基因工程試題

基因工程試題基因工程試題基因工程試題資料僅供參考文件編號：2022年4月基因工程試題版本號：A修改號：1頁次：1.0審核：批準:發(fā)布日期：基因工程試題A一、名詞解釋（每題2分，共20分）1、轉(zhuǎn)染:2、質(zhì)粒不親和性:3、cDNA文庫:4、RACE:5、基因工程:6、RT-PCR7、插入失活:8、S-D序列:9、穿梭質(zhì)粒載體:10、多克隆位點:二、選擇題（每題1分，共15分）1（）基因工程操作的三大基本元件是:(I供體II受體III載體IV抗體V配體)ＡI+II+IIIＢI+III+IVＣII+III+IVＤII+IV+VＥIII+IV+V2（）基因工程的單元操作順序是Ａ增，轉(zhuǎn)，檢，切，接Ｂ切，接，轉(zhuǎn)，增，檢Ｃ接，轉(zhuǎn)，增，檢，切Ｄ檢，切，接，增，轉(zhuǎn)Ｅ切，接，增，轉(zhuǎn)，檢3()生物工程的上游技術(shù)是Ａ基因工程及分離工程Ｂ基因工程及發(fā)酵工程Ｃ基因工程及酶工程Ｄ基因工程及細胞工程Ｅ基因工程及蛋白質(zhì)工程4()下列對逆轉(zhuǎn)錄酶描述正確的是：A依賴于RNA的DNA聚合酶或稱為RNA指導的DNA聚合酶B依賴于cDNA的DNA聚合酶或稱為cDNA指導的DNA聚合酶C依賴于DNA的DNA聚合酶或稱為DNA指導的DNA聚合酶D依賴于RNA的RNA聚合酶或稱為rNA指導的RNA聚合酶5()下列對限制性內(nèi)切酶描述正確的是Ａ限制性內(nèi)切酶可識別任一的DNA序列Ｂ使用限制性內(nèi)切酶時，有時可出現(xiàn)星活性Ｃ限制性內(nèi)切酶可識別堿基數(shù)不超過5個Ｄ限制性內(nèi)切酶切割堿基序列產(chǎn)生都是黏性末端6()T4-DNA連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段DNA片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團是Ａ2'-OH和5'-PＢ2'-OH和3'-PＣ3'-OH和2'-PＤ3'-OH和5'-PＥ5'-OH和3'-P7()下列有關(guān)連接反應的敘述，錯誤的是Ａ連接反應的最佳溫度為12—16Ｂ連接反應緩沖體系的甘油濃度應低于10%Ｃ連接反應緩沖體系的ATP濃度不能高于1mMＤ連接酶通常應過量2-5倍ＥDTT在反應中可加也可不加8（）下列哪種克隆載體對外源DNA的容載量最大?A質(zhì)粒B黏粒C酵母人工染色體(YAC)Dλ噬菌體9（）載體的功能是(I運送外源基因高效進入受體細胞II為外源基因提供復制能力III為外源基因提供整合能力)ＡIＢI+IIＣI+IIIＤII+IIIＥI+II+III10()考斯質(zhì)粒（cosmid）是一種Ａ天然質(zhì)粒載體Ｂ由入-DNA的cos區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體Ｃ能裂解受體細胞的烈性載體Ｄ具有溶原性質(zhì)的載體Ｅ能在受體細胞內(nèi)復制并包裝的載體11()下列有關(guān)基因的描述，錯誤的是Ａ蛋白質(zhì)是基因表達唯一的產(chǎn)物Ｂ基因是DNA鏈上具有編碼功能的片段Ｃ基因也可以是RNAＤ基因突變不一定導致其表達產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)12（）關(guān)于cDNA的最正確的提法是：A同mRNA互補的單鏈DNAB同mRNA互補的雙鏈DNAC以mRNA為模板合成的雙鏈DNAD以上都正確13（）某一重組DNA（kb）的載體部分有兩個SmaI酶切位點。用SmaI酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的SmaI酶切位點共有Ａ5個Ｂ4個Ｃ3個Ｄ2個14（）同一種質(zhì)粒DNA，以三種不同的形式存在，電泳時，它們的遷移速率是：AOCDNA>SCDNP>LDNABSCDNA>LDNA>OCDNACLDNA>OCDNA>SCDNADSCDNA>OCDNA>LDNA15（）cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點是Ａ成功率高Ｂ不含內(nèi)含子Ｃ操作簡便Ｄ表達產(chǎn)物可以分泌Ｅ能糾正密碼子的偏愛性三、簡答題（每題5分，共25分）1、什么是包涵體2、PCR反應體系包括哪些內(nèi)容？基本反應過程是什么？3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？

4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么？5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？四、論述題（每題10分，共40分）1簡述載體構(gòu)建的一般過程2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點和缺點是什么？3如何有效地提高外源基因的表達效率？4試述3′RACE技術(shù)原理和方法基因工程試題標準答案及評分標準A一、選擇題（每題1分，共15分）1、A2、A3、A4、A5、B6、D7、E8、C9、E10、B11、A12、C13、D14、B15、B二、名詞解釋（每題2分，共20分）1、轉(zhuǎn)染：專指感受態(tài)的大腸桿菌細胞捕獲和表達噬菌體DNA分子的生命過程。2、質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。3、cDNA文庫：是指某生物某一發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種載體連接而成的克隆的集合。4、RACE：是一種通過PCR進行cDNA末端快速克隆的技術(shù)，是以mRNA為模板反轉(zhuǎn)錄成cDNA第一鏈后用PCR技術(shù)擴增出某個特異位點到3，或5，端之間未知序列的方法。5、基因工程:在分子水平上的進行的遺傳操作，指將一種或多種微生物的基因或基因組提取出來，或人工合成基因，按著人們的愿望，進行嚴密的設(shè)計，經(jīng)過體外加工重組，轉(zhuǎn)移到另一種生物體的細胞內(nèi)，使之能在受體細胞遺傳并獲得新的遺傳性狀的技術(shù)。6、RT-PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于mRNA，以寡聚dT為引物合成cDNA第一鏈，然后用已知一對引物，擴增嵌合分子，這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄PCR7、Insertinaction:即插入失活，基因工程載體上的某些選擇標記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點，在該位點用相應的限制性內(nèi)切酶處理，并將外源DNA片段插入該位點，則插入的外源DNA片段將破壞原有基因的讀碼框，往往導致原有的選擇標記基因無法翻譯表達，或即使翻譯表達，形成的也是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì)，這一現(xiàn)象稱為插入失活。。8、S-D序列：在大腸桿菌mRNA的核糖體結(jié)合位點上，含有一個轉(zhuǎn)譯起始密碼子及同16S核糖體RNA3，末端堿基互補的序列，該序列最初由Shine、Dalgarno發(fā)現(xiàn)，故后來命名為Shine—Dalgarno序列，簡稱S-D序列。9、穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復制起點的選擇標記，因而可在兩種不同宿主細胞中存活和復制的質(zhì)粒載體。10、MCS：指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點的DNA片段。三、簡答題（共25分，每題5分）1、什么是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達時，常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在，這種晶狀體即包涵體。包涵體的形成是外源蛋白的高效表達時的普遍現(xiàn)象，這是由于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯誤聚合，而不是形成成熟的天然態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、PCR反應體系包括哪些內(nèi)容？基本反應過程是什么？PCR反應體系所要求的條件:a、被分離的目的基因兩條鏈各一端序列相互補的DNA引物（約20個堿基左右）。b、具有熱穩(wěn)定性的酶如：TagDNA聚合酶。c、dNTP。d、作為模板的目的DNA序列，E無菌水，F(xiàn)，緩沖液PCR反應體系的基本反應過程：預變性、變性、退火、延伸、復延伸。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？⑴酶的純度。⑵DNA樣品的純度。⑶DNA的甲基化程度。⑷酶切反應的溫度與時間。⑸DNA分子的構(gòu)型。⑹限制性核酸內(nèi)切酶的反應緩沖液。4、作為基因工程載體必須具備的基本條件是什么？①能在宿主細胞內(nèi)進行獨立和穩(wěn)定的自我復制②具有合適的限制內(nèi)切酶位點③具有合適的選擇標記基因5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn)：①證實了DNA是遺傳物質(zhì)②揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復制機理③遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：①限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA切割②DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接③基因工程載體的研究與應用四、問答題（每題10分，共40分）1簡述載體構(gòu)建的一般過程A目的基因分析（1）ORF分析（2）酶切位點分析B載體選擇與分析（1）多克隆位點分析（2）抗性標記分析（3）啟動子與其他篩選標記分析C連接體系與連接時間確定2大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)點和缺點是什么？優(yōu)點：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學、分子遺傳學等方面的背景知識清楚，對其基因表達調(diào)控的分子機理也比較了解，而且歷經(jīng)二十年的基因工程實踐，大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系，有多種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點：在通常情況下，細菌的RNA聚合酶不能識別真核的啟動子；許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾，如正確的折疊和組裝，而細菌中通常并沒有這樣的修飾機制，從而可能導致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表達的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細菌的蛋白酶識別，并被當做“異已分子”降解掉。3如何有效地提高外源基因的表達效率？⑴提高啟動子強度⑵縮短啟動子同克隆基因間距離⑶高效的翻譯起始序列⑷高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)⑸提高質(zhì)粒拷貝數(shù)及穩(wěn)定性⑹用以下方法提高翻譯水平：①調(diào)整SD序列與AUG間的距離②用點突變的方法改變某些堿基③增加mRNA的穩(wěn)定性的⑺減輕細胞的代謝負荷：①誘導表達②表達載體的誘導復制⑻提高表達蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：①克隆一段原核序列，表達融合蛋白②采用某種突變菌株③表達分泌蛋白質(zhì)4試述3′RACE技術(shù)原理和方法PCR用于擴增代表mRNA轉(zhuǎn)錄物某一單位點與其3′或5′末端之間區(qū)域的部分cDNA稱為快速擴增cDNA末端技術(shù)。如果已敿目的mRNA的一片段鏈內(nèi)短序列，據(jù)此或設(shè)計基因特異引物，用原先存在的poly(A)尾（