油鏡的使用與簡(jiǎn)單染色法

7試驗(yàn)一油鏡的使用、簡(jiǎn)潔染色法一、試驗(yàn)?zāi)康陌盐沼徒滴镧R的使用方法。二、試驗(yàn)原理〔一〕一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造〔虹采〕、聚光鏡〔集光器〕等?！捕秤徒档脑?5x、100x標(biāo)記國(guó)產(chǎn)鏡多用“油”字表示，國(guó)外產(chǎn)品則用“Oil”〔OilImmersion〕或HI〔homogeneousImmersion〕表示。而且油鏡的鏡身較高倍鏡和低倍鏡為長(zhǎng)，鏡相像〔香柏油為1.515，玻璃為1.52〕。鏡檢時(shí)，滴加香柏油的作用是使光源盡〔1.0〕而散失，因而能提高物鏡的區(qū)分率，使物像光明清楚〔見以以下圖〕。圖介質(zhì)為空氣〔A〕與介質(zhì)為香柏油〔B〕時(shí)間線通過的比較〔三〕細(xì)菌簡(jiǎn)潔染色細(xì)菌的涂片和染色是微生物學(xué)試驗(yàn)中的一項(xiàng)根本技術(shù)。細(xì)菌的細(xì)胞小而透亮其形態(tài)和構(gòu)造。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般外形和細(xì)菌排列的觀看。堿性復(fù)紅等。當(dāng)細(xì)菌分解糖類產(chǎn)酸使培育基pH下降時(shí)，細(xì)菌所帶正電荷增加，此時(shí)可用伊紅、酸性復(fù)紅或剛果紅等酸性染料染色。三、試驗(yàn)用品〔E.coli〕、金黃色葡萄球菌〔Staphylocosccusaureus〕的斜面菌種、滴管、燒杯、試管架。四、試驗(yàn)內(nèi)容與方法〔一〕光學(xué)顯微鏡的使用調(diào)整光源→低倍鏡觀看→高倍鏡觀看→油鏡觀看1、觀看前的預(yù)備4cm。坐正，練習(xí)用左眼觀看。②調(diào)整光源：將低倍物鏡轉(zhuǎn)到工作位置，把光圈完全翻開，聚光器升至與載物臺(tái)相距約1mm左右。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡采集光源，光線較強(qiáng)的自然光源宜用平面觀看染色裝片時(shí)，光線宜強(qiáng)；觀看未染色裝片時(shí)，光線不宜太強(qiáng)。2、低倍鏡觀看染色裝片位置移至物鏡正下方，物鏡降至距裝片0.5cm處，適當(dāng)縮小光圈然后兩眼從目〔或使鏡臺(tái)下降〕至覺察物像時(shí)，改用細(xì)調(diào)整器調(diào)整到物像清楚為止。移動(dòng)裝片，把適宜的觀看部位移至視野中心。3、高倍鏡觀看置，預(yù)備用油鏡觀看。4、油鏡觀看①提起鏡筒約2cm，將油鏡轉(zhuǎn)至正下方。在玻片標(biāo)本的鏡部檢位〔鏡頭的正下方〕滴一滴香柏油。使油鏡浸在油中至油圈不擴(kuò)大為止，鏡頭幾乎與裝片接觸，但不行壓及裝片，以免壓碎玻片，損壞鏡頭。(切忌反方向旋轉(zhuǎn))，當(dāng)視野中有物像消滅時(shí)，再用細(xì)調(diào)整器校正焦距。如因鏡頭下降未到位像看清為止。倍鏡和油鏡觀看，繪圖。重復(fù)觀看時(shí)可比第一次少加香柏油。5、鏡檢完畢后的工作①移開物鏡鏡頭，取出裝片。鏡紙沾少許二甲苯擦掉殘留的香柏油，最終再用干凈的擦鏡紙擦干殘留的二甲苯。擦鏡頭時(shí)要順著鏡頭直徑方向擦，不能沿圓周方向擦。③擦凈顯微鏡，將各局部復(fù)原。將接物鏡呈“八”字形降下，不行使其正對(duì)聚放入鏡箱中，置陰涼枯燥處存放。留意事項(xiàng)：使用油鏡必需按先用低倍鏡和高倍鏡觀看，再用油鏡觀看下降鏡頭時(shí)，確定要從側(cè)面注視，切忌用眼睛對(duì)著目鏡，邊觀看邊下降鏡頭的錯(cuò)誤操作，以免壓碎玻片而損壞鏡頭。使用二甲苯擦鏡頭時(shí)，留意二甲苯不能過多，以防溶解固定透鏡的樹脂。留意保持顯微鏡的干凈，對(duì)金屬局部要用軟布擦拭，擦鏡頭必需用擦鏡紙，切勿用手或用一般布、紙等，以免損壞鏡頭?！捕澈?jiǎn)潔染色法1、涂片：在干凈無(wú)脂的載玻片中心滴一小滴生理鹽水，用無(wú)菌操作方法從菌種斜面挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成薄膜，涂布面積約1～1.5cm2。*無(wú)菌操作要點(diǎn)：無(wú)菌操作的試管或三角瓶在開塞后及回塞前，其口部應(yīng)通過火焰2-3次，以燒去上及長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中，以防污染。接種環(huán)〔或針〕每次使用前后，均應(yīng)在火焰上徹底灼燒滅菌。挑菌前，必需待接種環(huán)〔或針〕冷卻后才能使用。2、枯燥：將涂片于室溫中自然枯燥。32～3次。菌形態(tài)毀壞。42min。5、水洗：傾去染色液，斜置載片，用自來(lái)水的細(xì)水流由載片上端流下，不得直接沖在涂菌處，直洗至從載片上流下的水中無(wú)染色液的顏色為止。6、枯燥：自然晾干或用吸水紙輕輕地吸干，留意不要擦掉菌體。7、鏡檢：待標(biāo)本完全枯燥后，先用低倍鏡和高倍鏡觀看，將典型部位移至視野中心，再用油鏡觀看。*留意事項(xiàng)：涂片時(shí)，無(wú)菌水及取菌不宜過多，涂片應(yīng)盡可能均勻。水洗步驟