11 DNA重組技術(shù)的基本工具課件(人教版選修III) 2

選修三現(xiàn)代生物科技專題

專題一基因工程第一小節(jié)DNA重組技術(shù)的基本工具選修三現(xiàn)代生物科技專題

專題一基因工程第一小1ThecamelecowThecamelecow2為什么能把一種生物的基因“嫁接”到

另一種生物上并成功表達(dá)？1、大多數(shù)生物的遺傳物質(zhì)都是DNA，且主要為雙螺旋結(jié)構(gòu)，即不同生物的DNA分子基本結(jié)構(gòu)是相同的，都遵循堿基互補配對原則。所以不同的生物DNA可以嫁接2、地球上的所有生物共用一套遺傳密碼，所以，一種生物的基因可以在另外一種生物體內(nèi)得以表達(dá)為什么能把一種生物的基因“嫁接”到

另一種生物上并成功表達(dá)？3基因工程：又叫做基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。通俗的說，就是按照人們的意愿，把一種生物的某種基因提取出來，加以修飾改造，然后放到另一種生物的細(xì)胞里，定向地改造生物的遺傳性狀。原理：操作水平：結(jié)果(目的）：基因重組DNA分子水平定向地改造生物的遺傳性狀，獲得人類所需要的品種。（一）基因工程的概念基因工程：又叫做基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。通俗的說，就是4基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：（一）基因工程的概念普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？重組DNA導(dǎo)入形成基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：（一）基因工程的概念普通棉花(5（一）基因工程的概念基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出抗蟲基因關(guān)鍵步驟二：形成重組DNA關(guān)鍵步驟三：重組DNA導(dǎo)入受體(棉花)細(xì)胞（一）基因工程的概念基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一6解決培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟需要哪些工具？（二）DNA重組技術(shù)的基本工具

關(guān)鍵步驟一的工具：

關(guān)鍵步驟二的工具：

關(guān)鍵步驟三的工具：分子手術(shù)刀—限制性內(nèi)切酶分子縫合針—DNA連接酶

分子運輸車—運載體解決培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟需要哪些工具？（二）DNA重組技術(shù)的7閱讀課本4-5頁“限制性核酸內(nèi)切酶——分子手術(shù)刀”的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表自主學(xué)習(xí)主要從原核生物中分離純化而來已經(jīng)分離出大約4000種1、識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列2、使每一條鏈中特定部位的特定兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。形成兩種末端：黏性末端或平末端閱讀課本4-5頁“限制性核酸內(nèi)切酶——分子手術(shù)刀”的相關(guān)內(nèi)容8G1’2’3’4’5’1’2’3’4’5’A3’,5’-磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵G1’2’3’4’5’1’2’3’4’5’A3’,59（一）限制酶——“分子手術(shù)刀”12345（一）限制酶——“分子手術(shù)刀”1234510中軸線在G與A之間切割大腸桿菌的一種限制酶(EcoRⅠ)只能識別GAATTC序列，并在G和A之間切開。EcoRI限制酶的作用中軸線在G與A之間切割大腸桿菌的一種限制酶(EcoRⅠ)只能11“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（二）基因操作的工具限制酶“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（二）基因操作的工具限制酶12什么叫黏性末端？（二）基因操作的工具

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。什么叫黏性末端？（二）基因操作的工具被限制酶13SmaI只能識別CCCGGG序列，并在C和G之間切開。中軸線SmaI限制酶的作用在G與C之間切割SmaI只能識別CCCGGG序列，并在中軸線SmaI限制酶的14平末端平末端SmaI限制酶的切割當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。平末端平末端SmaI限制酶的切割當(dāng)限制酶從識別序列的中15G

AA

TT

CC

TT

AA

GEcoRⅠ中軸線CCCGGGG

GG

CC

CSmaⅠ黏性末端平末端平末端黏性末端GAATTCCTTAA1611DNA重組技術(shù)的基本工具課件(人教版選修III)21718仔細(xì)觀察各限制酶識別的特定序列有何特點？限制酶的識別序列限制酶所識別的序列的特點是：呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的，稱為回文序列18仔細(xì)觀察各限制酶識別的特定序列有何特點？限制酶的識別序列18目的基因所在的DNA分子SmaⅠ識別序列及切割的位點為CCC↓GGGEcoRⅠ識別序列及切割的位點G↓AATTC

請選擇合適的限制酶切割目的基因目的基因所在的DNA分子SmaⅠ識別序列及切割的位點為CCC19要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？（二）基因操作的工具要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性末端。如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？

會產(chǎn)生相同的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合起來，就似乎可以合成重組的DNA分子了。要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾20限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有一個酶Ⅱ的切點。（1）請畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。（2）請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。（3）在DNA連接酶作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？為什么？

可以連接。因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互補的）小試身手限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)211．下圖所示限制性核酸內(nèi)切酶切割某DNA的過程，從圖中可知，該限制性核酸內(nèi)切酶能識別的堿基序列及切點是()A．CTTAAG，切點在C和T之間B．CTTAAG，切點在G和A之間C．GAATTC，切點在G和A之間D．CTTAAG，切點在C和T之間C

1．下圖所示限制性核酸內(nèi)切酶切割某DNA的過程，A．CTTA222.下列關(guān)于限制酶的說法正確的是A．限制酶廣泛存在于各種生物中，但原核生物中很少B．一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列C．不同的限制酶切割DNA后都會形成黏性末端 D．限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氫鍵

B2.下列關(guān)于限制酶的說法正確的是B2324類型來源功能相同點差別E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶大腸桿菌T4噬菌體恢復(fù)磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)閱讀課本第5頁“分子縫合針”——DNA連接酶的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表自主學(xué)習(xí)24類型來源功能相同點差別E·coliDNA連接酶T4DNA24把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接起來催化形成磷酸二酯鍵DNA連接酶的作用把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接25兩DNA片段要具有互補的黏性末端才能拼起來DNA連接酶的縫合作用可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，注意：DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的DNA單鏈缺口，但不能連接單鏈DNA！兩DNA片段要具有互補的黏性末端才能拼起來DNA連接酶的縫合26DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶的縫合作用DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可27AATTGCAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶的作用返回AATTGC28都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì)

不需要需要形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復(fù)制DNA連接酶與DNA聚合酶的比較只能將單個核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì) 不需要需要形成完整的重組D294．據(jù)下圖所示，有關(guān)工具酶功能的敘述錯誤的是()A．限制性核酸內(nèi)切酶可以切斷a處B．DNA聚合酶可以連接a處C．解旋酶可以使b處解開D．DNA連接酶可以連接c處D

4．據(jù)下圖所示，有關(guān)工具酶功能的敘述錯誤的是()A．限制30？目的基因受體細(xì)胞運載體問：運載體具備什么特點才能完成此操作？基因很難進入受體細(xì)胞中。運載體的作用：將外源基因送入受體細(xì)胞。

？目的基因受體細(xì)胞運載體問：運載體具備什么特點才能完成此操作31運載體的特點1：

能進入并在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制；

問題1：假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣？運載體的特點1：能進入并在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制；32問題2：作為載體沒有切割位點將怎樣？問題2：作為載體沒有切割位點將怎樣？33？重組質(zhì)粒DNA連接酶受體細(xì)胞運載體的特點2：

相同限制酶……CTTAAGCTTAAGCTTAAGCTTAAG目的基因具多個限制酶切點，以便與外源基因連接。？重組質(zhì)粒DNA連接酶受體細(xì)胞運載體的特點2：相同限制酶…34目的基因所在片段運載體PStⅠDNA連接酶重組DNA運載體自連目的基因自連CTTAAGCTTAAGCTTAACTTAAGGPStⅠ問題3：目的基因是否進入受體細(xì)胞，你如何去察覺？目的基因所在片段運載體PStⅠDNA連接酶重組DNA運載體自35有標(biāo)記基因，以便于鑒定與選擇如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因等。運載體的特點3：

有標(biāo)記基因，以便于鑒定與選擇運載體的特點3：36問題4：如果載體對受體細(xì)胞有害將怎樣？不能分離會怎樣？運載體的特點4：

對受體細(xì)胞無害、易分離。常用的運載體：

質(zhì)粒、動植物病毒，噬菌體衍生物問題4：如果載體對受體細(xì)胞有害將怎樣？運載體的特點4：對受37細(xì)菌的質(zhì)粒：自主復(fù)制的雙鏈、閉合、環(huán)狀DNA分子；可以在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移細(xì)菌的質(zhì)粒：自主復(fù)制的雙鏈、閉合、環(huán)狀DNA分子；可以在細(xì)胞38pBR322質(zhì)粒結(jié)構(gòu)

如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活標(biāo)記基因進行篩選限制性內(nèi)切酶識別序列外源基因連接PStⅠPStⅠ自主復(fù)制pBR322質(zhì)粒結(jié)構(gòu)

如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因39質(zhì)粒的特點1細(xì)胞染色體（或擬核DNA分子）外能自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子；2質(zhì)粒的存在對宿主細(xì)胞無影響；3.質(zhì)粒的復(fù)制只能在宿主細(xì)胞內(nèi)完成。質(zhì)粒的特點1細(xì)胞染色體（或擬核DNA分子）外能自主復(fù)制的小401.以下說法正確的是（）

A、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列

B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體

C、運載體必須具備的條件之一是：具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接

D、DNA連接酶使黏性末段的堿基之間形成氫鍵C練習(xí)1.以下說法正確的是412.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是

A、能復(fù)制（）

B、有多個限制酶切點

C、具有標(biāo)記基因

D、它是環(huán)狀DNAD練習(xí)2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是D練習(xí)423.有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是（）

A、基因工程技術(shù)能定向地改造生物的遺傳性狀，培育生物新品種

B、重組DNA的形成在細(xì)胞內(nèi)完成

C、目的基因須由運載體導(dǎo)入受體細(xì)胞

D、質(zhì)粒都可作為運載體BD練習(xí)3.有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是（）BD431．下列關(guān)于DNA連接酶的敘述中，正確的是A．DNA連接酶連接的是兩條鏈堿基對之間的氫鍵B．DNA連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和脫氧核糖C．DNA連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和核糖D．同一種DNA連接酶可以切出不同的黏性末端B1．下列關(guān)于DNA連接酶的敘述中，正確的是44A2．在胰島素的基因與質(zhì)粒形成重組DNA分子的過程中，下列哪組是所需要的①同一種限制酶切割兩者；②不需同一種限制酶切割兩者；③加入適量的DNA連接酶；④不需加DNA連接酶A．①③ B．①④ C．②④ D．②③A2．在胰島素的基因與質(zhì)粒形成重組DNA分子的過程中，下列哪453.下列四條DNA分子，彼此間具有粘性末端的一組是

A．①②B．②③C．③④D．②④答案：D3.下列四條DNA分子，彼此間具有粘性末端的一組是答案：D464、關(guān)于限制酶的說法中，正確的是（）A、限制酶是一種酶，只識別GAATTC堿基序列B、EcoRI切割的是G—A之間的氫鍵C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNAD．限制酶只存在于原核生物中答案：C4、關(guān)于限制酶的說法中，正確的是（）答案：C47你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？原核生物易受自然界外源DNA的入侵，但生物在長期的進化過程中形成了一套完善的防御機制，以防止外來病原物的侵害。限制酶就是細(xì)菌的一種防御性工具，當(dāng)外源DNA侵入時，會利用限制酶將外源DNA切割掉，以保證自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達(dá)到保護自身的目的。尋根問底為什么限制酶不剪切細(xì)菌本身的DNA？通過長期的進化，細(xì)菌中含有某種限制酶的細(xì)胞，其DNA分子中不具備這種限制酶的識別切割序列，或者通過甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。這樣，盡管細(xì)菌中含有某種限制酶也不會使自身的DNA被切斷，并且可以防止外源DNA的入侵。你能推測限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？原核生物易受自483、天然的DNA分子可以直接用做基因工程載體嗎？為什么？提示：基因工程中作為載體使用的DNA分子很多都是質(zhì)粒（plasmid），即獨立于細(xì)菌擬核處染色體DNA之外的一種可以自我復(fù)制、雙鏈閉環(huán)的裸露的DNA分子。是否任何質(zhì)粒都可以作為基因工程載體使用呢？不是，作為基因工程使用的載體必需滿足以下條件：3、天然的DNA分子可以直接用做提示：491）載體DNA必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點所處的位置，還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外，這樣才不至于因目的基因的插入而失活。2）載體DNA必需具備自我復(fù)制的能力，或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA的復(fù)制而同步復(fù)制。3）載體DNA必需帶有標(biāo)記基因，以便重組后進行重組子的篩選。4）載體DNA必需是安全的，不會對受體細(xì)胞有害，或不能進入到除受體細(xì)胞外的其他生物細(xì)胞中去。5）載體DNA分子大小應(yīng)適合，以便提取和在體外進行操作，太大就不便操作。實際上自然存在的質(zhì)粒DNA分子并不完全具備上述條件，都要進行人工改造后才能用于基因工程操作。1）載體DNA必需有一個或多個限制酶的切割位點，以便目的基504、DNA連接酶有連接單鏈DNA的本領(lǐng)嗎？

迄今為止，所發(fā)現(xiàn)的DNA連接酶都不具有連接單鏈DNA的能力，至于原因，現(xiàn)在還不清楚，也許將來會發(fā)現(xiàn)可以連接單鏈DNA的酶。4、DNA連接酶有連接單鏈DNA的本領(lǐng)嗎？迄今為51再見再見52選修三現(xiàn)代生物科技專題

專題一基因工程第一小節(jié)DNA重組技術(shù)的基本工具選修三現(xiàn)代生物科技專題

專題一基因工程第一小53ThecamelecowThecamelecow54為什么能把一種生物的基因“嫁接”到

另一種生物上并成功表達(dá)？1、大多數(shù)生物的遺傳物質(zhì)都是DNA，且主要為雙螺旋結(jié)構(gòu)，即不同生物的DNA分子基本結(jié)構(gòu)是相同的，都遵循堿基互補配對原則。所以不同的生物DNA可以嫁接2、地球上的所有生物共用一套遺傳密碼，所以，一種生物的基因可以在另外一種生物體內(nèi)得以表達(dá)為什么能把一種生物的基因“嫁接”到

另一種生物上并成功表達(dá)？55基因工程：又叫做基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。通俗的說，就是按照人們的意愿，把一種生物的某種基因提取出來，加以修飾改造，然后放到另一種生物的細(xì)胞里，定向地改造生物的遺傳性狀。原理：操作水平：結(jié)果(目的）：基因重組DNA分子水平定向地改造生物的遺傳性狀，獲得人類所需要的品種。（一）基因工程的概念基因工程：又叫做基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。通俗的說，就是56基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：（一）基因工程的概念普通棉花(無抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？重組DNA導(dǎo)入形成基因工程培育抗蟲棉的簡要過程：（一）基因工程的概念普通棉花(57（一）基因工程的概念基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出抗蟲基因關(guān)鍵步驟二：形成重組DNA關(guān)鍵步驟三：重組DNA導(dǎo)入受體(棉花)細(xì)胞（一）基因工程的概念基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一58解決培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟需要哪些工具？（二）DNA重組技術(shù)的基本工具

關(guān)鍵步驟一的工具：

關(guān)鍵步驟二的工具：

關(guān)鍵步驟三的工具：分子手術(shù)刀—限制性內(nèi)切酶分子縫合針—DNA連接酶

分子運輸車—運載體解決培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟需要哪些工具？（二）DNA重組技術(shù)的59閱讀課本4-5頁“限制性核酸內(nèi)切酶——分子手術(shù)刀”的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表自主學(xué)習(xí)主要從原核生物中分離純化而來已經(jīng)分離出大約4000種1、識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列2、使每一條鏈中特定部位的特定兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開。形成兩種末端：黏性末端或平末端閱讀課本4-5頁“限制性核酸內(nèi)切酶——分子手術(shù)刀”的相關(guān)內(nèi)容60G1’2’3’4’5’1’2’3’4’5’A3’,5’-磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵G1’2’3’4’5’1’2’3’4’5’A3’,561（一）限制酶——“分子手術(shù)刀”12345（一）限制酶——“分子手術(shù)刀”1234562中軸線在G與A之間切割大腸桿菌的一種限制酶(EcoRⅠ)只能識別GAATTC序列，并在G和A之間切開。EcoRI限制酶的作用中軸線在G與A之間切割大腸桿菌的一種限制酶(EcoRⅠ)只能63“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（二）基因操作的工具限制酶“分子手術(shù)刀”——限制性核酸內(nèi)切酶（二）基因操作的工具限制酶64什么叫黏性末端？（二）基因操作的工具

被限制酶切開的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個伸出的核苷酸，他們之間正好互補配對，這樣的切口叫黏性末端。什么叫黏性末端？（二）基因操作的工具被限制酶65SmaI只能識別CCCGGG序列，并在C和G之間切開。中軸線SmaI限制酶的作用在G與C之間切割SmaI只能識別CCCGGG序列，并在中軸線SmaI限制酶的66平末端平末端SmaI限制酶的切割當(dāng)限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，切開的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。平末端平末端SmaI限制酶的切割當(dāng)限制酶從識別序列的中67G

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GEcoRⅠ中軸線CCCGGGG

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CSmaⅠ黏性末端平末端平末端黏性末端GAATTCCTTAA6811DNA重組技術(shù)的基本工具課件(人教版選修III)26970仔細(xì)觀察各限制酶識別的特定序列有何特點？限制酶的識別序列限制酶所識別的序列的特點是：呈現(xiàn)堿基互補對稱，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的，稱為回文序列18仔細(xì)觀察各限制酶識別的特定序列有何特點？限制酶的識別序列70目的基因所在的DNA分子SmaⅠ識別序列及切割的位點為CCC↓GGGEcoRⅠ識別序列及切割的位點G↓AATTC

請選擇合適的限制酶切割目的基因目的基因所在的DNA分子SmaⅠ識別序列及切割的位點為CCC71要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾個黏性末端？（二）基因操作的工具要切兩個切口，產(chǎn)生四個黏性末端。如果把兩種來源不同的DNA用同一種限制酶來切割，會怎樣呢？

會產(chǎn)生相同的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合起來，就似乎可以合成重組的DNA分子了。要想獲得某個特定性狀的基因必須要用限制酶切幾個切口？可產(chǎn)生幾72限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC—。在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個切點，在目的基因的兩側(cè)各有一個酶Ⅱ的切點。（1）請畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。（2）請畫出目的基因兩側(cè)被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。（3）在DNA連接酶作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接？為什么？

可以連接。因為由兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端是相同的（或是可以互補的）小試身手限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識別序列和切點是—G↓GATCC—，限制性內(nèi)731．下圖所示限制性核酸內(nèi)切酶切割某DNA的過程，從圖中可知，該限制性核酸內(nèi)切酶能識別的堿基序列及切點是()A．CTTAAG，切點在C和T之間B．CTTAAG，切點在G和A之間C．GAATTC，切點在G和A之間D．CTTAAG，切點在C和T之間C

1．下圖所示限制性核酸內(nèi)切酶切割某DNA的過程，A．CTTA742.下列關(guān)于限制酶的說法正確的是A．限制酶廣泛存在于各種生物中，但原核生物中很少B．一種限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列C．不同的限制酶切割DNA后都會形成黏性末端 D．限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氫鍵

B2.下列關(guān)于限制酶的說法正確的是B7576類型來源功能相同點差別E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶大腸桿菌T4噬菌體恢復(fù)磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)閱讀課本第5頁“分子縫合針”——DNA連接酶的相關(guān)內(nèi)容，填寫下表自主學(xué)習(xí)24類型來源功能相同點差別E·coliDNA連接酶T4DNA76把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接起來催化形成磷酸二酯鍵DNA連接酶的作用把切下來的DNA片段拼接成新的DNA，即將脫氧核糖和磷酸連接77兩DNA片段要具有互補的黏性末端才能拼起來DNA連接酶的縫合作用可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來，注意：DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的DNA單鏈缺口，但不能連接單鏈DNA！兩DNA片段要具有互補的黏性末端才能拼起來DNA連接酶的縫合78DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可把平末端之間的縫隙“縫合”起來，但效率較低DNA連接酶的縫合作用DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？T4DNA連接酶還可79AATTGCAATTAATTDNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶DNA聚合酶的作用返回AATTGC80都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì)

不需要需要形成完整的重組DNA分子形成DNA的一條鏈基因工程DNA復(fù)制DNA連接酶與DNA聚合酶的比較只能將單個核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵在兩個DNA片段之間形成磷酸二酯鍵都能催化形成磷酸二酯鍵都是蛋白質(zhì) 不需要需要形成完整的重組D814．據(jù)下圖所示，有關(guān)工具酶功能的敘述錯誤的是()A．限制性核酸內(nèi)切酶可以切斷a處B．DNA聚合酶可以連接a處C．解旋酶可以使b處解開D．DNA連接酶可以連接c處D

4．據(jù)下圖所示，有關(guān)工具酶功能的敘述錯誤的是()A．限制82？目的基因受體細(xì)胞運載體問：運載體具備什么特點才能完成此操作？基因很難進入受體細(xì)胞中。運載體的作用：將外源基因送入受體細(xì)胞。

？目的基因受體細(xì)胞運載體問：運載體具備什么特點才能完成此操作83運載體的特點1：

能進入并在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制；

問題1：假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制將怎樣？運載體的特點1：能進入并在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制；84問題2：作為載體沒有切割位點將怎樣？問題2：作為載體沒有切割位點將怎樣？85？重組質(zhì)粒DNA連接酶受體細(xì)胞運載體的特點2：

相同限制酶……CTTAAGCTTAAGCTTAAGCTTAAG目的基因具多個限制酶切點，以便與外源基因連接。？重組質(zhì)粒DNA連接酶受體細(xì)胞運載體的特點2：相同限制酶…86目的基因所在片段運載體PStⅠDNA連接酶重組DNA運載體自連目的基因自連CTTAAGCTTAAGCTTAACTTAAGGPStⅠ問題3：目的基因是否進入受體細(xì)胞，你如何去察覺？目的基因所在片段運載體PStⅠDNA連接酶重組DNA運載體自87有標(biāo)記基因，以便于鑒定與選擇如抗菌素的抗性基因、產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因等。運載體的特點3：

有標(biāo)記基因，以便于鑒定與選擇運載體的特點3：88問題4：如果載體對受體細(xì)胞有害將怎樣？不能分離會怎樣？運載體的特點4：

對受體細(xì)胞無害、易分離。常用的運載體：

質(zhì)粒、動植物病毒，噬菌體衍生物問題4：如果載體對受體細(xì)胞有害將怎樣？運載體的特點4：對受89細(xì)菌的質(zhì)粒：自主復(fù)制的雙鏈、閉合、環(huán)狀DNA分子；可以在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移細(xì)菌的質(zhì)粒：自主復(fù)制的雙鏈、閉合、環(huán)狀DNA分子；可以在細(xì)胞90pBR322質(zhì)粒結(jié)構(gòu)

如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活標(biāo)記基因進行篩選限制性內(nèi)切酶識別序列外源基因連接PStⅠPStⅠ自主復(fù)制pBR322質(zhì)粒結(jié)構(gòu)

如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因91質(zhì)粒的特點1細(xì)胞染色體（或擬核DNA分子）外能自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子；2質(zhì)粒的存在對宿主細(xì)胞無影響；3.質(zhì)粒的復(fù)制只能在宿主細(xì)胞內(nèi)完成。質(zhì)粒的特點1細(xì)胞染色體（或擬核DNA分子）外能自主復(fù)制的小921.以下說法正確的是（）

A、所有的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列

B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體

C、運載體必須具備的條件之一是：具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接

D、DNA連接酶使黏性末段的堿基之間形成氫鍵C練習(xí)1.以下說法正確的是932.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是

A、能復(fù)制（）

B、有多個限制酶切點

C、具有標(biāo)記基因

D、它是環(huán)狀DNAD練習(xí)2.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是D練習(xí)943.有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是（）

A、基因工程技術(shù)能定向地改造生物的遺傳性狀，培育生物新品種

B、重組DNA的形成在細(xì)胞內(nèi)完成

C、目的基因須由運載體導(dǎo)入受體細(xì)胞

D、質(zhì)粒都可作為運載體BD練習(xí)3.有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是（）BD951．下列關(guān)于DNA連接酶的敘述中，正確的是A．DNA連接酶連接的是兩條鏈堿基對之間的氫鍵B．DNA連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和脫氧核糖C．DNA連接酶連接的是黏性末端兩條鏈主鏈上的磷酸和核糖D．同一種DNA連接酶可以切出不同的黏性末端B1．下列關(guān)于DNA連接酶的敘述中，正確的是96A2．在胰島素的基因與質(zhì)粒形成重組DNA分子的過程中，下列哪組是所需要的①同一種限制