血庫(kù)操作規(guī)程課件

血庫(kù)操作規(guī)程朱士偉2015-3-26目錄ABO血型鑒定（玻片法、試管法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 5RhD血型鑒定（玻片法、試管法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 9ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝膠卡式法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 11交叉配血試驗(yàn)（鹽水法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 15凝聚胺交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 17交叉配血試驗(yàn)（微柱凝膠卡式法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 19新生兒溶血?。℉DN）血型血清學(xué)檢查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 22不規(guī)則抗體篩選標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 26孕婦血清中紅細(xì)胞血型抗體效價(jià)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 29醫(yī)用低速離心機(jī)（X5型）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 31低速離心機(jī)（160C型）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 33HHW型電熱恒溫水浴箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 35HYC-360型醫(yī)用冷藏箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 36200型血液冷藏箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 38低溫保存箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 40FYQ型免疫微柱孵育器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 42TD-3A血型血清學(xué)用離心機(jī)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 43WGH-I數(shù)碼恒溫解凍箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 44HXC-608型醫(yī)用血液冷藏箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 45PH-A恒溫?cái)[動(dòng)保存箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 47LX-18X血小板運(yùn)輸箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 48GZR-II型高頻熱合器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 50XS生物顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 51室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 52血庫(kù)室間質(zhì)評(píng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 60血庫(kù)配制自備試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 63血標(biāo)本接收及處理標(biāo)準(zhǔn)操作程序 65血液入庫(kù)操作規(guī)程 66血液儲(chǔ)存操作規(guī)程 67血液出庫(kù)操作規(guī)程 69病毒滅活冰凍血漿、冷沉淀凝血因子復(fù)溶操作規(guī)程 70血液報(bào)廢操作規(guī)程 71實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療廢棄物處理操作規(guī)程 72

5、樣本采集及處理用一次性EDTA-K2真空采血管抽取靜脈血1ml，將標(biāo)示有患者姓名、性別、年齡、住院號(hào)、病室/門急診、床號(hào)等信息的標(biāo)簽貼在標(biāo)本管上，由醫(yī)護(hù)人員或?qū)ｉT人員將患者標(biāo)本送交血庫(kù)。6、操作步驟6.1玻片法（正定型）6.1.1分型血清l滴于鑒定卡內(nèi)，再各加受檢者5％紅細(xì)胞懸液1滴，混和。6.1.2將鑒定卡不斷輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，使血清與細(xì)胞充分混勻，連續(xù)約15min，以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應(yīng)。6.2試管法（正定型）6.2.1取潔凈小試管2支，分別標(biāo)明抗A，抗B，用滴管分別加抗A、抗B分型血清各1滴于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5%紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混合。6.2.2反定型：另取潔凈小試管3支，分別標(biāo)明A，B和O細(xì)胞。用滴管分別加入受檢者血清1滴于試管底部，再分別以滴管加入A，B和O型5%試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混合。立即以1000r/min離心1min。6.2.3將試管輕輕搖動(dòng)，使沉于管底的紅細(xì)胞浮起，先以肉眼觀察有無凝集（或溶血）現(xiàn)象。如肉眼不見凝集，應(yīng)將反應(yīng)物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。7、結(jié)果判斷：凝集為陽(yáng)性（+），不凝集為陰性（-）8、干擾：8.1分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應(yīng)放冰箱保存，以免細(xì)菌污染。8.2試劑紅細(xì)胞以3個(gè)健康者同型新鮮紅細(xì)胞混和，用生理鹽水洗滌1次，以除去存在于紅細(xì)胞中的抗體及可溶性抗原。8.3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。8.4操作方法應(yīng)按規(guī)定，一般應(yīng)先加血清，然后再加紅細(xì)胞懸液，以便容易核實(shí)是否漏加血清。8.5按理IgM抗-A和抗-B與相應(yīng)紅細(xì)胞的反應(yīng)溫度以4℃為最強(qiáng)，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫（20～24℃）內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37℃可使反應(yīng)減弱。8.6離心時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短，速度不宜過快或過慢，以防止假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。8.7觀察時(shí)應(yīng)注意紅細(xì)胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。8.8判斷結(jié)果后應(yīng)仔細(xì)核對(duì)、記錄，避免筆誤。9、凝強(qiáng)度判斷:觀察結(jié)果應(yīng)仔細(xì)，首先注意有無凝集，再按下述情況說明凝集強(qiáng)度：9.14＋：紅細(xì)胞凝聚成一大塊，血清透明清晰。9.23＋：紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。9.32＋：紅細(xì)胞凝集分散成多個(gè)小塊，可見游離紅細(xì)胞。9.41＋：肉眼可見大顆粒，周圍有較多紅細(xì)胞。9.5±：鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多紅細(xì)胞。9.6混合凝集視場(chǎng)（MF,mixedfield）：鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集，大多數(shù)紅細(xì)胞分散分布為MF。陰性（－）：鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。ABO血型正反定型及RhD血型（微柱凝膠卡式法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4.2原理：本試驗(yàn)采用排阻層析原理，即在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一定離心條件下，該復(fù)合物不能通過凝膠間隙而浮于膠表面或懸于膠中；如無相應(yīng)抗體結(jié)合，則不能形成紅細(xì)胞免疫復(fù)合物，在一定離心條件下，分散的紅細(xì)胞可以通過凝膠間隙沉于微柱腔底部。ABO血型基礎(chǔ)血型 抗原 與抗血清反應(yīng) 與A1，B細(xì)胞反應(yīng) 抗-A 抗-B 抗-A,B A1 BA A ++++ 0 ++++ 0 +/++++B B 0 ++++ ++++ +/++++ 0AB AB ++++ ++++ ++++ 0 0O H 0 0 0 +/++++ +/++++8、操作程序：8.1工作準(zhǔn)備：8.1.1將0.8%A、B型試劑紅細(xì)胞懸液室溫平衡。準(zhǔn)備樣本，標(biāo)記卡。8.1.20.8%樣本紅細(xì)胞制備：將8μl壓積紅細(xì)胞加到1ml生理鹽水中充分混勻。8.1.3將50μlA1、B標(biāo)準(zhǔn)反定細(xì)胞加入血型卡的第5-6管中，將待檢者血漿或血清50μl加到血型卡的第5-6管中。將0.8%樣本紅細(xì)胞分別加入到血型卡的第1-4管中，各50μl。8.1.4將血型卡放入血型血清學(xué)專用離心機(jī)離心5分鐘后，判斷結(jié)果，并作好記錄。醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床用血管理辦法4+ 3+ 2+ 1+ +/- - 溶血雙群12.8質(zhì)控（ctl）為陽(yáng)性時(shí)，請(qǐng)先用生理鹽水洗細(xì)胞，再做血型。12.9嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)程序操作可檢出弱抗原，血型亞型。12.10某些藥物，疾病可導(dǎo)致弱陽(yáng)性及正反定型不符。12.11細(xì)菌及異常血清蛋白可影響結(jié)果。12.12禁用嚴(yán)重溶血標(biāo)本，它會(huì)強(qiáng)烈干擾結(jié)果的判讀。嚴(yán)禁使用非抗凝血標(biāo)本配制紅細(xì)胞懸液，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。12.13被酶處理過的紅細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生非特異性凝集，禁用被污染的標(biāo)本和材料。12.14卡配套的專用離心機(jī)，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確。交叉配血試驗(yàn)（鹽水法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4.2原理：天然類血型抗體與對(duì)應(yīng)紅細(xì)胞抗原相遇，在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)。通過離心，觀察受血者血清與供血者紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者清之間有無凝集現(xiàn)象，判斷供血、受血者之間有無ABO血型不合的情況。5、樣本采集及處理血樣本為血漿（EDTA-K2抗凝）。抽取受血者靜脈血3~4ml，3000轉(zhuǎn)/分離心2分鐘，分離出血漿，并將紅細(xì)胞配成2%鹽水懸液。將供血者血樣以同樣方法分離血清（血漿），并配制2%紅細(xì)胞懸液。配血所用受血者血樣必需是輸血前3天內(nèi)的。6、操作步驟：6.1取潔凈小試管2支，1支標(biāo)明受血者血清（PS）+供血者細(xì)胞（DC）；另1支標(biāo)明供血清（DS）+受血者細(xì)胞（PC）。6.2按標(biāo)記主側(cè)管放受血者血清1滴，加供血者紅細(xì)胞懸液1滴。次側(cè)管放供血者血清1滴，加受血者紅細(xì)胞懸液1滴，混勻，以1000r/min離心1min，輕輕側(cè)動(dòng)試管，觀察結(jié)果。6.3觀察結(jié)果：先觀察試管上層液有無溶血，再斜持試管輕輕側(cè)動(dòng)或輕輕彈動(dòng)，觀察管底反應(yīng)物有無凝集（必要時(shí)用顯微鏡觀察）。冬季室溫較低，應(yīng)將試管保溫，以防冷凝集素引起的凝集反應(yīng)。7、結(jié)果判斷：ABO同型配血，主側(cè)和次側(cè)均無溶血、無凝集表示無輸血禁忌，可以輸血。異型配血時(shí)，主測(cè)無凝集，次測(cè)凝集，無溶血，可以輸給少量。輸異型血時(shí)，如次測(cè)不凝集，不可以輸血，應(yīng)重新復(fù)查血型或追查其原因。凝聚胺交叉配血試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程4.2原理：針對(duì)不規(guī)則抗體的檢出及鑒定多采用紅細(xì)胞的凝聚反應(yīng)試驗(yàn)，而凝聚反應(yīng)試驗(yàn)的成效則與分布紅細(xì)胞表面之電荷以及抗體的親和性息息相關(guān)。凝聚胺法是利用低離子介質(zhì)（LIM）來降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，進(jìn)而減少紅細(xì)胞之間距，以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清（血漿）中的抗體發(fā)生特異性結(jié)合；接著加入凝聚胺（polybrene）此種多價(jià)陽(yáng)離子聚合物來中和紅細(xì)胞上的陰性電荷，使細(xì)胞間發(fā)生非特異性凝聚；最后加入重懸液，使之中和由凝聚胺所引起之非特異凝聚，倘若沒有凝聚發(fā)生，則判定為陰性；若有凝集，則得知存在特殊性之抗原抗體反應(yīng)，則判定為陽(yáng)性。6、試劑：臺(tái)灣貝索的試劑盒：1)低離子溶液（LIM）2)聚凝胺溶液（POLYBRENE）3)懸浮液（RESUSPENDING）7、操作步驟7.1取試管兩支,分別標(biāo)明主次側(cè)管,主側(cè)管加入受血者血清兩滴,再加入2~5%獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液1滴,次側(cè)管反之。7.2每支試管中加入0.7mlLIM液,混勻;再各加入2滴POLYBRENE液,混勻。7.33400轉(zhuǎn)離心10秒，棄上清液，不要瀝干，讓管底殘留約0.1ml液體。7.4輕搖試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無凝集，若無凝集則必須重作。7.5加2滴resuspeneing液，輕搖試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。10、注意事項(xiàng)10.1可以用含EDTA之血漿代替血清使用。10.2若病人血清含肝素多，如洗腎患者，則應(yīng)加入雙倍量的Polybrene液和肝素。10.3試劑使用前，應(yīng)恢復(fù)室溫再做。10.4在冬天氣溫極低的情況下，操作交叉配血試驗(yàn)，由于某些病人血清可能含有冷凝集素等因素而導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果出現(xiàn)。若有懷疑，建議在最后滴加RESUSPENDING液時(shí)將試管立即置于370C水浴中,輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)試管混合,并在30秒內(nèi)觀察結(jié)果。0.8%-1%樣本紅細(xì)胞制備：加20μl樣本壓積紅細(xì)胞懸浮于2ml0.9%的生理鹽水中。紅細(xì)胞懸液的配制懸液濃度（%） 壓積紅細(xì)胞（滴） 鹽水（滴）2

12ml（40）510.8ml（16）1010.4ml（8）201