生化實(shí)驗(yàn)-蛋白定量分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告

蛋白定量分析實(shí)驗(yàn)l=JI三三實(shí)驗(yàn)一雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆针p縮脲法定量測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。實(shí)驗(yàn)原理在堿性溶液中，具有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵的化合物(如蛋白質(zhì))可與Cu2+結(jié)合生成紫色化合物(雙縮脲反應(yīng))，顏色深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比，故可用比色法測(cè)定蛋白質(zhì)的濃度。在一定條件下，未知樣品的溶液與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液同時(shí)反應(yīng)，并于520nm下比色，可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線求出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度。實(shí)驗(yàn)儀器及試劑容量瓶、試管、試管架、恒溫水浴槽、吸量管、分光光度計(jì)、比色皿試劑：①標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白溶液10mg/ml雙縮脲試劑：溶解2.5gCuSO4-5H2O于100ml水中，加熱溶解，取酒石酸鈉10g、碘化鉀5g，溶于500ml水中，再加5mol/LNaOH溶液300ml混合，倒入硫酸銅溶液，加水至1000ml小鼠肝臟蛋白原漿實(shí)驗(yàn)內(nèi)容取小試管7支，編號(hào)，按下表注入溶液試劑(ml)管號(hào)1234567標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液0.10.30.50.70.9—原漿0.1生理鹽水0.90.70.50.30.11.00.9雙縮脲試劑4.04.04.04.04.04.04.0混勻后，于37°C水浴中保溫15min，在520nm波長(zhǎng)下比色，以第6管調(diào)零點(diǎn)，測(cè)得各管的吸光度值為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)的克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪成曲線。按表中第七管的數(shù)據(jù)加入溶液，在37C水浴中放置15min，測(cè)其吸光度，根據(jù)吸光度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線即得出每100ml小鼠肝臟蛋白原漿溶液中蛋白質(zhì)的克數(shù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果分析管號(hào)123457吸光度0.0690.2380.3900.5280.6590.107繪制曲線如下:

實(shí)驗(yàn)二考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆湛捡R斯亮藍(lán)法定量測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和方法；熟悉紫外分光光度計(jì)的使用。實(shí)驗(yàn)原理考馬斯亮藍(lán)在游離狀態(tài)下呈紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，在一定蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，結(jié)合物在595nm波長(zhǎng)下有最大吸收峰，測(cè)其光的吸收量即可得結(jié)合蛋白質(zhì)的量。實(shí)驗(yàn)儀器及試劑儀器：分光光度計(jì)，試管，吸量管，比色皿試劑：①考馬斯亮藍(lán)試劑：考馬斯亮藍(lán)G-250100mg溶于50ml95%乙醇中，加入100ml85%磷酸，用蒸餾水稀釋至1000ml。標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液500四g/ml50倍稀釋后的小鼠肝臟蛋白原漿實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)取試管三支，按下表操作：試劑(ml)空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣品管生理鹽水0.1--標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液-0.1-樣品--0.1考馬斯亮藍(lán)試劑5.05.05.0(2)混勻，室溫放置5min，在波長(zhǎng)595nm處調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。五.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果分析測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管的吸光度分別為0.418,0.222則樣品中蛋白質(zhì)的含量四g/ml=(0.222/0.418)X500=265.6四g/ml則稀釋前小鼠肝臟蛋白原漿中蛋白質(zhì)的含量為13.3mg/ml。實(shí)驗(yàn)三紫外分光光度法測(cè)定蛋白質(zhì)含量實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆兆贤馕辗ǘ繙y(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理和方法；熟悉紫外分光光度計(jì)的使用。實(shí)驗(yàn)原理蛋白質(zhì)分子中含有酪氨酸、色氨酸，使蛋白質(zhì)具有吸收紫外線的性質(zhì)，吸收高峰在280nm波長(zhǎng)處。在此波長(zhǎng)范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值與其含量呈正比關(guān)系，可用作定量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)儀器與試劑試劑：①標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液1mg/ml②30倍稀釋后的小鼠肝臟蛋白原漿儀器：紫外分光光度計(jì)，吸量管，試管，比色皿實(shí)驗(yàn)內(nèi)容280nm的光吸收法（1）取試管7支，按下表操作：試劑（ml）管號(hào)1234567標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液0.51.01.52.02.5-原漿1.0生理鹽水3.53.02.52.01.54.03.0（2）混勻后，在石英比色皿中，用紫外分光光度計(jì)，以第6管調(diào)零，在280nm下測(cè)定各管吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線五.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及結(jié)果分析管號(hào)123457吸光度0.1490.2670.3230.4760