齊魯醫(yī)學(xué)交叉配血-酶法和聚凝胺法

交叉配血——酶法與聚凝胺法

byCherishKim交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!酶介質(zhì)交叉配血法原理RBC表面具豐富唾液酸，造成紅細(xì)胞表面帶有大量負(fù)電荷，在電場(chǎng)力的作用下，紅細(xì)胞在液體中相互排斥，導(dǎo)致紅細(xì)胞不能凝集。蛋白水解酶能消化和破壞這種唾液酸減少紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，導(dǎo)致紅細(xì)胞表面的Zeta電勢(shì)減小，紅細(xì)胞間的排斥力減弱，細(xì)胞間的距離縮短，IgG類紅細(xì)胞血型抗體分子的兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)可以分別結(jié)合具有相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，導(dǎo)致紅細(xì)胞發(fā)生凝集反應(yīng)。酶介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)可以檢測(cè)出獻(xiàn)血者或受血者血清中是否存在IgG類紅細(xì)胞血型抗體，確保受血者和獻(xiàn)血者血液相容，防止發(fā)生溶血性輸血不良反應(yīng)。交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!實(shí)驗(yàn)儀器與試劑儀器：臺(tái)式離心機(jī)37℃恒溫水浴箱顯微鏡試劑：1%菠蘿酶溶液、生理鹽水標(biāo)本：3mlABO同型全血標(biāo)本2人份木瓜蛋白酶菠蘿蛋白酶交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!實(shí)驗(yàn)步驟1.抽取受血者靜脈血3~4ml，待凝固后分離血清；以生理鹽水洗滌受血者紅細(xì)胞3次配成3%紅細(xì)胞懸液2.將獻(xiàn)血者血標(biāo)本以同樣方法分離血清；生理鹽水洗滌獻(xiàn)血者紅細(xì)胞3次，配成3%紅細(xì)胞懸液3.取潔凈試管2支，分別標(biāo)記主側(cè)管和次側(cè)管。主側(cè)管：受血者血清2滴和獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液1滴次側(cè)管：獻(xiàn)血者血清2滴和受血者紅細(xì)胞1滴兩管分別加入1%菠蘿酶溶液各1滴交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!試驗(yàn)結(jié)果1.受血者自身對(duì)照管內(nèi)紅細(xì)胞不凝集，陽(yáng)性對(duì)照管紅細(xì)胞凝集，陰性對(duì)照管紅細(xì)胞不凝集，主、次側(cè)配血管內(nèi)紅細(xì)胞均不凝集，表示受血者和獻(xiàn)血者兩血酶介質(zhì)交叉配血相容，獻(xiàn)血者血液可輸注2.如果受血者自身對(duì)照管內(nèi)紅細(xì)胞不凝集，陽(yáng)性對(duì)照管紅細(xì)胞凝集，陰性對(duì)照管紅細(xì)胞不凝集，主側(cè)或（和）次側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集，則表明兩血不相容，獻(xiàn)血者血液不可輸注。交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、快捷，曾廣泛使用，適用于急診搶救患者的交叉配血缺點(diǎn)：可能使M、N、Fya、Fyb等抗原的抗體漏檢，存在輸血安全隱患因此目前臨床基本已經(jīng)不再使用酶介質(zhì)進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!將紅細(xì)胞和血清放置在低離子介質(zhì)中孵育，如果血清中存在不完全性紅細(xì)胞血型抗體（IgG類），可以促進(jìn)抗體和紅細(xì)胞膜血型抗原結(jié)合，加入聚凝胺促進(jìn)紅細(xì)胞凝集。離心后，加入重懸浮液，中和聚凝胺的凝集作用，使正常紅細(xì)胞的凝集解散，而抗原抗體結(jié)合引起的紅細(xì)胞凝集不會(huì)散開(kāi)。交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!實(shí)驗(yàn)儀器與試劑儀器：臺(tái)式離心機(jī)、顯微鏡試劑：生理鹽水

低離子介質(zhì)（LIM）

聚凝胺試劑

重懸浮液標(biāo)本

：3mlABO同型全血標(biāo)本2人份交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.將如果主側(cè)管和次側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集散開(kāi)，則為聚凝胺引起的非特異性凝集，表示受血者和獻(xiàn)血者兩血聚凝胺介質(zhì)配血相容，獻(xiàn)血者血液可以輸注2.如果主側(cè)管或（和）次側(cè)管內(nèi)紅細(xì)胞凝集不散開(kāi)，則表明抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，兩血不相容，獻(xiàn)血者血液不可輸注（用戶可使用IgG抗D抗體（效價(jià)≥64）與RhD陽(yáng)性紅細(xì)胞反應(yīng)做陽(yáng)性對(duì)照實(shí)驗(yàn)，測(cè)試本試劑的有效性。）交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!方法學(xué)評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：安全、敏感、快速、操作簡(jiǎn)單，結(jié)果易判定，能為臨床安全快速的輸血提供有力保證。聚凝胺介質(zhì)配血法反應(yīng)較鹽水法靈敏度高，能檢出幾乎所有規(guī)則抗體及不規(guī)則血型抗體，適用于各類輸血患者的配血缺點(diǎn)：漏檢Kell系統(tǒng)（見(jiàn)注意事項(xiàng)）交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!實(shí)驗(yàn)步驟

4.陽(yáng)性對(duì)照管：3%RhD陽(yáng)性O(shè)型紅細(xì)胞懸液和人源性IgG類抗D血清各1滴，1%菠蘿酶溶液1滴5.

陰性對(duì)照管：3%RhD陽(yáng)性O(shè)型紅細(xì)胞懸液和正常人AB型血清各1滴，1%菠蘿酶溶液1滴6.

自身對(duì)照管：受血者自身血清和3%紅細(xì)胞懸液各1滴7.各試管經(jīng)輕輕搖動(dòng)后，置37℃水浴30min8.取出試管，輕輕搖動(dòng)

或經(jīng)120×g離心1min（或1300×g離心30s），取出試管輕輕搖動(dòng)9.觀察試驗(yàn)結(jié)果并記錄交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!注意事項(xiàng)1.酶處理可增強(qiáng)一些抗原抗體系統(tǒng)的反應(yīng)活性，例如Rh和Kidd系統(tǒng)。酶處理后也會(huì)破壞一些抗原的結(jié)構(gòu)，例如M、N、Fya、Fyb抗原，導(dǎo)致這些抗原抗體的反應(yīng)性減弱。（可用抗球蛋白試驗(yàn)）2.應(yīng)平行進(jìn)行鹽水介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)3.紅細(xì)胞經(jīng)蛋白酶修飾后可以改變紅細(xì)胞懸液的物理性質(zhì)，在交叉配血試驗(yàn)中可以出現(xiàn)非特異性自身凝聚，因此必須使用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照試驗(yàn)，才能得出正確的試驗(yàn)結(jié)果

交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!低離子聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)原理：聚凝胺（polybrene）是一種高價(jià)陽(yáng)性季胺鹽多聚物，溶解后可以產(chǎn)生較多的正電荷，可以大量中和紅細(xì)胞膜表面的負(fù)電荷，減弱紅細(xì)胞之間的排斥力，使紅細(xì)胞彼此間的距離縮短，在離心力的作用下，可以引起正常紅細(xì)胞可逆性的非特異性凝集。由于降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，可以增加抗原抗體間的引力（或降低紅細(xì)胞膜的Zeta點(diǎn)位），可以增強(qiáng)血型抗體凝集紅細(xì)胞的能力。交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!實(shí)驗(yàn)步驟1.抽取受血者靜脈血3~4ml，待凝固后分離血清；以生理鹽水洗滌受血者紅細(xì)胞3次，配成3%紅細(xì)胞懸液2.將獻(xiàn)血者血標(biāo)本以同樣方法分離血清；以生理鹽水洗滌獻(xiàn)血者紅細(xì)胞3次，配成3%紅細(xì)胞懸液3.主側(cè)管：加受血者血清2滴，獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液1滴；

次側(cè)管：加獻(xiàn)血者血清2滴，受血者紅細(xì)胞懸液1滴4.每管各加LIM溶液0.6ml，混勻，室溫孵育1min5.每管各加2滴聚凝胺溶液，混合后靜置15s6.1300×g離心15s，棄上清7.輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)細(xì)胞有無(wú)凝集，如無(wú)凝集，必須重做8.加入2滴重懸浮液，并輕輕混合，肉眼觀察結(jié)果9.取載破片一張，用滴管分別從主側(cè)管和次側(cè)管內(nèi)吸取紅細(xì)胞懸液各1滴，均勻滴放在載玻片上，用顯微鏡觀察結(jié)果并記錄交叉配血-酶法和聚凝胺法共17頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!注意事項(xiàng)1.聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)對(duì)Kell血型系統(tǒng)的抗體不能有效檢出（陰性結(jié)果加做抗球蛋白試驗(yàn)），但漢族kk型幾乎100%。2.臨床輸血進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)當(dāng)首先進(jìn)行鹽水介質(zhì)的交叉配血試驗(yàn)，排除完全性（IgM類）紅細(xì)胞抗體的存在后，再進(jìn)行聚凝胺介質(zhì)交叉配血試驗(yàn)3.溶血標(biāo)本不得用于交叉配血試驗(yàn)4.當(dāng)重懸浮液加入后，應(yīng)盡快觀察結(jié)果（不可