測定。試管凝集試驗：肥達氏試驗、外斐試驗、輸血交叉配血試驗;35、正向間接血凝反應(yīng)（PHA）：紅細胞包被抗原，用以檢測抗體。（凝集）反向間接血凝反應(yīng)（RPHA）：紅細胞包被抗體，用以檢測抗原。（凝集36、間接血凝抑制試驗：可用于檢測抗體、自身抗體、變態(tài)反應(yīng)性抗體，也可測定抗原。(不凝集)37、金黃色葡萄球菌A蛋白（SPA)-—協(xié)同凝集反應(yīng)(反向間接凝集)38、血凝試驗(載體為綿羊、家兔、雞的紅細胞及O型人紅細胞）可在微量滴定板或試管中進行，將標(biāo)本倍比稀釋，一般為如紅細胞凝集，則分布于孔底周圍。39、膠乳凝集試驗（間接凝集)，所用載體為聚苯乙烯膠乳；明膠凝集試驗（間接）將病毒抗原或重組抗原吸附于粉紅色明膠顆粒：HIV-1抗體和抗精子抗體檢測40、抗球蛋白試驗,又稱Coombs試驗，是檢測抗紅細胞不完全抗體的一種很有用的方法。包括直接Coombs試驗（檢測紅細胞上的不完全抗體）和間接Coombs試驗（游離在血清中的不完全抗體)41絮狀沉淀試驗：抗原抗體溶液在電解質(zhì)的存在下結(jié)合,形成絮狀沉淀物，這種絮狀沉淀受抗原和抗體比例的直接影響，因此常用來作為測定抗原抗體反應(yīng)最適比例的方法。42、免疫比濁：最適pH6.5～8.5，（R型抗體，增濁劑如聚乙二醇適合于大批量標(biāo)本的檢測。當(dāng)反應(yīng)液中抗體過量時，IC的形成隨著抗原遞增而增加,至抗原、抗體最適比例處達最高峰，這就是經(jīng)典的海德堡曲線理論。當(dāng)抗原過量時，形成的免疫復(fù)合物）是高劑量鉤狀效應(yīng)。43、單向擴散試驗是在瓊脂內(nèi)混入抗體，測抗原。Mancini曲線適用大分子抗原和長時間擴散(＞48Fahey雙向擴散試驗是對抗原或抗體進行定性分析.沉淀線如果靠近抗原孔，則表示抗體含量較大沉淀線如果靠近抗體孔,則表示抗原含量較大.不出現(xiàn)沉淀線則表明無對應(yīng)的抗體或抗原或者抗原過量。*分子量小者擴散快，反之則較慢.由于慢者擴散圈小，局部濃度則較大,形成的沉淀線彎向分子量大的一方。如果兩者分子量大致相等,則形成直線。＊兩條沉淀線互相吻合相連,表明抗體與兩個抗原中的相同表位結(jié)合而沉淀,兩個抗原相同沉淀線呈部分相切，說明兩個抗原之間有部分相同。兩條沉淀線交叉而過，說明兩個抗原完全不同。*出現(xiàn)沉淀線最高的抗體稀釋度為該抗體的效價。*出現(xiàn)一條沉淀線說明待測抗原或抗體純.出現(xiàn)多條沉淀線說明不純。44最適比例出現(xiàn)沉淀線?；鸺庖唠娪臼菍蜗蛎庖邤U散與電泳相結(jié)合的一項定量檢測技術(shù)，實質(zhì)上是加速的單向擴散試驗。（抗體抗原泳動的基底區(qū)越來越窄，抗原抗體分子復(fù)合物形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個形狀如火箭的不溶性復(fù)合物沉淀峰。)頂部呈不清晰的云霧狀或圓形，則表示未達終點。免疫電泳技術(shù)：區(qū)帶電泳+免疫雙向擴散。用于純化抗原和抗體成分的分析免疫固定電泳：電泳+沉淀反應(yīng)技術(shù)，可用于各種蛋白質(zhì)的鑒定(M蛋白的鑒定與分型，也用予尿液中本—周蛋白的檢測及κ、λ分型，腦脊液中寡克隆蛋白的檢測及分型。）.45放免（標(biāo)記抗原和非標(biāo)記抗原競爭限量抗體;IRMA(免疫放射（RIA*RIA可以測定大分子和小分子抗原，但IRMA則只能測定至少有兩個抗原決定簇的抗原。46、常用的熒光素有:異硫氰酸(FITC,最大吸收光波長490～495nm）黃綠色，最常用;四乙基羅丹明（RB200，最大吸收光波長為570nm)橘紅色；四甲基異硫氰酸羅丹明（TRITC，最大吸引光波長為550nm）橙紅色；藻紅蛋白（R—RE）橙色。其他:銪（Eu3＋）47、熒光標(biāo)記蛋白的常用方法：攪拌法和透析法。熒光抗體效價鑒定：抗原含量為1g／L時，抗體效價＞1：1648、時間分辨熒光免疫測定（TRFIA）以鑭系元素（如：銪）化合物為熒光標(biāo)記物。49、偏振免疫測定的偏振波長是485nm（藍光)。不適宜測定大分子物質(zhì)。50、熒光酶免疫：由于使用酶和熒光底物的化學(xué)反應(yīng)作為放大系統(tǒng)，故靈敏度大大提高。51、均相法：不分離,直接測（用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測定）;酶放大免疫測定技術(shù)（EMIT）最早用于臨床.酶標(biāo)半抗原。EIA：異相法：先分離，后測定。固相酶免疫測定（如52、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）：辣根過氧化物酶(HRP）：底物（1)(OPD）,（2）(TMB)ELISA（HRP標(biāo)記抗體或抗原的最常用方法——改良過碘酸鈉法）堿性磷酸酶（ALP）：底物：對-硝基苯磷酸脂（p-NPP）β-半乳糖苷酶（β—Gal)：底物:4-甲基傘酮基—R—D半乳糖苷（4—MUU)必要的試劑：①固相的抗原或抗體；②酶標(biāo)記的抗原或抗體；③酶反應(yīng)的底物.抗原測定:蛋白大分子抗原用得最多的是雙抗體夾心法(HBsAg）。只有單個抗原決定簇的小分子，則使用競爭抑制法?？贵w測定：通常使用間接法(HCV、HIV)、雙抗原夾心法（HBsAb）、競爭法（HBcAb、HBeAb）和捕獲法（IgM)等*待測孔最后顯示的顏色深淺與標(biāo)本中的待測抗原或抗體呈正相關(guān)的是：雙抗體夾心法、雙位點一步法、間接法測抗體；＊封閉:1％～5％的牛血清白蛋白或5％～20％小牛血清.53、化學(xué)發(fā)光底物有：直接化學(xué)發(fā)光劑:吖啶酯和三聯(lián)吡啶釕；酶促反應(yīng)發(fā)光劑：(標(biāo)記酶HRP)魯米諾及其衍生物、(標(biāo)記酶為堿性磷酸酶)AMPPD;54、免疫印跡實驗中常選用多克隆抗體.55:Ficoll（由上到下為血漿，單個核細胞，粒，紅）和Percoll（由上至下：死細胞,單個核細胞,淋，紅,粒）。56、純淋巴細胞群的采集有：黏附貼壁法，吸附柱過濾法，磁鐵吸引法，Percoll分離液法。57、T細胞和B細胞的分離:E花環(huán)沉降法，尼龍毛柱分離法58、淋巴細胞活力測定:臺盼藍染色法，死細胞為藍色。59、CD4HIVHIVCD4／CD860、CD4／CD8升高常見于自身免疫性疾??；而CD4／CD8降低常見于病毒感染、惡性腫瘤和再生障礙性貧血等。61、(ELISA）雙抗體夾心法是用于細胞因子測定的最常用方法.62、流式細胞儀:前向散射光（FS)反映顆粒的大小。側(cè)向散射光（SS)反映顆粒內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度、表面的光滑程度。熒光（FL）反映顆粒被染上熒光部分數(shù)量的多少.63、免疫熒光標(biāo)記最常用的熒光染料：異硫氰酸熒光素（FITC）亮綠色熒光。德州紅紅色熒光。藻膽蛋白類橙色至紅色熒光。64、臨床上常用三色熒光抗體標(biāo)記將CD3—CD16+CD56+淋巴細胞確定為NK細胞。65AIDS患者的一個特征性免疫診斷指標(biāo)表現(xiàn)為TT細胞亞群CD4Th／CD8Tc比例倒置,ThTc,NK65、強直性脊柱炎-—HLA-B2766、SLE患者以IgG、IgA升高較多見。類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者以IgM增高為主。67、M（MPB(＞30g／L）68、M蛋白-最基本方法：血清蛋白區(qū)帶電泳技術(shù)M蛋白-粗篩試驗：血清免疫球蛋白定量(單向瓊脂免疫擴散法和免疫比濁法）M蛋白-鑒定,首選方法：免疫固定電泳(IFE）技術(shù)（區(qū)帶電泳技術(shù)與特異性抗血清的免疫沉淀反應(yīng)相結(jié)合）是臨床最常用的方法。69、IgD降低見于原發(fā)性無丙種球蛋白血癥、矽肺70、CSF:IgG＞IgA＞IgM。神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤時，以IgAIgM（感染、血管病變、系統(tǒng)性疾病=IgG升高）7172、冷球蛋白又稱冷免疫球蛋白，在—4℃時發(fā)生沉淀，于37℃時又復(fù)溶解.采血是冷球蛋白檢測的關(guān)鍵,宜在體溫條件下采集和保存靜脈血.73、補體結(jié)合試驗（CFT）,梅毒的診斷，華氏反應(yīng)。74、非均相熒光免疫測定：時間分辨熒光免疫測定法。均相熒光免疫測定：熒光偏振免疫測定法。75、鏈球菌感染：ASO（膠乳凝集試驗、免疫散射比濁法）76、傷寒沙門菌有菌體（O)抗原、鞭毛（H）抗原和表面（Vi)抗原。肥達反應(yīng)，效價≥1:80為陽性77、卡氏肺孢菌，又稱卡氏肺孢子蟲，為類真菌。78、Ⅰ型超敏反應(yīng)：由特異性IgE抗體介導(dǎo)產(chǎn)生，其發(fā)生速度最快。（青霉素、支氣管哮喘）提高Th1細胞活性,減少IL-4的分泌,可降低IgE的產(chǎn)生，阻斷IgE介導(dǎo)的Ⅰ型超敏反應(yīng).參與Ⅰ型超敏反應(yīng)：肥大細胞、嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞。79、Ⅱ型超敏反應(yīng)：又稱細胞毒型或細胞溶解型超敏反應(yīng),它是由靶細胞表面的抗原與相應(yīng)IgGIgMNK細胞(ADCC作用）80、Ⅲ型超敏反應(yīng)：由可溶性免疫復(fù)合物沉積于局部或全身多處毛細血管基底膜，通過激活補體，并在血小板、嗜堿性粒細胞、中性粒細胞等的參與下，引起的以充血水腫、局部壞死和中性粒細胞浸潤為主要特征的（Arthus反應(yīng)、類ArthusSLE）/81、Ⅳ型超敏反應(yīng)：又稱遲發(fā)型超敏反應(yīng)是效應(yīng)T細胞與特異性抗原結(jié)合后，引起的以單個核細胞浸潤和組織損傷為主要特征的炎癥反應(yīng)。（細胞免疫）效應(yīng)性CD4+Th1細胞識別抗原后活化,可釋放IFN-γ、TNF、淋巴毒素（LT)、IL—3GM—CSF、單核細胞趨化蛋白—1（MCP-1）等多種細胞因子。常見Ⅳ型超敏反應(yīng)性疾病:感染性遲發(fā)型超敏反應(yīng)（結(jié)核分枝桿菌、病毒、原蟲）、接觸性皮炎、移植排斥反應(yīng).（結(jié)核菌素皮試、斑貼試驗）82、變性的IgG可刺激機體產(chǎn)生抗變性IgG抗體（類風(fēng)濕因子）83、ITP患者血清中存在有抗血小板抗體，該抗體可以縮短血小板的壽命。84、抗乙酰膽堿受體抗體：對重癥肌無力（MG）具有診斷意義。85、毒性彌漫性甲狀腺腫患者血清中有抗促甲狀腺激素受體（TSHR）的IgG型自身抗體。（甲狀腺功能的亢進)86、多發(fā)性肌炎是以損害肌肉為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，如果同時有皮膚損害，則稱為皮肌炎.8775％PSSScl—70PSS抗著絲點抗體陽性。88、自身免疫?。ˋID)的特征：高滴度自身抗體，病理特點為免疫炎癥損傷與抗原分布一致，能建動物模型。89、抗DNP抗體（抗核蛋白抗體）通常完全被DNA和組蛋白吸收，是形成狼瘡細胞的因子。90、ANA陽性的熒光現(xiàn)象分:核膜型、均質(zhì)型、斑點型、核仁型。ANA常為自身免疫病的初篩試驗。91、ENA是可提取核抗原的總稱，分子中不含DNA.92dsDNASLESmSLESLE（SLE的患者，應(yīng)先進行ANAdsDNA抗體的檢測，當(dāng)ANA（或）抗dsDNAENASm（或）抗RNPSLE）93、抗核RNP抗體：為MCTD（混合性結(jié)締組織?。┑脑\斷指標(biāo).94SSA/SSB(SS）的診斷指標(biāo)。（當(dāng)ANA陽性而抗dsDNA抗體陰性，抗ENASsA（或）抗ssB95、抗Jo-1抗體：多發(fā)性肌炎（PM）患者常為陽性。96、抗Scl—70抗體：進行性系統(tǒng)性硬皮癥(PSS）的診斷指標(biāo)。97、NCA：原發(fā)性小血管炎的特異性血清標(biāo)志物98、內(nèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）：自身抗體有RF、抗角蛋白抗體（AKA）、抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（anti—CCP）.99、Farr法測定dsDNA抗體的特異性高，為公認標(biāo)準法，當(dāng)抗dsDNA抗體結(jié)合率大于20%時對SLE有意義。100、抗