電泳技術(shù)的臨床應(yīng)用2011-02課件

現(xiàn)代電泳技術(shù)的臨床應(yīng)用Sebia何鵬–

臨床應(yīng)用使用范圍和檢測(cè)原理電泳技術(shù)就是利用在電場(chǎng)的作用下,由于待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小,形狀等性質(zhì)的差異,使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度,從而對(duì)樣品進(jìn)行分離,鑒定或提純的技術(shù).在生化檢測(cè)中,主要用于分離各類蛋白分子.蛋白電泳檢測(cè)的不同步驟制備膠片,加樣,溫度啟動(dòng)電源,開(kāi)始電泳,染色,脫色,結(jié)果檢測(cè)常用的電泳技術(shù)濾紙電泳醋酸纖維素薄膜電泳凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳:瓊脂糖凝膠適用于蛋白質(zhì)和核酸的電泳支持介質(zhì),成本低,結(jié)果易保存.聚丙烯酰胺凝膠電泳:最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方法,特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測(cè)和測(cè)定蛋白質(zhì)分子量,一般用于科研.毛細(xì)管電泳:經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物電泳技術(shù)的醫(yī)學(xué)應(yīng)用蛋白質(zhì)電泳分析是實(shí)驗(yàn)室必備的檢測(cè)手段,可全面精確,描繪出患者蛋白質(zhì)的全貌.對(duì)疾病的早期診斷,療效觀察及預(yù)后判斷具有非常重要的臨床價(jià)值.根據(jù)使用的染料或者是底物的不同，我們可以檢測(cè)到不同類型的蛋白:

血清蛋白 脂蛋白(運(yùn)送脂類)

各種酶類 血紅蛋白正確解釋電泳結(jié)果,為臨床對(duì)疾病的判斷提供可靠參考gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,

a1抗胰蛋白酶:結(jié)合珠蛋白,

a2

巨球蛋白,

a脂蛋白,

銅藍(lán)蛋白:轉(zhuǎn)鐵蛋白,血液結(jié)合素,C3補(bǔ)體,b脂蛋白:免疫球蛋白血清蛋白電泳蛋白染色血清蛋白電泳后會(huì)呈現(xiàn)出5或者6條帶.染色后,每個(gè)條帶呈現(xiàn)出的不同程度的染色對(duì)應(yīng)著各自的蛋白濃度.如何檢測(cè)染色程度:

需要使用光密度儀.

出現(xiàn)單克隆免疫球蛋白的電泳圖譜什么情況下必須進(jìn)行電泳檢測(cè)?總蛋白異常升高或異常下降A(chǔ)/G比例變化血液沉降速度發(fā)生異常變化出現(xiàn)惡性疾病征兆在免疫球蛋白定量檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)某一種免疫球蛋白出現(xiàn)大量異常增加

雙白蛋白,或者一條寬峰,或者在白蛋白條帶出現(xiàn)附屬條帶可能是由以下原因造成:遺傳性雙白蛋暫時(shí)性的雙白蛋白血癥可能是由于藥物刺激導(dǎo)致的急性胰腺炎導(dǎo)致的雙白蛋白血癥:大量的胰酶的出現(xiàn)可以導(dǎo)致白蛋白降解白蛋白區(qū)帶雙白蛋白血癥

雙白蛋白血癥在下列情況下白蛋白會(huì)出現(xiàn)下降:

-

腎病綜合癥,蛋白流失,胃腸病:檢查尿蛋白

-淋巴細(xì)胞增生綜合征

-營(yíng)養(yǎng)不良

-肝臟功能不全

-慢性炎癥

-嚴(yán)重?zé)齻?/p>

-血液稀釋Alpha1globulins(α1球蛋白區(qū)帶)將會(huì)在下列情況下出現(xiàn)下降:

-蛋白流失

-肝功能不全

-先天性抗胰蛋白酶缺乏癥出現(xiàn)兩個(gè)條帶:

-抗胰蛋白酶的不同基因型出現(xiàn)增加:

-炎癥癥狀急性炎癥電泳圖譜溶血的標(biāo)本下列情況下Alpha2區(qū)域會(huì)出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-炎癥癥狀 -腎病綜合征 -出現(xiàn)游離輕鏈

Betaglobulins(β球蛋白區(qū)帶)在下列情況下會(huì)出現(xiàn)下降:

-肝功能不全

-C3長(zhǎng)期缺乏或者C3代謝過(guò)快

(alsoinagingsample,C3denaturation,splittedinupto 4fractions:1betweena2andb, 1onb1,

1

onb2 and1ong)

Beta球蛋白在下列情況下會(huì)出現(xiàn)增加現(xiàn)象:

-膽管阻塞

-腎病綜合征

-肝硬化

-缺鐵性貧血

-血球蛋白異常

-高脂蛋白血癥

-大量溶血

酒精性肝硬化中的β-γ

橋免疫球蛋白是機(jī)體的正常生理成分，機(jī)體保持一定水平。當(dāng)這種正常水平打破時(shí)，則屬于疾病，增多或減少則意味著免疫增殖病或免疫缺陷病。

IgG-κ、lgG-λ

IgA-κ、IgA-λ

IgM-κ、IgM-λ

IgD-κ、IgD-λ

IgE-κ、IgE-λ

Gammaglobulins(免疫球蛋白區(qū)帶)Specificwhitebloodcells(lymphocytesB)turnintoplasmocytes3Plasmocytesproduceantibodyproteins,alsocalledImmunoglobulins.4PlasmocyteImmunoglobulinBoneMarrowproduces3keybloodcells:Redbloodcells:deliverdioxygenethroughoutthebodyviacirculatorysystemsWhitebloodcells:participateinimmunesystemPlatelets:helpbloodcoagulateimmunoglobulinsareusedbytheimmunesystemtoidentifyandneutralizeforeignelementssuchasbacteriaandviruses.52NormalImmunoglobulinsNormalPlasmocytesNormalProteinogramMalignantPlasmocyteorMyelomacellProteinogramshowingMonoclonalpeakNormalImmunoglobulinBonemarrowistheflexibletissuefoundinthehollowinteriorofbones(backbone,skull,pelvis,ribcage)ClonalimmunoglobulinorMproteinofIgAκtype1NormalImmunoglobulinsecretionMonoclonalGammopathyMultipleMyelomaandMonoclonalIg單克隆增殖，是一個(gè)細(xì)胞在某一分裂階段發(fā)生突變，然后急劇分化、增殖,并大量表達(dá)某種單一的Ig,這種惡性增殖具有如下特點(diǎn):

1，均一型Ig

2，Ig含量大(也可高達(dá)10余克)

3，正常Ig成分減少(正常值以下)

4，輕鏈型比例失調(diào)(κ/λ>或<2:1)

5，出現(xiàn)相關(guān)臨床表現(xiàn)

M蛋白疾病的“M”含義是Myeloma,Macroglobulinemia,Malignantlymphoma和MonoclonalGammapathies均以“M”開(kāi)頭.M蛋白在電泳上表現(xiàn)為高而狹窄的尖峰.MonoclonalIgPolyclonalIgsPolyclonalIgsMonoclonalIgDiscoveryofamonoclonalimmunoglobulinbyserumproteinelectrophoresis多克隆免疫球蛋白的增加:

-炎癥

-肝硬化

-亞急性和慢性感染-惡性腫瘤:早期惡性腫瘤有多克隆增殖現(xiàn)象尤其淋巴瘤。

晚期惡性腫由于惡液質(zhì)出現(xiàn)，Ig反而減少

Ig異常合成-多克隆免疫球蛋白區(qū)帶血清蛋白021216－狼瘡病血清蛋白030127－酒精肝B-r橋與下列各類疾病相關(guān)的寡克隆免疫球蛋白(多個(gè)條帶):-自身免疫病-先天性免疫缺陷癥-病毒感染

(CHepatitis,HIVdisease,CMV(巨細(xì)胞病毒),EBV,…)-免疫抑制治療Ig異常合成-寡克隆免疫球蛋白區(qū)帶Oligoclonalpattern(寡克隆免疫球蛋白)血清蛋白電泳是

M蛋白(MonoclonalProtein)多克隆(polyclonalProtein)

寡克隆(OligoclonalProtein)

的首選檢測(cè)項(xiàng)目表1646例M蛋白類型分類型別例數(shù)%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重鏈病50.77輕鏈病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59雙M蛋白病81.24上海新華醫(yī)院,2005年多發(fā)性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)MM是造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,占整個(gè)惡性腫瘤的1%常見(jiàn)于中、老年人(50-70歲居多,40歲以下少見(jiàn)).以往對(duì)此病認(rèn)識(shí)不足，漏診、誤診可達(dá)到70%以上.隨著壽命的延長(zhǎng)對(duì)此病認(rèn)識(shí)的提高病例數(shù)顯著增加.MM臨床表現(xiàn)特點(diǎn)骨痛,骨骼腫塊與病理性骨折,骨質(zhì)疏松和溶骨現(xiàn)象貧血免疫功能低下,反復(fù)感染腎臟損害高鈣,高粘(血漿相對(duì)黏度6以上)高尿酸血癥表現(xiàn)MM的臨床表現(xiàn)多樣化,常常因此就診于骨科、腎臟內(nèi)科等,延誤診治多發(fā)性骨髓瘤的免疫學(xué)特征血中出現(xiàn)M蛋白,正常Ig水平明顯減低尿中出現(xiàn)M蛋白和輕鏈蛋白(BJP)骨髓中漿細(xì)胞明顯增加無(wú)免疫活性Ig導(dǎo)致免疫功能低下多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(骨盆)多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告多發(fā)性骨髓瘤病人溶骨報(bào)告(顱骨)臨床實(shí)例意義未明的單克隆免疫球蛋白疾病:BenignMC在法國(guó),在對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行檢測(cè)時(shí),會(huì)檢測(cè)到0,15%比例的單克隆免疫球蛋白攜帶者.

在老齡人群中檢測(cè)到的攜帶者比例更高(80歲以上人群).在對(duì)60到99歲人群的檢測(cè)顯示,出現(xiàn)Ig的比例從2,6%上升至19,2%.(平均值=5%)MGUSMGUS攜帶者特征:

-未出現(xiàn)臨床和影像學(xué)特征 -未出現(xiàn)不良反應(yīng),未檢測(cè)到血鈣升高,也未出現(xiàn)腎功能衰竭

-未見(jiàn)骨髓瘤的臨床特征 -單克隆免疫球蛋白<20g/l-其他免疫球蛋白都是正常的,同時(shí)在患者尿液中未檢測(cè)到本周氏蛋白 -單克隆免疫球蛋白的濃度隨著時(shí)間的推移未發(fā)生增加現(xiàn)象 -其他的免疫球蛋白的濃度也未隨時(shí)間推移而出現(xiàn)下降

在20%的情況中,MGUS將會(huì)轉(zhuǎn)化成惡性疾病(6-10years)Kylereport顯示,通過(guò)對(duì)1384名含有MGUS的患者的20–35(average:22years)年的跟蹤監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn),24%的患者最終演變成惡性的淋巴細(xì)胞增生癥(multiplemyeloma,macroglobulinemia,amyloidosis,…).從檢測(cè)到單克隆免疫球蛋白,直到作出多發(fā)性骨髓瘤的診斷報(bào)告,這段時(shí)間是不定的,從2-29年(平均是10年左右).大量報(bào)告顯示,在下列情況中,發(fā)展成為惡性淋巴細(xì)胞增生疾病的可能性很小: -單克隆免疫球蛋白: IgG<15g/L IgA<10g/L IgM<5g/L -尿蛋白中未出現(xiàn)本周氏蛋白

-其他類型的免疫球蛋白未出現(xiàn)下降寡克隆免疫球蛋白

由于藥物原因?qū)е碌拿庖呷毕? -在器官或者骨移植之后 -自身免疫病:

(類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,干燥綜合征(66%),系統(tǒng)性紅斑狼瘡….)

由于細(xì)菌或病毒感染導(dǎo)致的免疫缺陷:

-病毒:HIV(63%),EBV,CMV,viralhepatitis,… -細(xì)菌,寄生蟲感染:

(腦膜炎,腦炎,…)在一些腫瘤中:(慢性淋巴細(xì)胞性白血病CLL:29%)

在5%正常群體中(MGUS)

在多發(fā)性硬化患者中:(CSF90%)檢測(cè)結(jié)果闡述電泳的結(jié)果是以%的形式給出的,但是對(duì)于臨床診斷,結(jié)果必須要以濃度的形式給出g/L蛋白濃度出現(xiàn)異常時(shí),必須要進(jìn)行其它的補(bǔ)充檢測(cè)患者的隨訪

首次被發(fā)現(xiàn)的患者:

如果檢測(cè)到的異常M蛋白峰值不多,同時(shí)其他免疫球蛋白的含量未發(fā)生變化,也沒(méi)有臨床癥狀,懷疑可能是MGUS,

第一年每4至6個(gè)月對(duì)患者經(jīng)性隨訪,從第二年起,每年進(jìn)行一次隨訪.

已確診的患者:

如果電泳結(jié)果和先前檢測(cè)相同,利用異常峰值進(jìn)行量化以便于檢測(cè)異常M蛋白的濃度是否發(fā)生變化.

這種情況下的隨訪檢測(cè),一定要選擇相同的技術(shù)方法.

如果隨訪結(jié)果顯示出現(xiàn)異常區(qū)帶,一定要進(jìn)行免疫固定電泳確認(rèn)這些異常蛋白的成分.異常血清蛋白質(zhì)電泳圖譜的分型及其特征血清蛋白質(zhì)的圖譜類型

總蛋白Albα1α2βγ1.低蛋白血癥↓↓↓↓N↑N↓N↑2.腎病型↓↓↓↓↑↑↑不定3.肝硬化型↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑橋4.急性炎癥或急性時(shí)相反應(yīng)癥N↓N↑↑N5.慢性炎癥型

↓↑↑↑6.彌漫性肝損害型↓N↓↓↑↓↑7.彌漫寬γ球蛋白血癥型↑↓N↑↑8.M蛋白血癥型

在α-γ區(qū)帶中出現(xiàn)M蛋白峰-M區(qū)帶峰9.高α2（β）球蛋白血癥↓↑↑↑10.妊娠型（高α型）↓N↓↑↑N11.蛋白質(zhì)缺陷型個(gè)別區(qū)帶出現(xiàn)特征性缺乏免疫固定電泳

結(jié)果分析指南

在血清蛋白電泳時(shí),檢測(cè)到異常條帶的出現(xiàn),或者是某一個(gè)條帶的蛋白出現(xiàn)異常增加

電泳結(jié)果顯示為低免疫球蛋白血癥,或者免疫球蛋白定量結(jié)果顯示可能是游離輕鏈病

尿蛋白檢測(cè)結(jié)果異常(檢測(cè)到單克隆游離輕鏈),查看患者是否做過(guò)血清蛋白電泳,如果有必要需要進(jìn)行血清的免疫固定電泳

什么情況下必須要進(jìn)行免疫固定電泳檢測(cè)?加樣:同一樣品重復(fù)加樣6次2)電泳:大約9分鐘

3)電泳結(jié)束后,加不同類型抗血清:ELP:固定液G:antiserumantiIgGheavychainA:antiserumantiIgAheavychainM:antiserumantiIgMheavychainK:antiserumantikappalightchainL:antiserumantilambdalightchainincubationtime

4)終止反應(yīng),吸出多余的抗血清,烘干膠片5)清洗膠片,染色傳統(tǒng)的單克隆免疫球蛋白檢測(cè)方法-免疫固定電泳(IF)正常血清標(biāo)本IgGl單克隆免疫球蛋白(近負(fù)極端)IgGl單克隆免疫球蛋白(近正極端)出現(xiàn)在a2區(qū)域的IgAl

出現(xiàn)兩個(gè)異常蛋白帶:利用Beta巰基乙醇處理后,結(jié)果為IgA

l單克隆免疫球蛋白BME/FluidiltreatmentBME/Fluidiltreatment檢測(cè)結(jié)果顯示為3個(gè)IgAl:利用Beta巰基乙醇處理后,結(jié)果為IgAl單克隆免疫球蛋白IgM

k單克隆免疫球蛋白寡克隆免疫球蛋白IgG(k+l)雙克隆免疫球蛋白IgG

k和

IgA

k免疫固定結(jié)果顯示為單獨(dú)的

l

成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗

IgD和IgE的抗血清確認(rèn)

該結(jié)果為

l型游離輕鏈BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES免疫固定結(jié)果顯示為2個(gè)獨(dú)立的

l

成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗

IgD和IgE的抗血清確認(rèn)該結(jié)果為單克隆IgDl,并伴隨有

l游離輕鏈BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES免疫固定結(jié)果確認(rèn):IgEl單克隆免疫球蛋白免疫固定結(jié)果顯示為單獨(dú)的

l成分:需要使用抗

l游離輕鏈和/或抗

IgD和IgE的抗血清確認(rèn)特殊病例在免疫球蛋白區(qū)域檢測(cè)到異常條帶,但是免疫固定檢測(cè)結(jié)果卻為陰性在使用抗-纖維蛋白原的抗血清結(jié)果顯示為陽(yáng)性尿蛋白的電泳研究腎單位的生理結(jié)構(gòu)和各類生理蛋白1百萬(wàn)個(gè)腎單位每天過(guò)濾180升的血漿，同時(shí)產(chǎn)生大約1.5升的尿液。腎小管的廢棄物排放最后形成的尿液含有1/3的白蛋白和2/3球蛋白腎小管重新吸收白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白腎小球過(guò)濾白蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白尿蛋白:定義在生理學(xué)角度講，正常的人的尿蛋白量在50至120mg/24

h(大約在100mg/L)

主要的蛋白是白蛋白(少于30mg/L)病理上的腎功能疾?。寒?dāng)尿蛋白量大于150mg/24

h

而此時(shí)，尿蛋白的成分也是不定的。導(dǎo)致尿蛋白含量增加的原因生理上的因素:間歇性的(站立過(guò)久,正餐以后,運(yùn)動(dòng)過(guò)后,壓力之下)腎前性:高血壓,發(fā)燒,心臟或肝臟功能衰退,…

蛋白濃度升高(尿蛋白含量過(guò)高)腎性:腎小球或腎小管受到損傷(或者兩個(gè)同時(shí)受到損傷)腎后性:泌尿系統(tǒng)出現(xiàn)損傷腎前性的尿蛋白尿蛋白含量增加某一種蛋白含量出現(xiàn)異常升高，超出了腎小管對(duì)于這一蛋白的再吸收能力。原因自由輕鏈,主要是在單克隆免疫球蛋白疾病中beta2微球蛋白,淋巴組織增生綜合征溶菌酶,在一些急性髓細(xì)胞白血病血紅蛋白,在結(jié)合珠蛋白飽和后出現(xiàn)的溶血現(xiàn)象中血清粘蛋白,又稱為Alpha酸性糖蛋白，在支氣管癌患者中肌紅蛋白,在橫紋肌出現(xiàn)溶解患者中上述各類情況均可導(dǎo)致出現(xiàn)腎病

(尤其是含有自由輕鏈的本周氏尿蛋白)>67kDa<67kDa尿蛋白含量增加腎性尿蛋白分析在HYDRAGEL5PROTEINURIE

凝膠上主要的尿蛋白的電泳條帶區(qū)域分析起源于腎小管的各類蛋白(分子量<67kDa)起源于腎小球的各類蛋白(分子量>67kDa)白蛋白(分子量:67kDa)a1-微球蛋白

(MW:33kDa)游離輕鏈

(MW25kDa)轉(zhuǎn)鐵蛋白

(MW:80kDa)Cystatin(MW:11kDda)b2-微球蛋白

(MW:12kDa)溶菌酶

(MW:15kDa)視黃醇結(jié)合蛋白(MW:21kDa)游離輕鏈的二聚體(MW50kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)結(jié)合珠蛋白加樣位置a2-巨球蛋白

(MW:900kDa)注:(CystatinC),血清半胱氨酸蛋白酶抑制劑C腎小球過(guò)濾小分子蛋白,分子量小于67

kDa,被過(guò)濾到尿液中.其他決定各種蛋白被過(guò)濾的因素:分析形狀,帶電量,血漿濃度.還有一些血液動(dòng)力學(xué)因素可影響蛋白的過(guò)濾.腎小球損傷經(jīng)常出現(xiàn)于成人及兒童患者中,表現(xiàn)為尿蛋白含量出現(xiàn)增加現(xiàn)象

(大于1

g/24-h)原因糖尿病感染性損傷(細(xì)菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,單核白血球增多癥

,…)其他系統(tǒng)性疾病(自動(dòng)免疫系統(tǒng),癌癥,…)中毒現(xiàn)象(重金屬,藥物中毒,…)此時(shí),我們可以在尿蛋白中發(fā)現(xiàn)白蛋白和其他大分子量蛋白(大于67

kDa)。臨床示例腎小管的再次吸收功能在腎小球中被過(guò)濾掉的小分子蛋白，分子量小于67

kDa,將會(huì)在腎小管內(nèi)被重新吸收(內(nèi)吞作用).

99%的在腎小球內(nèi)被過(guò)濾的蛋白,都將會(huì)被重新吸收利用.

例如,

18

g/24-h白蛋白將會(huì)被過(guò)濾掉;

30

mg/L

白蛋白在人的尿液中被發(fā)現(xiàn).

腎小管損傷腎小管損傷將會(huì)改變其對(duì)小蛋白分子的重新吸收能力

(小于67

kDa的蛋白)通常是暫時(shí)性的,并且少于0.5

g/24-hours原因遺傳原因(Fanconi’ssyndrome)免疫球蛋白單克隆擴(kuò)增(骨髓瘤)藥物作用(抗癌藥物)中毒現(xiàn)象(重金屬)白蛋白(<30%)及其它小分子蛋白(小于67

kDa)都將會(huì)在尿液中被找到.>67kDa<67kDa腎小管損傷<67kDa>67kDa>67kDa<67kDa混合性損傷臨床示例腎小球、腎小管均受損傷。臨床示例5PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa150KDa66KDa輕鏈病多表現(xiàn)為腎臟損害，極易誤診為慢性腎炎。我們認(rèn)為輕鏈有3種形式出現(xiàn)在血清或尿中；一是正常的輕鏈過(guò)剩（Kappa和Lambda同時(shí)出現(xiàn)），多出現(xiàn)于慢性肝病，紅斑狼瘡等多克隆增殖中。二是伴隨輕鏈。三是單一輕鏈，血和尿中只出現(xiàn)單一增殖的大量輕鏈。BenceJonesprotein漿細(xì)胞增生癥影響血液中出現(xiàn)游離輕鏈尿液中出現(xiàn)起因結(jié)果腎小管損傷淀粉樣病變輕鏈沉淀病骨髓瘤巨球蛋白血癥CLL慢性白血病MGUS.....HenryBenceJones于1844年在一個(gè)骨髓瘤患者尿中發(fā)現(xiàn)的一種具有特殊凝溶性質(zhì)的蛋白該種蛋白40－60℃發(fā)生沉淀，加熱煮沸時(shí)溶解，冷卻后又沉淀。后被證明是單克隆的免疫球蛋白輕鏈二聚體。大多數(shù)骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白輕鏈單體（κ鏈）2－4小時(shí)清除，腎小球?yàn)V過(guò)率為40％；輕鏈二聚體（λ鏈）3－6小時(shí)清除，腎小球?yàn)V過(guò)率為20％；多聚體的清除速率降低；腎功能衰竭的MM患者完全清除需2-3天。正常免疫球蛋白的合成

18分鐘10分鐘漿細(xì)胞一條重鏈一條輕鏈組合一分子免疫球蛋白過(guò)剩輕鏈腎小球?yàn)V過(guò)10%在腎小管分解代謝80%重吸收10%隨尿排出BJP檢測(cè)方法熱沉淀反應(yīng)法：根據(jù)其凝溶特性設(shè)計(jì)的定性分析方法，靈敏度低。免疫固定電泳法：結(jié)合免疫沉淀技術(shù)的電泳法，特異性好。免疫化學(xué)法：免疫比濁法，可對(duì)血清游離輕鏈進(jìn)行定量，靈敏度高。尿免疫固定電泳漿細(xì)胞病的診斷和治療監(jiān)測(cè)某些情況下，特別是對(duì)輕鏈型的M蛋白，比血清免疫固定電泳更加敏感。因?yàn)橛坞x輕鏈的分子量比較?。?5－50KDa）更容易通過(guò)腎臟清除進(jìn)入尿液中，從而在尿中被檢測(cè)到。下列參數(shù)會(huì)影響本周氏蛋白的毒性:等電點(diǎn)(pI):

-WhenthepIis>6,theBenceJoneswillinteractstronglywiththeTamm-Horsfallprotein.

-IfthepIislow,therewillbelittleinteractionwithTHP.輕鏈形成的聚合體:-(polymerscanreachaMWof900kD).

輕鏈的初級(jí)結(jié)構(gòu):

-Theprimarystructureofthefreelightchainsisalsoinvolvedinthetoxicity.Thisisduetothevariableregionofthelightchain.病例一病人甲，女，29歲，蛋白尿腎內(nèi)科就診。尿蛋白電泳：100％球性蛋白；尿總輕鏈定量：κ5.95mg/dl(0－5.10)

λ70.10mg/dl（0-5.0）；血清蛋白電泳和免疫固定電泳未見(jiàn)單克隆蛋白；尿本周蛋白電泳可見(jiàn)輕鏈λ型M蛋白病例一血清免疫固定電泳尿本周蛋白電泳病例二病人丙，男，53歲，多發(fā)性骨髓瘤治療中血清免疫固定電泳：M蛋白陰性尿總輕鏈定量：κ6.29mg/dl(0-5.10)

λ<5.00mg/dl(0-5.00)尿本周蛋白電泳：M蛋白為輕鏈κ型病例二血清免疫固定電泳尿本周蛋白電泳下列參數(shù)會(huì)影響本周氏蛋白的毒性:等電點(diǎn)(pI):

-WhenthepIis>6,theBenceJoneswillinteractstronglywiththeTamm-Horsfallprotein.

-IfthepIislow,therewillbelittleinteractionwithTHP.輕鏈形成的聚合體:-(polymerscanreachaMWof900kD).

輕鏈的初級(jí)結(jié)構(gòu):

-Theprimarystructureofthefreelightchainsisalsoinvolvedinthetoxicity.Thisisduetothevariableregionofthelightchain.下列參數(shù)會(huì)影響本周氏蛋白的毒性:等電點(diǎn)(pI):

-WhenthepIis>6,theBenceJoneswillinteractstronglywiththeTamm-Horsfallprotein.

-IfthepIislow,therewillbelittleinteractionwithTHP.輕鏈形成的聚合體:-(polymerscanreachaMWof900kD).

輕鏈的初級(jí)結(jié)構(gòu):

-Theprimarystructureofthefreelightchainsisalsoinvolvedinthetoxicity.Thisisduetothevariableregionofthelightchain.尿液的檢測(cè)原則當(dāng)血液中檢測(cè)到M蛋白時(shí): -進(jìn)行24H尿蛋白檢測(cè) -電泳+IF/BJ -對(duì)異常峰進(jìn)行鑒定 -對(duì)患者進(jìn)行隨訪,目的是確認(rèn)藥后療效和腎臟損傷程度重點(diǎn):對(duì)患者定期隨訪檢測(cè),便于及時(shí)掌握患者腎臟損傷程度

總結(jié)電泳技術(shù)在同工酶分析方面的應(yīng)用TheAssayandtheClinicalApplicationofIsoenzymes同工酶的定義同工酶是以多種分子形式存在于機(jī)體的催化功能相同分子結(jié)構(gòu)不同檢測(cè)同工酶的目的檢測(cè)同工酶活力比單測(cè)定酶的總活力更具有臟器特異性和高靈敏性等優(yōu)點(diǎn),因而提高了臨床診斷價(jià)值早期診斷某些疾病,陽(yáng)性率高,特異性強(qiáng)可以估計(jì)病情嚴(yán)重性和判斷預(yù)后目前廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)中的同工酶乳酸脫氫酶同工酶(Lactatedehydrogenase,LDH)肌酸激酶同工酶(Creatinekinase,CK)堿性磷酸酶同工酶(Alkalinephosphatase,ALP)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartatetransaminase,AST)γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(γ-glutamyltransferase,GGT)-淀粉酶同工酶(

-Amylase,AMY)同工酶的分析方法由于同工酶的一級(jí)結(jié)構(gòu)(氨基酸序列)及高級(jí)結(jié)構(gòu)(構(gòu)象)的不同,因此,一種酶的各個(gè)同工酶在化學(xué),物理化學(xué),生物化學(xué)等方面的性質(zhì)也就有所差異,這些差異就提供了分析和鑒定同工酶的理論基礎(chǔ)在研究同工酶的所有方法中，電泳法的使用最為廣泛。因?yàn)榇朔ê?jiǎn)便、快速、分離效果良好，并且一般不會(huì)破壞酶的天然狀態(tài)乳酸脫氫酶同工酶(LDH)乳酸脫氫酶是能催化乳酸脫氫生成丙酮酸的酶每