人教生物選修一專題2-課題2課件

生物必修①·人教版新課標(biāo)導(dǎo)學(xué)生物必修①·人教版新課標(biāo)導(dǎo)學(xué)專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與學(xué)習(xí)目標(biāo)課程標(biāo)準(zhǔn)1．研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。2．利用選擇培養(yǎng)基從土壤中分離分解尿素的細(xì)菌。(重點(diǎn))3．利用稀釋涂布平板法進(jìn)行細(xì)菌數(shù)目的測(cè)定。(難點(diǎn))1．用土壤浸出液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。2．以尿素為氮源，測(cè)定能生長(zhǎng)細(xì)菌的數(shù)量。學(xué)習(xí)目標(biāo)課程標(biāo)準(zhǔn)1．研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用1自主學(xué)習(xí)2新知解讀3指點(diǎn)迷津4核心素養(yǎng)5問題釋疑6知識(shí)構(gòu)建7訓(xùn)練鞏固8課時(shí)作業(yè)1自主學(xué)習(xí)2新知解讀3指點(diǎn)迷津4核心素養(yǎng)5問題釋疑6知識(shí)構(gòu)建自主學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)一、篩選菌株1．自然界中目的菌株篩選的依據(jù)：根據(jù)它對(duì)____________的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。2．實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于____________生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)________或________其他微生物生長(zhǎng)。3．篩選分解尿素的細(xì)菌：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一________，原則上只有能夠利用________的微生物才能夠生長(zhǎng)。生存環(huán)境目的菌株抑制阻止氮源尿素生存環(huán)境目的菌株抑制阻止氮源尿素二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法1．常用方法：________________________法。2．統(tǒng)計(jì)依據(jù)：當(dāng)樣品的__________足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)________。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。3．操作：(1)設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。(2)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌株數(shù)在___________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。4．計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的______________，V代表涂布平板時(shí)所用的________________，M代表____________。間接計(jì)數(shù)(活菌計(jì)數(shù))稀釋度活菌30～300平均菌落數(shù)稀釋液的體積稀釋倍數(shù)二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法間接計(jì)數(shù)(活菌計(jì)數(shù))稀釋度活菌3三、設(shè)置對(duì)照1．對(duì)照實(shí)驗(yàn)：是指除了______________以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。2．主要目的：排除實(shí)驗(yàn)組中______________對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。例如，為了確認(rèn)培養(yǎng)基是否被雜菌污染，需以不進(jìn)行接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)作為空白對(duì)照。被測(cè)試條件非測(cè)試因素被測(cè)試條件非測(cè)試因素四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1．土壤取樣：(1)取樣原因：土壤有“微生物的______________”之稱，同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量________，種類________。(2)土壤要求：富含__________，pH接近________且潮濕。(3)取樣部位：距地表約______________的土壤層。2．樣品稀釋：(1)稀釋原因：樣品的____________直接影響平板上生長(zhǎng)的____________。(2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，保證獲得菌落數(shù)在___________，便于計(jì)數(shù)。天然培養(yǎng)基最大最多有機(jī)質(zhì)中性3～8cm稀釋程度菌落數(shù)目30～300四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)天然培養(yǎng)基最大最多有機(jī)質(zhì)中性3～8c3．微生物的培養(yǎng)與觀察：(1)培養(yǎng)：根據(jù)不同微生物的需要，控制適宜的培養(yǎng)________和培養(yǎng)時(shí)間。(2)觀察。①觀察方法：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。②菌落的特征：包括菌落的________、________、隆起程度和________等。溫度形狀大小顏色溫度形狀大小顏色五、操作提示1．無菌操作：(1)取土樣的用具在使用前都需要__________。(2)實(shí)驗(yàn)操作均應(yīng)在__________進(jìn)行。2．做好標(biāo)記：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多，為避免混淆，使用前應(yīng)標(biāo)明培養(yǎng)基的________、____________以及平板上培養(yǎng)樣品的__________等。3．制定計(jì)劃：對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物實(shí)驗(yàn)，要事先制定計(jì)劃，以便提高_(dá)___________。4．菌種鑒定：細(xì)菌合成的________將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的________增強(qiáng)。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入________指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，若指示劑變______，可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。滅菌火焰旁種類培養(yǎng)日期稀釋度工作效率脲酶堿性酚紅紅五、操作提示滅菌火焰旁種類培養(yǎng)日期稀釋度工作效率？思考土壤微生物種類最多、數(shù)量最大的原因是什么？提示：土壤中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量豐富，環(huán)境條件適宜等。？思考1．選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基。 ()分析：選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基具有分離、鑒定作用。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 ()分析：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。判斷題××1．選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基。 ()判斷題3．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)目。 ()分析：由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。4．設(shè)置對(duì)照的目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 ()5．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。 ()6．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。 ()×√√√3．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)目。 (新知解讀新知解讀1．原理人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。2．實(shí)例從熱泉中篩選出Taq細(xì)菌。熱泉70～80℃的高溫條件淘汰了絕大多數(shù)微生物，而使耐熱的Taq細(xì)菌脫穎而出。知識(shí)點(diǎn)1篩選菌株的原理與方法知識(shí)貼士科學(xué)家從該細(xì)菌中分離到的TaqDNA聚合酶能夠忍受93℃左右的高溫。1．原理知識(shí)點(diǎn)1篩選菌株的原理與方法知識(shí)貼士3．選擇培養(yǎng)基(1)概念：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。(2)原理：根據(jù)不同微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。例如：用培養(yǎng)基選擇能分解尿素的微生物的原理培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源，而不能生長(zhǎng)、繁殖，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出能分解尿素的微生物。3．選擇培養(yǎng)基(3)方法①在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的“加入”是在培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入。②改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。例如，缺乏氮源時(shí)可以分離固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出能消除石油污染的微生物。③改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物。人教生物選修一專題2-課題2課件用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是 ()A．未接種的選擇培養(yǎng)基 B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C．接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 D．接種了的選擇培養(yǎng)基[解析]

將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照。對(duì)照遵循的原則是單一變量原則。C典例1用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照〔變式訓(xùn)練1〕下面是某一課題將用到的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)下表回答下面的問題：編號(hào)成分含量①KH2PO41.4g②Na2HPO42.1g③MgSO4·7H2O0.2g④葡萄糖10.g⑤尿素1.0g⑥瓊脂15.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL〔變式訓(xùn)練1〕下面是某一課題將用到的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)下(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的是__________，提供氮源的是________。(2)絕大多數(shù)微生物能利用__________，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解________。(3)分析該培養(yǎng)基的配方，該培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？__________________________________________________________________________________葡萄糖尿素葡萄糖尿素具有。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以分離到產(chǎn)生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。葡萄糖尿素葡萄糖尿素具有。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可[解析]

碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對(duì)微生物有選擇作用。選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。人教生物選修一專題2-課題2課件1．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，一般使用計(jì)數(shù)法。計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法，兩者的比較如下表所示。知識(shí)點(diǎn)2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法及設(shè)置對(duì)照項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌1．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法知識(shí)點(diǎn)2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法及設(shè)置對(duì)照項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)依據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上的菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，且有一定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌數(shù)＝(每格平均菌體數(shù)×400)÷計(jì)數(shù)室容積×稀釋倍數(shù)①注：①400是常數(shù)。每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M。其中，C表示某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)知識(shí)貼士(1)間接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因有兩個(gè)：①當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起繁殖時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落；②統(tǒng)計(jì)結(jié)果只是活細(xì)菌產(chǎn)生的菌落數(shù)，而不包括死細(xì)菌數(shù)目。(2)為使結(jié)果接近真實(shí)值，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；要設(shè)置重復(fù)組，取其平均值。知識(shí)貼士2．設(shè)置對(duì)照(1)對(duì)照實(shí)驗(yàn)：是指除了被測(cè)試的條件外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。(2)主要目的：排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。3．稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)(1)原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約有多少活菌。2．設(shè)置對(duì)照(2)操作設(shè)置對(duì)照組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0．1mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計(jì)算菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)、計(jì)算出菌落平均數(shù)。(2)操作用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是 ()A．涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250，取平均值233D典例2用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)[解析]

在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要至少涂布3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。人教生物選修一專題2-課題2課件〔變式訓(xùn)練2〕用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。原因是 ()A．平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌 B．菌落中的細(xì)菌數(shù)是固定的C．此時(shí)的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 D．此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)一定與活菌的實(shí)際數(shù)相同[解析]

用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，平板上的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，但偶爾也能來自兩個(gè)或以上細(xì)菌，所以此方法統(tǒng)計(jì)的菌數(shù)可能與活菌的實(shí)際數(shù)不相同。C〔變式訓(xùn)練2〕用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過土壤取樣從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中，用無菌小鐵鏟鏟去表層土，迅速取土壤并裝入無菌信封密封↓制備培養(yǎng)基準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基，以尿素為唯一氮源制備9個(gè)平板培養(yǎng)基知識(shí)點(diǎn)3土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)過程土壤取樣從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中，用無菌小鐵鏟鏟去表層土，迅速樣品的稀釋在火焰旁稱取土壤10g，放入盛有90mL無菌水的三角燒瓶中，振搖使土樣與水充分混合，將菌分散。制成101倍土壤稀釋液，用一支1mL無菌吸管從中吸取1mL土壤懸液注入盛有9mL無菌水試管中，吹吸三次，使充分混勻，制成102倍土壤稀釋液，以此類推制成103、104、105、106倍土壤稀釋液↓取樣涂布在上述培養(yǎng)基的9個(gè)平板底面，每三個(gè)一組分別用記號(hào)筆寫上104、105、106倍的三種稀釋液，然后用三支1mL無菌吸管分別由104、105、106倍的三管土壤稀釋液中吸取0．1mL對(duì)號(hào)放入已寫好稀釋度的平板中，用無菌涂布器在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻人教生物選修一專題2-課題2課件(如圖)(如圖)人教生物選修一專題2-課題2課件(2017·江蘇鹽城中學(xué)高二期末)下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是 ()A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0．1mL，分別涂布于各組平板上C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D典例3(2017·江蘇鹽城中學(xué)高二期末)下列是關(guān)于“檢測(cè)[解析]

用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，先經(jīng)高溫、高壓滅菌，后倒平板，A正確；測(cè)定土壤中細(xì)菌總數(shù)利用稀釋涂布平板法，即取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0．1ml，分別涂布于各組平板上，B正確；平板倒置后，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)，C正確；確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求其平均值，再通過計(jì)算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)，D錯(cuò)誤。人教生物選修一專題2-課題2課件〔變式訓(xùn)練3〕在“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于“選擇培養(yǎng)”步驟敘述正確的是 ()A．可以增加分解尿素的細(xì)菌的濃度B．可以減少分解尿素的細(xì)菌的濃度C．所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基 D．所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基[解析]

選擇培養(yǎng)可以增加分解尿素的細(xì)菌的濃度，實(shí)驗(yàn)室里用液體培養(yǎng)基來培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌。A〔變式訓(xùn)練3〕在“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中指點(diǎn)迷津指點(diǎn)迷津一、選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別(規(guī)律方法)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；用尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基可用于分離分解尿素的細(xì)菌)鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，如用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈現(xiàn)紫黑色)一、選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別(規(guī)律方法)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用在培養(yǎng)基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素的細(xì)菌，這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于 ()A．選擇培養(yǎng)基 B．固體培養(yǎng)基C．液體培養(yǎng)基 D．鑒別培養(yǎng)基[解析]

培養(yǎng)基按用途分類，分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，按物理性質(zhì)分類，分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基能分離出以尿素為唯一氮源的細(xì)菌，故是選擇培養(yǎng)基。A典例4在培養(yǎng)基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素知識(shí)貼士不能正確區(qū)分選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)和用途，是此類問題出錯(cuò)的主要原因。知識(shí)貼士二、微生物的培養(yǎng)與分離技術(shù)微生物培養(yǎng)中所需的營(yíng)養(yǎng)及功能、培養(yǎng)基的配制原則和類型、無菌操作技術(shù)等是進(jìn)行微生物培養(yǎng)與分離必不可少的知識(shí)。1．培養(yǎng)基的制備計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板。人教生物選修一專題2-課題2課件2．無菌技術(shù)無菌技術(shù)主要指消毒、滅菌和無菌操作。實(shí)驗(yàn)室中常用紫外線或化學(xué)藥劑消毒，如接種室的紫外線消毒及用酒精擦拭雙手消毒。滅菌的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌，主要是針對(duì)培養(yǎng)器具、接種器具和培養(yǎng)基的滅菌。另外，還需注意操作過程中無菌環(huán)境的營(yíng)造，一是可以在滅菌的接種箱中進(jìn)行，二是在酒精燈火焰附近所形成的無菌區(qū)進(jìn)行。人教生物選修一專題2-課題2課件3．倒平板嚴(yán)格按照教材所示的操作步驟進(jìn)行。倒平板時(shí)需待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰附近無菌區(qū)進(jìn)行。平板冷卻凝固后，將平板倒置，使皿蓋在下、皿底在上，這樣處理可防止蒸發(fā)的水分冷卻后在皿蓋上形成水珠落在培養(yǎng)基上，造成污染等。4．平板劃線操作通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，可得到單個(gè)分離的菌落。人教生物選修一專題2-課題2課件5．稀釋涂布平板將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋后再涂布平板，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。6．選擇培養(yǎng)基用來分離某種特定的微生物在選擇培養(yǎng)基配制過程中要注意起選擇作用的成分，如分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基中的特定成分是尿素。人教生物選修一專題2-課題2課件富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一，主要是指利用不同微生物的生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，限定環(huán)境條件，使僅適應(yīng)該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集條件可根據(jù)所需分離的微生物的特點(diǎn)，從物理、化學(xué)、生物等多個(gè)方面進(jìn)行選擇，如溫度、pH、紫外線、壓強(qiáng)、光照、氧氣、營(yíng)養(yǎng)等。下圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解酚類化合物對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過程。據(jù)圖回答問題。典例5富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一，主要是人教生物選修一專題2-課題2課件(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為______________，碳源為________________。(2)實(shí)驗(yàn)原理是__________________________________________________________________________________________________________。(3)①～③重復(fù)培養(yǎng)的目的是______________________________________。(4)⑤的菌落中大部分是能降解________________的微生物。(5)⑥為________組，⑦為________組，設(shè)置⑥的目的是_________________________________________________。(6)⑤→⑥采用______________法。將單菌落接種到⑥的培養(yǎng)基中，在操作過程中為防止污染，應(yīng)注意的事項(xiàng)是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。選擇培養(yǎng)基對(duì)羥基苯甲酸利用以對(duì)羥基苯甲酸為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，經(jīng)富集培養(yǎng)，選擇出能降解酚類化合物對(duì)羥基苯甲酸的微生物增大分解對(duì)羥基苯甲酸的微生物的比例對(duì)羥基苯甲酸對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明通過富集培養(yǎng)的確得到了欲分離的目的微生物單菌落挑取 接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌，燒紅的接種環(huán)在火焰旁冷卻后，將培養(yǎng)皿蓋打開一條縫隙，挑取菌落接種到試管中，并塞好棉塞，接種環(huán)在火焰上灼燒，殺滅殘留物(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為______________，碳源為[解析]

本實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基是以對(duì)羥基苯甲酸為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)的微生物是能降解對(duì)羥基苯甲酸的微生物。經(jīng)過①②③的重復(fù)培養(yǎng)，增大了分解對(duì)羥基苯甲酸的微生物的比例。最后通過設(shè)置對(duì)照及單菌落挑取法將培養(yǎng)基上的單菌落分別接種到含有對(duì)羥基苯甲酸及不含有該物質(zhì)的培養(yǎng)基上，驗(yàn)證是否得到了目的微生物。接種過程中為防止污染，應(yīng)注意進(jìn)行一系列的無菌操作。人教生物選修一專題2-課題2課件核心素養(yǎng)核心素養(yǎng) 兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，第一位同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230；第二位同學(xué)在該濃度下涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212和256，該同學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。你認(rèn)為這兩位同學(xué)的實(shí)驗(yàn)應(yīng)如何改進(jìn)？給我們什么啟示？_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________案例提示：第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了三個(gè)平板，但是，其中一個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將三個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。 兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)[解析]

在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說服力與準(zhǔn)確性。在分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，一定要考慮所設(shè)置的重復(fù)組的結(jié)果是否一致，結(jié)果不一致，意味著操作有誤，需要重新實(shí)驗(yàn)。[解析]在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要涂布至少三個(gè)平板，作為重復(fù)組，[規(guī)律總結(jié)]空白對(duì)照和重復(fù)實(shí)驗(yàn)的區(qū)別空白對(duì)照和重復(fù)實(shí)驗(yàn)的目的是不同的，空白對(duì)照的目的是排除因培養(yǎng)基制作不合格導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)誤差，而重復(fù)實(shí)驗(yàn)的目的則是用來消除因?qū)嶒?yàn)中出現(xiàn)的偶然事件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，兩者都能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說服力。人教生物選修一專題2-課題2課件問題釋疑問題釋疑教材P22“本課題使用的培養(yǎng)基配方”分析1．在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的是尿素。2．該培養(yǎng)基對(duì)微生物具有選擇作用，其選擇機(jī)制是只有能夠以尿素作為氮源的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。教材P22“旁欄思考題”統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M[其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)]進(jìn)行計(jì)算。教材P22“本課題使用的培養(yǎng)基配方”分析教材P22“統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目”實(shí)例分析第一位同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學(xué)考慮到設(shè)置重復(fù)組的問題，涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另2個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。教材P24“旁欄思考題”這是因?yàn)橥寥乐懈黝愇⑸锏臄?shù)量(單位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中，好氧及兼性厭氧細(xì)菌約為2185萬，放線菌約為477萬，霉菌約為23．1萬。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進(jìn)行分離，同時(shí)還應(yīng)當(dāng)有針對(duì)性地提供選擇培養(yǎng)的條件。不同。103～107倍稀釋液。教材P22“統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目”實(shí)例分析知識(shí)構(gòu)建知識(shí)構(gòu)建人教生物選修一專題2-課題2課件訓(xùn)練鞏固訓(xùn)練鞏固課時(shí)作業(yè)課時(shí)作業(yè)人教生物選修一專題2-課題2課件生物必修①·人教版新課標(biāo)導(dǎo)學(xué)生物必修①·人教版新課標(biāo)導(dǎo)學(xué)專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與學(xué)習(xí)目標(biāo)課程標(biāo)準(zhǔn)1．研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。2．利用選擇培養(yǎng)基從土壤中分離分解尿素的細(xì)菌。(重點(diǎn))3．利用稀釋涂布平板法進(jìn)行細(xì)菌數(shù)目的測(cè)定。(難點(diǎn))1．用土壤浸出液進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。2．以尿素為氮源，測(cè)定能生長(zhǎng)細(xì)菌的數(shù)量。學(xué)習(xí)目標(biāo)課程標(biāo)準(zhǔn)1．研究培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用1自主學(xué)習(xí)2新知解讀3指點(diǎn)迷津4核心素養(yǎng)5問題釋疑6知識(shí)構(gòu)建7訓(xùn)練鞏固8課時(shí)作業(yè)1自主學(xué)習(xí)2新知解讀3指點(diǎn)迷津4核心素養(yǎng)5問題釋疑6知識(shí)構(gòu)建自主學(xué)習(xí)自主學(xué)習(xí)一、篩選菌株1．自然界中目的菌株篩選的依據(jù)：根據(jù)它對(duì)____________的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。2．實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：人為提供有利于____________生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)________或________其他微生物生長(zhǎng)。3．篩選分解尿素的細(xì)菌：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一________，原則上只有能夠利用________的微生物才能夠生長(zhǎng)。生存環(huán)境目的菌株抑制阻止氮源尿素生存環(huán)境目的菌株抑制阻止氮源尿素二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法1．常用方法：________________________法。2．統(tǒng)計(jì)依據(jù)：當(dāng)樣品的__________足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)________。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。3．操作：(1)設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。(2)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌株數(shù)在___________的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。4．計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的______________，V代表涂布平板時(shí)所用的________________，M代表____________。間接計(jì)數(shù)(活菌計(jì)數(shù))稀釋度活菌30～300平均菌落數(shù)稀釋液的體積稀釋倍數(shù)二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法間接計(jì)數(shù)(活菌計(jì)數(shù))稀釋度活菌3三、設(shè)置對(duì)照1．對(duì)照實(shí)驗(yàn)：是指除了______________以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。2．主要目的：排除實(shí)驗(yàn)組中______________對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。例如，為了確認(rèn)培養(yǎng)基是否被雜菌污染，需以不進(jìn)行接種的培養(yǎng)基培養(yǎng)作為空白對(duì)照。被測(cè)試條件非測(cè)試因素被測(cè)試條件非測(cè)試因素四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)1．土壤取樣：(1)取樣原因：土壤有“微生物的______________”之稱，同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量________，種類________。(2)土壤要求：富含__________，pH接近________且潮濕。(3)取樣部位：距地表約______________的土壤層。2．樣品稀釋：(1)稀釋原因：樣品的____________直接影響平板上生長(zhǎng)的____________。(2)稀釋標(biāo)準(zhǔn)：選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，保證獲得菌落數(shù)在___________，便于計(jì)數(shù)。天然培養(yǎng)基最大最多有機(jī)質(zhì)中性3～8cm稀釋程度菌落數(shù)目30～300四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)天然培養(yǎng)基最大最多有機(jī)質(zhì)中性3～8c3．微生物的培養(yǎng)與觀察：(1)培養(yǎng)：根據(jù)不同微生物的需要，控制適宜的培養(yǎng)________和培養(yǎng)時(shí)間。(2)觀察。①觀察方法：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，最后選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。②菌落的特征：包括菌落的________、________、隆起程度和________等。溫度形狀大小顏色溫度形狀大小顏色五、操作提示1．無菌操作：(1)取土樣的用具在使用前都需要__________。(2)實(shí)驗(yàn)操作均應(yīng)在__________進(jìn)行。2．做好標(biāo)記：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管比較多，為避免混淆，使用前應(yīng)標(biāo)明培養(yǎng)基的________、____________以及平板上培養(yǎng)樣品的__________等。3．制定計(jì)劃：對(duì)于耗時(shí)較長(zhǎng)的生物實(shí)驗(yàn)，要事先制定計(jì)劃，以便提高_(dá)___________。4．菌種鑒定：細(xì)菌合成的________將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的________增強(qiáng)。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入________指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，若指示劑變______，可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。滅菌火焰旁種類培養(yǎng)日期稀釋度工作效率脲酶堿性酚紅紅五、操作提示滅菌火焰旁種類培養(yǎng)日期稀釋度工作效率？思考土壤微生物種類最多、數(shù)量最大的原因是什么？提示：土壤中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量豐富，環(huán)境條件適宜等。？思考1．選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基。 ()分析：選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，固體培養(yǎng)基具有分離、鑒定作用。2．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 ()分析：統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。判斷題××1．選擇分解尿素的細(xì)菌的培養(yǎng)基為液體培養(yǎng)基。 ()判斷題3．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)目。 ()分析：由于當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落，所以統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。4．設(shè)置對(duì)照的目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。 ()5．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。 ()6．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)應(yīng)選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。 ()×√√√3．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)目。 (新知解讀新知解讀1．原理人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。2．實(shí)例從熱泉中篩選出Taq細(xì)菌。熱泉70～80℃的高溫條件淘汰了絕大多數(shù)微生物，而使耐熱的Taq細(xì)菌脫穎而出。知識(shí)點(diǎn)1篩選菌株的原理與方法知識(shí)貼士科學(xué)家從該細(xì)菌中分離到的TaqDNA聚合酶能夠忍受93℃左右的高溫。1．原理知識(shí)點(diǎn)1篩選菌株的原理與方法知識(shí)貼士3．選擇培養(yǎng)基(1)概念：在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。(2)原理：根據(jù)不同微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性不同而制備培養(yǎng)基。例如：用培養(yǎng)基選擇能分解尿素的微生物的原理培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源，而不能生長(zhǎng)、繁殖，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出能分解尿素的微生物。3．選擇培養(yǎng)基(3)方法①在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的“加入”是在培養(yǎng)成分的基礎(chǔ)上加入。②改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。例如，缺乏氮源時(shí)可以分離固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出能消除石油污染的微生物。③改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境中培養(yǎng)可以得到耐高溫的微生物。人教生物選修一專題2-課題2課件用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照是 ()A．未接種的選擇培養(yǎng)基 B．未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C．接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 D．接種了的選擇培養(yǎng)基[解析]

將菌液稀釋相同的倍數(shù)，在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目應(yīng)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照。對(duì)照遵循的原則是單一變量原則。C典例1用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對(duì)照〔變式訓(xùn)練1〕下面是某一課題將用到的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)下表回答下面的問題：編號(hào)成分含量①KH2PO41.4g②Na2HPO42.1g③MgSO4·7H2O0.2g④葡萄糖10.g⑤尿素1.0g⑥瓊脂15.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL〔變式訓(xùn)練1〕下面是某一課題將用到的培養(yǎng)基配方，請(qǐng)根據(jù)下(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物提供碳源的是__________，提供氮源的是________。(2)絕大多數(shù)微生物能利用__________，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解________。(3)分析該培養(yǎng)基的配方，該培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，又是如何進(jìn)行選擇的？__________________________________________________________________________________葡萄糖尿素葡萄糖尿素具有。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可以分離到產(chǎn)生脲酶的微生物(即分解尿素的微生物)。葡萄糖尿素葡萄糖尿素具有。以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基可[解析]

碳源是提供碳元素的物質(zhì)，氮源是提供氮元素的物質(zhì)。所以碳源是葡萄糖，氮源是尿素。絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，所以這種培養(yǎng)基對(duì)微生物有選擇作用。選擇的原則是只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。人教生物選修一專題2-課題2課件1．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法微生物生長(zhǎng)量的測(cè)定有計(jì)數(shù)法、重量法、生理指標(biāo)法等方法，一般使用計(jì)數(shù)法。計(jì)數(shù)法可分為直接計(jì)數(shù)法和間接計(jì)數(shù)法，兩者的比較如下表所示。知識(shí)點(diǎn)2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法及設(shè)置對(duì)照項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法原理利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌1．統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法知識(shí)點(diǎn)2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法及設(shè)置對(duì)照項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板培養(yǎng)基計(jì)數(shù)依據(jù)菌體本身培養(yǎng)基上的菌落數(shù)優(yōu)點(diǎn)計(jì)數(shù)方便、操作簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)的活菌缺點(diǎn)死菌、活菌都計(jì)算在內(nèi)操作較復(fù)雜，且有一定誤差計(jì)算公式每毫升原液含菌數(shù)＝(每格平均菌體數(shù)×400)÷計(jì)數(shù)室容積×稀釋倍數(shù)①注：①400是常數(shù)。每克樣品中的菌株數(shù)＝(C÷V)×M。其中，C表示某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)項(xiàng)目直接計(jì)數(shù)法間接計(jì)數(shù)法主要用具顯微鏡、細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)知識(shí)貼士(1)間接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因有兩個(gè)：①當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起繁殖時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落；②統(tǒng)計(jì)結(jié)果只是活細(xì)菌產(chǎn)生的菌落數(shù)，而不包括死細(xì)菌數(shù)目。(2)為使結(jié)果接近真實(shí)值，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；要設(shè)置重復(fù)組，取其平均值。知識(shí)貼士2．設(shè)置對(duì)照(1)對(duì)照實(shí)驗(yàn)：是指除了被測(cè)試的條件外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)。(2)主要目的：排除實(shí)驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。3．稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)(1)原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約有多少活菌。2．設(shè)置對(duì)照(2)操作設(shè)置對(duì)照組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0．1mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計(jì)算菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)、計(jì)算出菌落平均數(shù)。(2)操作用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確的是 ()A．涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B．涂布了兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是21、212和256，取平均值163D．涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、240和250，取平均值233D典例2用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)[解析]

在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)，一定要至少涂布3個(gè)平板，作為重復(fù)組，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性，所以A、B不正確。C項(xiàng)雖涂布了3個(gè)平板，但是，其中1個(gè)平板的計(jì)數(shù)結(jié)果與另兩個(gè)相差太遠(yuǎn)，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯(cuò)誤，因此，不能簡(jiǎn)單地將3個(gè)平板的計(jì)數(shù)值用來求平均值。人教生物選修一專題2-課題2課件〔變式訓(xùn)練2〕用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)就能推測(cè)出樣品中的活菌數(shù)。原因是 ()A．平板上的一個(gè)菌落就是一個(gè)細(xì)菌 B．菌落中的細(xì)菌數(shù)是固定的C．此時(shí)的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌 D．此方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)一定與活菌的實(shí)際數(shù)相同[解析]

用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，平板上的一個(gè)菌落一般來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，但偶爾也能來自兩個(gè)或以上細(xì)菌，所以此方法統(tǒng)計(jì)的菌數(shù)可能與活菌的實(shí)際數(shù)不相同。C〔變式訓(xùn)練2〕用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌數(shù)時(shí)，通過土壤取樣從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中，用無菌小鐵鏟鏟去表層土，迅速取土壤并裝入無菌信封密封↓制備培養(yǎng)基準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基，以尿素為唯一氮源制備9個(gè)平板培養(yǎng)基知識(shí)點(diǎn)3土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)過程土壤取樣從肥沃、濕潤(rùn)的土壤中，用無菌小鐵鏟鏟去表層土，迅速樣品的稀釋在火焰旁稱取土壤10g，放入盛有90mL無菌水的三角燒瓶中，振搖使土樣與水充分混合，將菌分散。制成101倍土壤稀釋液，用一支1mL無菌吸管從中吸取1mL土壤懸液注入盛有9mL無菌水試管中，吹吸三次，使充分混勻，制成102倍土壤稀釋液，以此類推制成103、104、105、106倍土壤稀釋液↓取樣涂布在上述培養(yǎng)基的9個(gè)平板底面，每三個(gè)一組分別用記號(hào)筆寫上104、105、106倍的三種稀釋液，然后用三支1mL無菌吸管分別由104、105、106倍的三管土壤稀釋液中吸取0．1mL對(duì)號(hào)放入已寫好稀釋度的平板中，用無菌涂布器在培養(yǎng)基表面輕輕地涂布均勻人教生物選修一專題2-課題2課件(如圖)(如圖)人教生物選修一專題2-課題2課件(2017·江蘇鹽城中學(xué)高二期末)下列是關(guān)于“檢測(cè)土壤中細(xì)菌總數(shù)”實(shí)驗(yàn)操作的敘述，其中錯(cuò)誤的是 ()A．用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經(jīng)高溫、高壓滅菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0．1mL，分別涂布于各組平板上C．將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組平板倒置，37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)D．確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在300以上的實(shí)驗(yàn)組平板進(jìn)行計(jì)數(shù)D典例3(2017·江蘇鹽城中學(xué)高二期末)下列是關(guān)于“檢測(cè)[解析]

用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，先經(jīng)高溫、高壓滅菌，后倒平板，A正確；測(cè)定土壤中細(xì)菌總數(shù)利用稀釋涂布平板法，即取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0．1ml，分別涂布于各組平板上，B正確；平板倒置后，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組在37℃恒溫培養(yǎng)24～48小時(shí)，C正確；確定對(duì)照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30～300的進(jìn)行記數(shù)，求其平均值，再通過計(jì)算得出土壤中細(xì)菌總數(shù)，D錯(cuò)誤。人教生物選修一專題2-課題2課件〔變式訓(xùn)練3〕在“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中，關(guān)于“選擇培養(yǎng)”步驟敘述正確的是 ()A．可以增加分解尿素的細(xì)菌的濃度B．可以減少分解尿素的細(xì)菌的濃度C．所用培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基 D．所用培養(yǎng)基是平板培養(yǎng)基[解析]

選擇培養(yǎng)可以增加分解尿素的細(xì)菌的濃度，實(shí)驗(yàn)室里用液體培養(yǎng)基來培養(yǎng)分解尿素的細(xì)菌。A〔變式訓(xùn)練3〕在“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)中指點(diǎn)迷津指點(diǎn)迷津一、選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別(規(guī)律方法)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素；用尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基可用于分離分解尿素的細(xì)菌)鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物，如用伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈現(xiàn)紫黑色)一、選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的區(qū)別(規(guī)律方法)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用在培養(yǎng)基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素的細(xì)菌，這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于 ()A．選擇培養(yǎng)基 B．固體培養(yǎng)基C．液體培養(yǎng)基 D．鑒別培養(yǎng)基[解析]

培養(yǎng)基按用途分類，分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基，按物理性質(zhì)分類，分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基能分離出以尿素為唯一氮源的細(xì)菌，故是選擇培養(yǎng)基。A典例4在培養(yǎng)基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素知識(shí)貼士不能正確區(qū)分選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)和用途，是此類問題出錯(cuò)的主要原因。知識(shí)貼士二、微生物的培養(yǎng)與分離技術(shù)微生物培養(yǎng)中所需的營(yíng)養(yǎng)及功能、培養(yǎng)基的配制原則和類型、無菌操作技術(shù)等是進(jìn)行微生物培養(yǎng)與分離必不可少的知識(shí)。1．培養(yǎng)基的制備計(jì)算→稱量→溶化→調(diào)pH→滅菌→倒平板。人教生物選修一專題2-課題2課件2．無菌技術(shù)無菌技術(shù)主要指消毒、滅菌和無菌操作。實(shí)驗(yàn)室中常用紫外線或化學(xué)藥劑消毒，如接種室的紫外線消毒及用酒精擦拭雙手消毒。滅菌的方法主要有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌，主要是針對(duì)培養(yǎng)器具、接種器具和培養(yǎng)基的滅菌。另外，還需注意操作過程中無菌環(huán)境的營(yíng)造，一是可以在滅菌的接種箱中進(jìn)行，二是在酒精燈火焰附近所形成的無菌區(qū)進(jìn)行。人教生物選修一專題2-課題2課件3．倒平板嚴(yán)格按照教材所示的操作步驟進(jìn)行。倒平板時(shí)需待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右，在酒精燈火焰附近無菌區(qū)進(jìn)行。平板冷卻凝固后，將平板倒置，使皿蓋在下、皿底在上，這樣處理可防止蒸發(fā)的水分冷卻后在皿蓋上形成水珠落在培養(yǎng)基上，造成污染等。4．平板劃線操作通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面，可得到單個(gè)分離的菌落。人教生物選修一專題2-課題2課件5．稀釋涂布平板將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋后再涂布平板，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物被分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落。6．選擇培養(yǎng)基用來分離某種特定的微生物在選擇培養(yǎng)基配制過程中要注意起選擇作用的成分，如分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基中的特定成分是尿素。人教生物選修一專題2-課題2課件富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一，主要是指利用不同微生物的生命活動(dòng)特點(diǎn)的不同，限定環(huán)境條件，使僅適應(yīng)該條件的微生物旺盛生長(zhǎng)，從而使其在群落中的數(shù)量大大增加，人們能夠更容易地從自然界中分離到所需的特定微生物。富集條件可根據(jù)所需分離的微生物的特點(diǎn)，從物理、化學(xué)、生物等多個(gè)方面進(jìn)行選擇，如溫度、pH、紫外線、壓強(qiáng)、光照、氧氣、營(yíng)養(yǎng)等。下圖描述了采用富集方法從土壤中分離能降解酚類化合物對(duì)羥基苯甲酸的微生物的實(shí)驗(yàn)過程。據(jù)圖回答問題。典例5富集培養(yǎng)是微生物學(xué)中最強(qiáng)有力的技術(shù)手段之一，主要是人教生物選修一專題2-課題2課件(1)本實(shí)驗(yàn)所需培養(yǎng)基為______________，碳源為________________。(2)實(shí)驗(yàn)原理是__________________________________________________________________________________________________________。(3)①～③重復(fù)培養(yǎng)的目的是______________________________________。(4)⑤的菌落中大部分是能降解________________的微生物。(5)⑥為________組，⑦為________組，設(shè)置⑥的目的是_________________________________________________。(6)⑤→⑥采用______________