基因毒性雜質(zhì)優(yōu)質(zhì)推薦課件

基因毒性雜質(zhì)基因毒性雜質(zhì)1一、藥品雜質(zhì)研究評估策略二、痕量雜質(zhì)定量分析方法的建立提

綱三、案例分析與討論四、未知雜質(zhì)分離鑒定案例分析一、藥品雜質(zhì)研究評估策略二、痕量雜質(zhì)定量分析方法的建立2一、藥品雜質(zhì)研究評估策略1.藥品雜質(zhì)研究的法規(guī)依據(jù)2.藥品雜質(zhì)評估一般步驟3.藥品雜質(zhì)來源途徑分析4.藥品雜質(zhì)毒性判別方法5.藥品雜質(zhì)研究限度策略6.藥品雜質(zhì)風(fēng)險評估的分析方法建立策略一、藥品雜質(zhì)研究評估策略36雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效，甚至對人體的健康有害的物質(zhì)產(chǎn)品質(zhì)量重點關(guān)注雜質(zhì)：工藝雜質(zhì)、

降解雜質(zhì)安全性重點關(guān)注高毒性雜質(zhì)：致癌、致突變類雜雜質(zhì)中國藥典、美國藥典、歐洲藥典、日本藥典等各國藥典ICH

Q3A(R2):

新型原料藥中的雜質(zhì)問題

(2006.10)ICH

Q3B(R2):

新型藥品中的雜質(zhì)問題

(2006.06)ICH

Q3C(R6):雜質(zhì)：殘留溶劑的指導(dǎo)原則

(2016.10)ICH

Q3D:元素雜質(zhì)的指導(dǎo)原則

(2014.12)ICH

Q11:原料藥開發(fā)和生產(chǎn)（化學(xué)實體和生物技術(shù)生物實體藥物）(2012.05)ICH

M7(R1):評估和控制藥物中DNA

反應(yīng)性（致突變）雜質(zhì)以限制潛在的致癌風(fēng)險

(2017.03)化學(xué)藥品注射劑與包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（塑料、玻璃、彈性體密封件）雜質(zhì)研究相關(guān)法規(guī)1.藥品雜質(zhì)研究的法規(guī)依據(jù)重點關(guān)注：法規(guī)適用范圍6雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效，42.藥品雜質(zhì)評估一般步驟①雜質(zhì)引入方式③限度制定已有研究的文獻報道警示結(jié)構(gòu)提示計算機模擬毒性評估體外點突變和染色體畸變試驗動物毒性評估起始物料及其雜質(zhì)溶劑及其雜質(zhì)中間體反應(yīng)副產(chǎn)物輔料雜質(zhì)降解雜質(zhì)生產(chǎn)設(shè)備引入包裝材料引入環(huán)境污染引入一般雜質(zhì)致癌致畸雜質(zhì)PDE控制（存在報道）PDE控制

（存在報道）TTC控制ICHQ3

A/B/C/D②雜質(zhì)毒性分類判定致癌、致突變2.藥品雜質(zhì)評估一般步驟①③已有研究的文獻報道起始物料及其雜5關(guān)于PDE法與TTC法PDE法適用于有閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)；已有證據(jù)表明，該物質(zhì)只有在超過一定限度時才會產(chǎn)生遺傳毒性。雜質(zhì)安全性限度的確定可以參照殘留溶劑限度的計算方法，根據(jù)相關(guān)動物的無可見效應(yīng)劑量（No-ObservedEffectLevel）計算其可接受的日暴露量（PermissibleDailyExposure）,再根據(jù)藥品的最大日劑量計算出雜質(zhì)的接受限度。關(guān)于PDE法與TTC法PDE法6關(guān)于PDE法與TTC法TTC法無閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)；引入了毒理學(xué)關(guān)注的閾值（ThresholdofToxicologicalConcern）。TTC是在接受患者終生用藥的癌癥發(fā)生概率不超過10萬分之一的基礎(chǔ)上，從高濃度下進行的致癌性實驗數(shù)據(jù)線性外推倒極低濃度得到的一個理論值。對于無閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)，如果每日攝入量低于1.5ug，那么患者因服藥導(dǎo)致癌癥發(fā)生的額外風(fēng)險可以忽略不記。關(guān)于PDE法與TTC法TTC法78按屬性有機雜質(zhì)無機雜質(zhì)按來源工藝雜質(zhì)降解雜質(zhì)3.藥品雜質(zhì)來源途徑分析路線1路線2路線3溶劑1，催化劑A+B C(A’) 時間、溫度、pH… (C’)SI

溶劑雜質(zhì)溶劑2，試劑RI

試劑雜質(zhì)DS(DS’)(D1,D2…)(BP1,BP2…)輔料制劑(D3,D4,E11,E12,…)容器中的浸出物A，B=起始物料C =中間體R =試劑/催化劑DS =藥用輔料A’ =潛在的起始物料雜質(zhì)產(chǎn)生C’和DS’BP =反應(yīng)副產(chǎn)物D =降解產(chǎn)物SIRIIE=溶劑雜質(zhì)=試劑雜質(zhì)=輔料雜質(zhì)EI

輔料雜質(zhì)8按屬性有機雜質(zhì)無機雜質(zhì)按來源工藝雜質(zhì)降解雜質(zhì)3.藥品雜質(zhì)來89藥品雜質(zhì)來源途徑分析-容器中的浸出物來源9藥品雜質(zhì)來源途徑分析-容器中的浸出物來源910藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源常見報道高毒性雜質(zhì)具有警示結(jié)構(gòu)雜質(zhì)10藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源常見報道高毒性雜質(zhì)1011藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源毒理學(xué)實驗毒理學(xué)計算軟件各類毒理學(xué)數(shù)據(jù)庫已有文獻報道獲取TD50、NOEL、ADI、PMTDINOEL值與致癌致畸沒有必然聯(lián)系查詢的毒性研究文獻全面性以及毒性實驗數(shù)據(jù)的解讀需要專家的確認(rèn)TheCarcinogenicPotencyDatabase

(CPDB)聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織食品添加劑專家委員會評價（JECFA）加利福尼亞州65號提案(安全飲用水和有毒物質(zhì)強制法令)歐洲化學(xué)品管理局（ECHA）11藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源毒理學(xué)實驗TheCarci1112常見物質(zhì)的PDE數(shù)值舉例在檢索劑量數(shù)據(jù)前需要全面檢索該物質(zhì)是否有致癌致畸性，例如氯乙酸CPDB數(shù)據(jù)TD50顯示陰性鹽酸鹽的藥物在重結(jié)晶過程中的接觸醇類容易產(chǎn)生氯代烷烴，單一鹵代物在M7中有36ug/day指導(dǎo)規(guī)則關(guān)注環(huán)氧丙醇、環(huán)氧氯丙烷、3-氯-1,2-丙二醇三者之間的轉(zhuǎn)化關(guān)系毒性數(shù)據(jù)會被不斷的更新，更多的研究數(shù)據(jù)會被不斷的上傳NameCASPDE(ug/day)Note氯甲烷74-87-31361ICH

M7氯乙烷75-00-31810ICH

M7氯異丙烷75-29-655500ECHA氯乙酸79-11-83000ECHA/CPDB甲醛50-00-01.35or

10000CPDB/ICH

M7乙醛75-07-0153CPDB丙二醛542-78-9122CPDB（鈉鹽）環(huán)氧丙醇556-52-54ICH

M7環(huán)氧氯丙烷106-89-82.96CPDB（TD50）3-氯-1,2-丙二醇96-24-2PMTDI

：4ug/kg/dayWHO/FAO1,3-二氯-2-丙醇96-23-110NTP12常見物質(zhì)的PDE數(shù)值舉例在檢索劑量數(shù)據(jù)前需要全面檢索該物1213最大日劑量報告限度鑒定限度界定限度≤2g0.05%0.10%或1.0mg（取最小值）0.15%或1.0mg（取最小值）>2g0.03%0.05%0.05%報告限度最大日劑量≤1g>1g限

度0.1%0.05%最大日劑量<1mg1～10mg>10mg

～2g>2g鑒定限度限

度1.0%或5ug(取最小值)0.5%或20ug(取最小值)0.2%或2mg(取最小值)0.10%最大日劑量<10mg10～100mg>100mg～2g>2g界定限度限

度1.0%或50ug

(取最小值)0.5%或200ug(取最小值)0.2%或3mg(取最小值)0.15%原料藥Q3A藥物雜質(zhì)的控制限度計算（）制劑Q3B新藥與仿制藥研究策略有顯著差異限度=PDE/日最大劑量PDE=TD50*體重/50000PDE=NOEL*體重/(F1*F2*F3*F4*F5)限度=TTC/日最大劑量由ppm推算NOEL

（ICH

Q3C）由LD50推算NOEL其他ICHQ3&M713最大日劑量報告限度鑒定限度界定限度≤2g0.05%0.11314PDE法計算限度實例(以三乙胺濃度限度計算為例)

（錯誤案例解析）公式1.

NOEL=LD50×70/2000（該公式來源于EMEA關(guān)于清潔驗證的指導(dǎo)原則）公式解釋：NOEL（NOAEL）數(shù)據(jù)如果能直接查到就不需要計算了，直接進入到第2個公式；其中60是指的人體平均體重為60Kg；2000是一個安全系數(shù)。查詢美國TOXNET數(shù)據(jù)庫，大鼠經(jīng)口的LD50=460mg/Kg，則NOEL=460×70/2000=16.1mg/Kg/day

（錯誤推算）PDE=NOEL（mg/Kg/day）×Weight

Adjustment（Kg）/(F1×F2×F3×F4×F5)PDE=16.1

mg/Kg/day×50Kg/(5×10×5×1×1)=3.22mg/day濃度限度（％）＝PDE（mg/day）/（1000×dose（g/day））×100％對于原料藥而言，dose均定為10g/day濃度限度（％）=3.22/(1000×10)

×100％=0.0322%（322ppm）F1：種屬之間的換算系數(shù)，代表由物種差異推導(dǎo)的變異系數(shù)，與體表面積相關(guān)F1=5:從大鼠劑量推斷人用劑量的系數(shù)；F1=12:從小鼠劑量推斷人用劑量的系數(shù)F1=2:從狗劑量推斷人用劑量的系數(shù)；F1=2.5:從兔劑量推斷人用劑量的系數(shù)F1=3:從猴子劑量推斷人用劑量的系數(shù)；F1=10:從其他動物劑量推斷人用劑量的系數(shù)對于三乙胺，上述LD50是以大鼠為試驗得來的數(shù)據(jù)，所以F1=5。F2：代表個體間的變異系數(shù)，其值為F2=10；F3：為短期接觸急性毒性研究的可變系數(shù)：F3=1，研究時間至少為動物壽命的一半（鼠、兔1年，貓、狗、猴7年）F3=1，器官形成的整個過程的生殖研究F3=2，對嚙齒類動物６個月研究或非嚙齒類動物3-5年的研究F3=5，對嚙齒類動物３個月研究或非嚙齒類動物２年的研究F3=10，更短時間的研究。在所有情況下，對研究時間介于上述時間點之間的研究，應(yīng)用較大的系數(shù)，如對嚙齒類動物９個月毒性研究，其系數(shù)用２。以上大鼠經(jīng)口的LD50值為急毒數(shù)據(jù)，根據(jù)歐盟數(shù)據(jù)經(jīng)驗，這個研究時間在3-6個月之間，因此，F(xiàn)3=5。F4：產(chǎn)生嚴(yán)重毒性情況的系數(shù)，如非遺傳致癌毒性、神經(jīng)毒性或致畸性，研究生殖毒性時，用以下系數(shù)：F4=1

與母體毒性有關(guān)的胎兒毒性;

F4=５

無母體毒性的胎兒毒性F4=５

受母體毒性影響的致畸反應(yīng);

F4=10

無母體毒性影響的致畸反應(yīng)因為三乙胺為非嚴(yán)重毒性，所以這里F4=1。F5：一個可變系數(shù)，用在無毒性反應(yīng)的劑量（NOEL）值時F5=1foraNOEL；F5=1-5foraNOAEL；F5=5-10foraLOEL；F5=10foraLowest-observed-adverse-effectlevel

(LOAEL)因為NOEL已經(jīng)確定，所以這里F5=1。當(dāng)研究沒有區(qū)分NOAEL和NOEL，且依據(jù)確定的PDE值選擇劑量時毒性不被認(rèn)為是“副作用”，則使用F5等于1，NOAEL用于多數(shù)元素的口服PDE值設(shè)定。三乙胺在ICH

Q

3C中屬于三類溶劑，限度：

0.514PDE法計算限度實例(以三乙胺濃度限度計算為例)（錯誤1415由LD50推算PDE值建議《原料藥工廠中清潔驗證指南》一文中的NOEL

的單位是mg/天，而不是上文公式中的mg/kg/天LD50計算NOEL的公式：NOEL=LD50×70/2000，公式中的70是歐洲人的評價體重如果需要用LD50計算NOEL用于計算PDE，推薦公式應(yīng)該是NOEL=LD50/2000

（見參考文獻）不推薦在基因毒物質(zhì)研究中使用推薦在包材研究的劑量計算中使用參考文獻：

D.W.

Layton;B.J.

Mallon;D.H.

Rosenblatt;M.J.

Small

Deriving

allowable

daily

intakes

for

systemic

toxicants

lacking

chronic

toxicity

data.RegulatoryToxicology&Pharmacology,1987,7(1)

:96-11215由LD50推算PDE值建議《原料藥工廠中清潔驗證指南》一15藥品雜質(zhì)引入風(fēng)險評估常見已知雜質(zhì)引入途徑起始物料及已知雜質(zhì)中間體試劑&溶劑&催化劑反應(yīng)副產(chǎn)物、降解雜質(zhì)常見未知雜質(zhì)引入途徑起始物料引入未知雜質(zhì)、起始物料雜質(zhì)產(chǎn)生的雜質(zhì)、生產(chǎn)設(shè)備引入的雜質(zhì)包材浸出物雜質(zhì)環(huán)境引入雜質(zhì)（生產(chǎn)用水等）需要重點做風(fēng)險評估工作藥品雜質(zhì)引入風(fēng)險評估常見已知雜質(zhì)引入途徑常見未知雜質(zhì)引入途徑16關(guān)于PDE法與TTC法管不住外包項目 6氯代丙醇響應(yīng)低，耐用性差當(dāng)使用多孔填充材料作為固定相時，分子排阻色譜（Sizeexclusion chromatography，SEC）和相互作用色譜潛在及未知雜質(zhì)研究策略討論5種測定甲磺酸酯分析方法比較LD50計算NOEL的公式：NOEL=LD50×70/2000，公式中的70是歐洲人的評價體重具有合適的樣品制備方式：直接溶解、溶解后沉淀、液液萃取、固體液萃取似是老生常談的雜質(zhì)研究對于無閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)，如果每日攝入量低于1.“請補充提供或說明雜質(zhì)檢查方法與限度修改(制訂)的依據(jù)…”雜質(zhì)研究≠有關(guān)物質(zhì)檢查！ICHQ3D:元素雜質(zhì)的指導(dǎo)原則(2014.通則0531 超臨界流體色譜法《原料藥工廠中清潔驗證指南》一文中的NOEL的單位是mg/天，而不是上文公式中的“請結(jié)合本產(chǎn)品及起始原料工藝對雜質(zhì)進行補充研究…”PDE控制（存在報道）歐洲化學(xué)品管理局（ECHA）符合資質(zhì)的對照品：適合包裝、有COA安全性重點關(guān)注高毒性雜質(zhì)：致癌、致突變類雜雜質(zhì)17已知雜質(zhì)研究策略討論結(jié)構(gòu)已知的雜質(zhì)研究：起始物料及其已知雜質(zhì)、中間體、試劑、反應(yīng)副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物根據(jù)工藝路線梳理出產(chǎn)品待研究的雜質(zhì)清單進行毒性雜質(zhì)評估分類：文獻報道、軟件預(yù)測根據(jù)各國藥典及ICH

QA\B\C規(guī)則分別建立有關(guān)物質(zhì)和溶劑殘留方法建立滿足專屬性和靈敏度的方法（LOQ<30%限度濃度），收集多批次API中目標(biāo)雜質(zhì)含量基于已有的有關(guān)物質(zhì)方法和溶劑殘留方法，增加供試品濃度或改變檢測器基于雜質(zhì)檢出情況制定雜質(zhì)添加實驗，考察工藝的雜質(zhì)的去除能力基于雜質(zhì)分類、毒性評估、產(chǎn)品檢出情況制定方法學(xué)驗證策略及產(chǎn)品控制策略關(guān)于PDE法與TTC法17已知雜質(zhì)研究策略討論結(jié)構(gòu)已知的雜質(zhì)1718潛在及未知雜質(zhì)研究策略討論潛在及未知雜質(zhì)來源：起始物料引入未知雜質(zhì)、溶劑中雜質(zhì)、包材浸出物雜質(zhì)、輔料引入雜質(zhì)、生產(chǎn)設(shè)備引入根據(jù)供應(yīng)商提供的工藝路線梳理雜質(zhì)清單及潛在雜質(zhì)，分別對元素雜質(zhì)和有機雜質(zhì)進行分類研究針對元素雜質(zhì)采取ICPMS全質(zhì)量數(shù)掃描（69種）和

35種元素半定量掃描針對揮發(fā)及半揮發(fā)雜質(zhì)采用GCMS進行全質(zhì)量數(shù)掃描（譜庫匹配）及半定量分析（SIM模式）針對不揮發(fā)雜質(zhì)采用LCMS

或

LC-MSMS進行全質(zhì)量數(shù)掃描及半定量分析（SIM模式）購買疑似或近似雜質(zhì)進行分析比對，確定研究目標(biāo)根據(jù)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)評估雜質(zhì)的毒性，確定雜質(zhì)的研究限度對比多批次中起始物料及其關(guān)聯(lián)的原料藥中雜質(zhì)的檢出情況根據(jù)雜質(zhì)的來源風(fēng)險及檢出情況，制定雜質(zhì)的控制策略18潛在及未知雜質(zhì)研究策略討論潛在及未知雜質(zhì)來源：起始物料引18二、痕量雜質(zhì)分析方法的建立1.痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)與目標(biāo)2.基于結(jié)構(gòu)特性的分析方法決策思路3.痕量分析方法建立步驟4.痕量物質(zhì)定量方法的要素二、痕量雜質(zhì)分析方法的建立1.痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)與目標(biāo)191.痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)與目標(biāo)痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)含量低，選擇性要求高，高靈敏度的儀器（GC-MS，LC-MSMS、ICPMS

等）雜質(zhì)結(jié)構(gòu)多樣性和差異大，需要多種分析手段和方法樣品基質(zhì)復(fù)雜，需要合適的前處理方法進行分離，純化，富集有些雜質(zhì)具有“亞穩(wěn)定性”的化學(xué)結(jié)構(gòu)，在樣品準(zhǔn)備，制備和分析過程中容易發(fā)生轉(zhuǎn)化需要有經(jīng)驗的分析科學(xué)家好的分析方法簡單容易操作，成本低通用性穩(wěn)定性容易技術(shù)轉(zhuǎn)移1.痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)與目標(biāo)痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)好的分析方法202.基于結(jié)構(gòu)特性的分析方法決策思路易揮發(fā)分子?是GC條件穩(wěn)定?否是HPLC條件穩(wěn)定嗎?是HPLC/UVHPLC/MS否化學(xué)衍生后引入質(zhì)譜或紫外檢測儀敏感基團:GC/MS,

LC/UV,

LC/MS等方法否HPLC條件下穩(wěn)定嗎?否是堿性酸性富含雜原中性分子,羥基,羰基,醚,酯等等富含共軛鍵分子(+)電噴離子化/質(zhì)譜(-)電噴離子化/質(zhì)譜化學(xué)電離/質(zhì)譜UV/質(zhì)譜如不能達到檢測靈敏度HS/GC/FID/MS如不能達到檢測靈敏度如不能達到檢測靈敏度2.基于結(jié)構(gòu)特性的分析方法決策思路易揮發(fā)分子?是GC條件穩(wěn)定213.痕量分析方法建立步驟色譜分離技術(shù)氣相色譜液相色譜離子色譜毛細(xì)管電泳檢測手段氫火焰(FID)紫外(UV)電子捕獲(ECD)EI質(zhì)譜(MS)ESI/APCI質(zhì)譜(MS/MS)熒光檢測(FLD)氮化學(xué)檢測器（CND）樣品制備技術(shù)直接溶解溶解后析出化學(xué)衍生法液-液萃取固相萃取選擇何種組合的分析方法取決于：API性質(zhì)（溶解性、化學(xué)活性）目標(biāo)物性質(zhì)（極性與揮發(fā)性、結(jié)構(gòu)特征）檢測器極限雜質(zhì)溶液穩(wěn)定性3.痕量分析方法建立步驟色譜分離技術(shù)氣相色譜檢測手段氫火焰(224.痕量物質(zhì)定量方法的要素待測物限度=對照品濃度/樣品濃度符合資質(zhì)的對照品：適合包裝、有COA有代表性的樣品：中試樣品、驗證批次樣品適合的色譜系統(tǒng)：各目標(biāo)雜質(zhì)及樣品可以有效分離適合的檢測器：具有高專屬性、高靈敏度適合的溶媒：色譜系統(tǒng)兼容、溶液穩(wěn)定性、溶解能力具有合適的樣品制備方式：直接溶解、溶解后沉淀、液液萃取、固體液萃取分析方法核心：準(zhǔn)確度、耐用性4.痕量物質(zhì)定量方法的要素待測物限度=對照品濃度/樣品濃度符23三、案例分析與討論5種測定甲磺酸酯分析方法比較5種測定水合肼分析方法比較3種測定氯代丙醇分析方法比較三、案例分析與討論5種測定甲磺酸酯分析方法比較24基因毒雜質(zhì)開發(fā)實例——甲磺酸甲酯等儀器設(shè)備樣品處理及進樣發(fā)生LOQ方法缺點LCMS三甲胺衍生后直接進樣1ng/ml存在基質(zhì)不適用及潛在假陽性風(fēng)險LC/MS/MS直接溶解進樣10

ng/ml設(shè)備昂貴，不易獲取GC-MS衍生后頂空進樣10

ng/ml存在基質(zhì)不適用及潛在假陽性風(fēng)險溶解后直接進樣20

ng/ml靈敏度低、基質(zhì)效應(yīng)強、耐用性差液液萃取后直接進樣20

ng/ml操作較為繁瑣，局限于水溶性樣品ORSOR'O

I+OR' RSOI基因毒雜質(zhì)開發(fā)實例——甲磺酸甲酯等儀器設(shè)備樣品處理及進樣發(fā)生25基因毒雜質(zhì)開發(fā)實例——肼常用分析方法樣品處理LOQ方法缺點IC直接進樣50ng/ml設(shè)備不通用、靈敏度低

專屬性差HILIC/LC/MS直接進樣1ng/ml質(zhì)量數(shù)過小，方法穩(wěn)定性不好LC/MS苯甲醛衍生后直接進樣5ng/ml衍生萃取操作比較繁瑣LLE+GCMS苯甲醛衍生后，液液萃取后直接進樣10ng/ml衍生萃取操作比較繁瑣LLE+HPLC/UV苯甲醛衍生后，液液萃取后直接進樣5ng/ml衍生萃取操作比較繁瑣HO+H2NH2NONN+H2NNH2H基因毒雜質(zhì)開發(fā)實例——肼常用分析方法樣品處理LOQ方法缺點I26-1B（Ir、Rh、Ru、Os）建立滿足專屬性和靈敏度的方法（LOQ<30%限度濃度），收集多批次API中目標(biāo)雜質(zhì)含量10)ICHQ3B(R2):新型藥品中的雜質(zhì)問題(2006.管不住外包項目 6賦值-QNMR（400M核磁）對于原料藥而言，dose均定為10g/dayF5=5-10foraLOEL；F3：為短期接觸急性毒性研究的可變系數(shù)：雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效，甚至對人體的健康有害的物質(zhì)Rosenblatt;M.Liquid Chromatography at Critical Condition，LCCC“請補充提供或說明雜質(zhì)檢查方法與限度修改(制訂)的依據(jù)…”取對照溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%；需要重點做風(fēng)險評估工作PDE=TD50*體重/500005ug，那么患者因服藥導(dǎo)致癌癥發(fā)生的額外風(fēng)險可以忽略不記。化學(xué)衍生后引入質(zhì)譜或紫外檢測儀敏感基團:根據(jù)雜質(zhì)的來源風(fēng)險及檢出情況，制定雜質(zhì)的控制策略電感耦合等離子體質(zhì)譜法uv 檢測限 工藝雜質(zhì)基因毒雜質(zhì)開發(fā)實例——氯代丙醇測定常用分析方法樣品處理LOQ方法缺點GCMS氯代丙醇直接進樣30

ng/ml氯代丙醇響應(yīng)低，耐用性差衍生GC/MS七氟丁?；溥蜓苌笾苯舆M樣5

ng/ml衍生操作繁瑣衍生LC/MS二甲胺衍生后直接進樣1

ng/ml衍生操作繁瑣-1B（Ir、Rh、Ru、Os）基因毒雜質(zhì)開發(fā)實例——氯代27制劑中兩個未知雜質(zhì)的分離及鑒定四、未知雜質(zhì)分離鑒定案例分析制劑中兩個未知雜質(zhì)的分離及鑒定四、未知雜質(zhì)分離鑒定案例分析28項目介紹項目背景: 某制劑樣品在穩(wěn)定性研究過程中出現(xiàn)的兩個降解雜質(zhì)色譜條件: C18, 40mM磷酸鹽水溶液/甲醇=23：77研究步驟:分析方法轉(zhuǎn)換，置換成質(zhì)譜兼容流動相液質(zhì)聯(lián)用分析, 獲取雜質(zhì)分子量及獲取制備中控方法制劑樣品提取有效成分，利用制備液相分離雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定（TOF-MS、超低溫探頭600M

核磁）雜質(zhì)定向合成賦值-QNMR（400M核磁）相對校正因子測定項目介紹29定位MS（ESI-）分析方法轉(zhuǎn)換定位MS分析方法轉(zhuǎn)換30甲醇萃取、過濾常溫旋干甲醇復(fù)溶、制備樣品處理與制備分離冷凍干燥色譜定位、質(zhì)譜確認(rèn)甲醇萃取、過濾常溫旋干甲醇復(fù)溶樣品處理與制備分離冷凍干31分子量結(jié)合API結(jié)構(gòu)推論雜質(zhì)結(jié)構(gòu)通過TOFMS和核磁得到驗證雜質(zhì)A：次甲基氧化生成醇雜質(zhì)B：2號位甲甲基氧化成醛QNMR定量雜質(zhì)A：89.5%；雜質(zhì)B：85.6%未知雜質(zhì)結(jié)構(gòu)鑒定分子量結(jié)合API結(jié)構(gòu)推論雜質(zhì)結(jié)構(gòu)QNMR定量雜質(zhì)A：8932找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看不懂發(fā)補意見……234說不清依據(jù)緣由5管不住外包項目

6

1找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看不懂發(fā)補意見2333高比例發(fā)補的幾條意見你有木有接到過這類令人心塞的發(fā)補通知？“請結(jié)合本產(chǎn)品及起始原料工藝對雜質(zhì)進行補充研究…”“請補充提供或說明雜質(zhì)檢查方法與限度修改(制訂)的依

據(jù)…”“請使用專屬性更強靈敏度更高的方法對本品與原研的

雜質(zhì)譜進行重新研究…”高比例發(fā)補的幾條意見你有木有接到過這類令人心塞的發(fā)補通知？341找不見研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看不懂發(fā)補意見……24說不清依據(jù)緣由5管不住外包項目

6

311找不見研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看不懂發(fā)補意見235雜質(zhì)研究≠有關(guān)物質(zhì)檢查！1有關(guān)物質(zhì)－起始原料－中間體、副產(chǎn)物異構(gòu)體和聚合物多晶型－降解產(chǎn)物異構(gòu)體和聚合物多晶型3外源污染物－微生物－微粒物質(zhì)-農(nóng)藥殘留－非法添加物2無關(guān)雜質(zhì)－試劑配位體、無機鹽、溶劑－重金屬催化劑－過濾介質(zhì)、活性炭-酶殘留雜質(zhì)研究≠有關(guān)物質(zhì)檢查！1有關(guān)物質(zhì)3外源污染物2無關(guān)雜質(zhì)36通則0531 超臨界流體色譜法2000是一個安全系數(shù)。1,3-二氯-2-丙醇根據(jù)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)評估雜質(zhì)的毒性，確定雜質(zhì)的研究限度在檢索劑量數(shù)據(jù)前需要全面檢索該物質(zhì)是否有致癌致畸性，例如氯乙酸CPDB數(shù)據(jù)TD50顯示陰性制劑中兩個未知雜質(zhì)的分離及鑒定質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)/方法與質(zhì)量的關(guān)系當(dāng)研究沒有區(qū)分NOAEL和NOEL，且依據(jù)確定的PDE值選擇劑量時毒性不被認(rèn)為是“副作用”，則使用F5等氯代丙醇響應(yīng)低，耐用性差2015年版藥典注射劑通則整合后補充的這個項目給你什么提示？＜2小時改換溶劑或明確給出Rosenblatt;M.已有證據(jù)表明，該物質(zhì)只有在超過一定限度時才會產(chǎn)生遺傳毒性。F5=5-10foraLOEL；R =試劑/催化劑DS =藥用輔料分析方法轉(zhuǎn)換，置換成質(zhì)譜兼容流動相雜質(zhì)與主成分結(jié)構(gòu)性質(zhì)差異很大國外使用TLC補充檢測三唑侖/七氟烷/十一烯酸歐洲化學(xué)品管理局（ECHA）有否漏檢雜質(zhì)有否需校正雜質(zhì)重組人生長激素紅霉素/麥迪霉素硫酸魚精蛋白/肝素鈉阿奇霉素/右旋糖酐鐵三唑侖/七氟烷/十一烯酸重組發(fā)酵提取半合成合成更有新型生物技術(shù)/細(xì)胞產(chǎn)品通則0531 超臨界流體色譜法重組人生長激素紅霉素/麥迪霉素37多、全大、雜多、全38農(nóng)藥殘留菌體蛋白殘留酶培養(yǎng)液雜質(zhì)農(nóng)藥殘留菌體蛋白殘留酶培養(yǎng)液雜質(zhì)39元素（重金屬）雜質(zhì)? 1類金屬雜質(zhì)（原料藥）-

1A

（

Pt、Pd

）-

1B（Ir、Rh、Ru、Os）-

1C（Mo、Ni、Cr、V）元素（重金屬）雜質(zhì)? 1類金屬雜質(zhì)（原料藥）40修訂通則新增方法2341 農(nóng)藥殘留量測定法本方法為質(zhì)譜法（通則0431）測定中藥材中的農(nóng)藥殘留量。氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法提供了多品種通用的色譜及質(zhì)譜條件僅僅中藥材有農(nóng)藥殘留問題？修訂通則新增方法2341 農(nóng)藥殘留量測定法材中的農(nóng)藥殘留量。41各國藥典列出的雜質(zhì)與你產(chǎn)品的關(guān)系？曾見到有企業(yè)CTD格式申報資料中雜質(zhì)分析章節(jié)讓人不知所云的神段子：國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)目前未收載指定相關(guān)雜質(zhì)，USP中收載有3個雜質(zhì)，EP中收載有5個特定雜質(zhì)，其中2個與USP不同，國內(nèi)可以購買到EP的5種雜質(zhì)對照品。呃...我弱弱的問您一句您想說什么？“請結(jié)合本產(chǎn)品及起始原料工藝對雜質(zhì)進行補充研究…”各國藥典列出的雜質(zhì)與你產(chǎn)品的關(guān)系？曾見到有企業(yè)CTD格式申報42雜質(zhì)研究怎樣突出自己特色？中間體副產(chǎn)物A+B→C; C+D→EA+B→C A+B’→C’以合成路線為線索，順藤摸瓜列表自家工藝雜質(zhì)！理論分析與實驗數(shù)據(jù)相結(jié)合?。∫越K為始確定重點?。?！-

物料殘留（反應(yīng)物，試劑，溶劑，催化劑）A（1mol）+B（2mol）→C（1mol）+B（1mol）雜質(zhì)研究怎樣突出自己特色？中間體A+B→C; C+D→E以合43列表自家產(chǎn)品中所有潛在雜質(zhì)并分析來龍去脈雜質(zhì)名稱

引入點

去除方式

監(jiān)控方法

預(yù)估量

屬性A

合成第一步

反應(yīng)完全TLC

檢測限

工藝雜質(zhì)過程中檢測 以下

起始原料B合成第一步水洗3次

uv

檢測限

工藝雜質(zhì)過程中檢測 以下 起始原料合成第二步完C 合成第一步

HPLC

工藝雜質(zhì)全 過程中檢測 中間體B' 合成第一步 反應(yīng)結(jié)束或水洗工藝雜質(zhì)原料引入C'Chp.和USP中的雜質(zhì)1合成第一步合成第二步HPLC過程中檢測+終產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中檢查工藝雜質(zhì)副產(chǎn)物/熱降解物“請結(jié)合本產(chǎn)品及起始原料工藝對雜質(zhì)進行補充研究…”列表自家產(chǎn)品中所有潛在雜質(zhì)并分析來龍去脈雜質(zhì)名稱 441找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看不懂發(fā)補意見……24說不清依據(jù)緣由

5管不住外包項目

6311找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看不懂發(fā)補意見245檢測的方法因雜而異檢測的方法因雜而異46質(zhì)量數(shù)過小，方法穩(wěn)定性不好過程中檢測 以下 起始原料針對元素雜質(zhì)采取ICPMS全質(zhì)量數(shù)掃描（69種）和35種元素半定量掃描-1B（Ir、Rh、Ru、Os）似是老生常談的雜質(zhì)研究“請使用專屬性更強靈敏度更高的方法對本品與原研的雜質(zhì)譜進行重新研究…”F5=1-5foraNOAEL；關(guān)于PDE法與TTC法三唑侖/七氟烷/十一烯酸急毒數(shù)據(jù)，根據(jù)歐盟數(shù)據(jù)經(jīng)驗，這個研究時間在3-6個月之間，因此，F(xiàn)3=5。液質(zhì)聯(lián)用分析, 獲取雜質(zhì)分子量及獲取制備中控方法全 過程中檢測 中間體雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效，甚至對人體的健康有害的物質(zhì)5種測定甲磺酸酯分析方法比較TTC是在接受患者終生用藥的癌癥發(fā)生概率不超過10萬分之一的基礎(chǔ)上，從高濃度下進行的致癌性實驗數(shù)據(jù)線性外推倒極低濃度得到的一個理論值。以超臨界流體作為流動相。以超臨界流體作為流動相。各國藥典列出的雜質(zhì)與你產(chǎn)品的關(guān)系？……210nm254nmR =試劑/催化劑DS =藥用輔料原研標(biāo)準(zhǔn)EP7.0USP34JP15雜質(zhì)譜研究梯度洗脫色譜條件………210nm254nm雙波長檢測梯度洗脫色譜條件………210nm254nm雙波長檢測梯度洗脫色譜條件……210nm254nm雙波長檢測等度洗脫色譜條件………210nm檢測等度洗脫色譜條件………210nm單波長檢測“請使用專屬性更強靈敏度更高的方法對本品與原研的雜質(zhì)譜進行重新研究…”雜質(zhì)與主成分結(jié)構(gòu)性質(zhì)差異很大國外使用TLC補充檢測怎么判定你所用的方法不夠好？-根據(jù)文獻質(zhì)量數(shù)過小，方法穩(wěn)定性不好原研標(biāo)準(zhǔn)EP7.0USP34JP147怎么判定你所用的方法不夠好？-根據(jù)試驗物質(zhì)平衡考察/靈敏度試驗/專屬性試驗有否漏檢雜質(zhì)

有否需校正雜質(zhì)

需否補充方法怎么判定你所用的方法不夠好？-根據(jù)試驗48根據(jù)組成根據(jù)結(jié)構(gòu)根據(jù)性質(zhì)/需求/法規(guī)怎么判定你所用的方法不夠好？-綜合分析根據(jù)組成怎么判定你所用的方法不夠好？49舉一反三觸類旁通2015年版藥典注射劑通則整合后補充的這個項目給你什么提示？舉一反三觸類旁通2015年版藥典注射劑通則整合后補充的這個50通則中新增的儀器與技術(shù)通則0412電感耦合等離子體質(zhì)譜法重金屬及有害元素山楂照鉛、鎘、砷、汞、銅測定法（通則2321原子吸收分光光度法或電感耦合等離子體質(zhì)譜法）測定，鉛不得過5mg/kg;鎘不得過0.

3mg/kg;砷不得過2mg/kg；汞不得過

0.2mg/kg；銅不得過20mg/kg。通則中新增的儀器與技術(shù)通則0412電感耦合等離子體質(zhì)譜法重金51中藥注射劑已經(jīng)在精密測定按日服藥量限定金屬雜質(zhì)，連化妝品都開始用ICP-MS檢測鉛汞砷鎘嘍！而化藥的靜脈注射劑重金屬就一直用目視判斷總量粗測？！重金屬雜質(zhì)監(jiān)控是不是該升升級啦？中藥注射劑已經(jīng)在精密測定按日服藥量限定金屬雜質(zhì)，連化妝品都52基因毒性雜質(zhì)優(yōu)質(zhì)推薦課件53新增通則中涉及的儀器與技術(shù)通則0531 超臨界流體色譜法supercriticalfluid

chromatography,SFC超臨界流體色譜儀很多部件類似髙效液相色譜儀以超臨界流體作為流動相。分析速度比HPLC提高3-10倍，溶劑成本是HPLC的1/3-1/40，除可連接UV,DAD以及MS檢測器外還可以連接氣相的FID檢測器對手性化合物具有更好的分離能力新增通則中涉及的儀器與技術(shù)通則0531 超臨界流體色譜法su54新增通則中涉及的儀器與技術(shù)0532 臨界點色譜法Liquid Chromatography at Critical Condition，LCCC儀器同HPLC當(dāng)使用多孔填充材料作為固定相時，分子排阻色譜（Sizeexclusion chromatography，SEC）和相互作用色譜（Interaction chromatography，IC）的分離機制在分離聚合物時同時發(fā)生作用。在某個特殊色譜條件（固定相、流動相的組成、溫度）下，存在兩種分離機制的臨界點，被稱為焓熵互補點或色譜臨界條件（critical

conditions）或臨界吸附點（criticaladsorption point，CAP）。是對聚合物進行分離的一種色譜技術(shù)。新增通則中涉及的儀器與技術(shù)0532 臨界點色譜法55與時俱進實事求是接軌國際體現(xiàn)特色整體著眼細(xì)節(jié)入手與時俱進實事求是56TheCarcinogenicPotencyDatabase(CPDB)全 過程中檢測 中間體痕量物質(zhì)定量方法的要素異構(gòu)體和聚合物多晶型藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源NOEL值與致癌致畸沒有必然聯(lián)系限度=PDE/日最大劑量F5=1foraNOEL；基于雜質(zhì)分類、毒性評估、產(chǎn)品檢出情況制定方法學(xué)驗證策略及產(chǎn)品控制策略新藥與仿制藥研究策略有顯著差異10)ICHQ3B(R2):新型藥品中的雜質(zhì)問題(2006.四、未知雜質(zhì)分離鑒定案例分析當(dāng)研究沒有區(qū)分NOAEL和NOEL，且依據(jù)確定的PDE值選擇劑量時毒性不被認(rèn)為是“副作用”，則使用F5等 現(xiàn)在提倡配定量限或限度1/10溶液公式解釋：NOEL（NOAEL）數(shù)據(jù)如果能直接查到就不需要計算了，直接進入到第2個公式；含量低，選擇性要求高，高靈敏度的儀器（GC-MS，取對照溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%；ICHM7(R1):評估和控制藥物中DNA反應(yīng)性（致突變）雜質(zhì)以限制潛在的致癌風(fēng)險(2017.現(xiàn)在改為配定量限或限度1/10溶液基于已有的有關(guān)物質(zhì)方法和溶劑殘留方法，增加供試品濃度或改變檢測器1找不準(zhǔn)研究對象選不對研究方法寫不好質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)看不懂發(fā)補意見……23

4說不清依據(jù)緣由5管不住外包項目

6TheCarcinogenicPotencyDatab57質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)/方法與質(zhì)量的關(guān)系美女與旗袍肥肥與束身衣質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)/方法與質(zhì)量的關(guān)系美女與旗袍肥肥與束身衣58需要嚴(yán)控的毒性雜質(zhì)可以寬管的有效雜質(zhì)校正因子差異大的雜質(zhì)以及你想重點精密管控的雜質(zhì)！需要嚴(yán)控的毒性雜質(zhì)校正因子差異大的雜質(zhì)59結(jié)合試驗結(jié)果寫好標(biāo)準(zhǔn)溶劑選擇的依據(jù)＞8小時標(biāo)準(zhǔn)中一般不需提示＜4小時需提示“臨用現(xiàn)配”或“立即進樣”＜2小時改換溶劑或明確給出“該溶液配制后應(yīng)在1小時內(nèi)使用”結(jié)合試驗結(jié)果寫好標(biāo)準(zhǔn)溶劑選擇的依據(jù)60采用外標(biāo)法時，通常取各品種項下的對照品溶液，連續(xù)進樣5次，除另有規(guī)定外，RSD2.0在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中如果沒有明確規(guī)定，就是≤2.0注意：不要自己難為自己哦！應(yīng)給予微量物質(zhì)檢測較寬松的指標(biāo)！特別是在定量限附近時！要連續(xù)進樣不能拼湊哦！重復(fù)性（RSD）的要求采用外標(biāo)法時，通常取各品種項下的對照品溶液，連續(xù)進樣5次，除61<有關(guān)物質(zhì)>原來大多藥典標(biāo)準(zhǔn)取對照溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%；現(xiàn)在改為配定量限或限度1/10溶液取靈敏度溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的信噪比約為10（或大于10）；關(guān)于靈敏度測試<有關(guān)物質(zhì)>原來大多藥典標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于靈敏度測試62

<有關(guān)物質(zhì)>原來大多標(biāo)準(zhǔn)

取對照溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的20%；

現(xiàn)在提倡配定量限或限度1/10溶液

取靈敏度溶液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分色譜峰的信噪比約為10（或大于10）；關(guān)于靈敏度測試 <有關(guān)物質(zhì)>原來大多標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于靈敏度測試631找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)似是老生常談的雜質(zhì)研究-還有哪些困惑與問題？看不懂發(fā)補意見……234說不清依據(jù)緣由5管不住外包項目

61找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)似是老生常談的雜64優(yōu)秀的申報資料-是能成功傳遞大量信息的研發(fā)思路研發(fā) 實驗水平 方法實驗結(jié)論實驗結(jié)果研發(fā)理念優(yōu)秀的申報資料-是能成功傳遞大量信息的研發(fā)研發(fā) 實驗實驗結(jié)論65缺依據(jù)少過程無數(shù)據(jù)缺主觀臆斷別問我根據(jù)什么常見問題-錯缺淺亂亂雜散無章沒鏈接沒邏輯慢慢品來細(xì)細(xì)找東一句西一行考驗?zāi)銣\蜻蜓點水想說信你很困難

誰說我沒跟你講只能發(fā)補問明白點兩句藏八句讓人猜缺依據(jù)缺別問我根據(jù)什么常見問題-錯缺淺亂亂淺蜻蜓點水想說信你66HowWhyWhereHowmuch雜質(zhì)研究要解決的問題絕不僅限于雜質(zhì)檢測！What如何檢測與監(jiān)控？為什么除不掉/能除掉？怎么引入的？雜質(zhì)都是啥？限度訂多少？HowWhyWhereHowmuch雜質(zhì)研究要解決的問題67創(chuàng)建思路摸索過程細(xì)節(jié)考究新方法新建立方法必有內(nèi)容創(chuàng)建思路摸索過程細(xì)節(jié)考究新方法新建立方法必有內(nèi)容68變更前缺點-必要性變更依據(jù)變更的驗證-正確性前后的比較-優(yōu)越性方法與限度變更時以下內(nèi)容提供了嗎？變更前缺點-必要性方法與限度變更時69雜質(zhì)譜比較四方面結(jié)論你給沒給？雜質(zhì)組成是否一致有否新增雜質(zhì)能否橋接安全性資料可否照搬方法與限度雜質(zhì)譜比較四方面結(jié)論你給沒給？雜質(zhì)組成是否一致70生產(chǎn)質(zhì)控水平-講難度企業(yè)成本利益-算己賬安全有效與科學(xué)合理性呢？限度制訂說明常見問題-強調(diào)困難不講科學(xué)生產(chǎn)質(zhì)控水平-講難度限度制訂說明常見問題-強調(diào)困難不講科學(xué)711找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)似是老生常談的雜質(zhì)研究-還有哪些困惑與問題？看不懂發(fā)補意見……23

034說不清依據(jù)緣由5管不住外包項目

61找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)似是老生常談的雜72實驗記錄-不完備實驗圖譜-無解析雜質(zhì)對照-缺工藝實驗記錄-不完備731找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)似是老生常談的雜質(zhì)研究-還有哪些困惑與問題？看不懂發(fā)補意見……23034說不清依據(jù)緣由5管不住外包項目

61找不準(zhǔn)研究對象選不好研究方法寫不細(xì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)似是老生常談的雜74高比例發(fā)補的幾條意見你有木有接到過這類令人心塞的發(fā)補通知？

“請結(jié)合本產(chǎn)品及起始原料工藝對雜質(zhì)進行補充研究…”“請補充提供或說明雜質(zhì)檢查方法與限度修改(制訂)的依據(jù)…”“請使用專屬性更強靈敏度更高的方法對本品與原研的雜質(zhì)譜進行重新研究…”發(fā)補意見你都該怎么理解如何回復(fù)？高比例發(fā)補的幾條意見你有木有接到過這類令人心塞的發(fā)補通知？75常見物質(zhì)的PDE數(shù)值舉例針對揮發(fā)及半揮發(fā)雜質(zhì)采用GCMS進行全質(zhì)量數(shù)掃描（譜庫匹配）及半定量分析（SIM模式）異構(gòu)體和聚合物多晶型現(xiàn)在改為配定量限或限度1/10溶液2000是一個安全系數(shù)。PDE(ug/day)路線1路線2路線3以超臨界流體作為流動相。樣品基質(zhì)復(fù)雜，需要合適的前處理方法進行分離，純化，富集3-氯-1,2-丙二醇PDE控制（存在報道）限度=PDE/日最大劑量分析方法核心：準(zhǔn)確度、耐用性制劑樣品提取有效成分，利用制備液相分離雜質(zhì)在所有情況下，對研究時間介于上述時間點之間的研究，應(yīng)用較大的系數(shù)，如對嚙齒類動物９個月毒性研究，其系數(shù)用２。通則0531 超臨界流體色譜法似是老生常談的雜質(zhì)研究5ug，那么患者因服藥導(dǎo)致癌癥發(fā)生的額外風(fēng)險可以忽略不記。結(jié)構(gòu)鑒定（TOF-MS、超低溫探頭600M核磁）怎么判定你所用的方法不夠好？謝謝常見物質(zhì)的PDE數(shù)值舉例謝謝76基因毒性雜質(zhì)基因毒性雜質(zhì)77一、藥品雜質(zhì)研究評估策略二、痕量雜質(zhì)定量分析方法的建立提

綱三、案例分析與討論四、未知雜質(zhì)分離鑒定案例分析一、藥品雜質(zhì)研究評估策略二、痕量雜質(zhì)定量分析方法的建立78一、藥品雜質(zhì)研究評估策略1.藥品雜質(zhì)研究的法規(guī)依據(jù)2.藥品雜質(zhì)評估一般步驟3.藥品雜質(zhì)來源途徑分析4.藥品雜質(zhì)毒性判別方法5.藥品雜質(zhì)研究限度策略6.藥品雜質(zhì)風(fēng)險評估的分析方法建立策略一、藥品雜質(zhì)研究評估策略796雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效，甚至對人體的健康有害的物質(zhì)產(chǎn)品質(zhì)量重點關(guān)注雜質(zhì)：工藝雜質(zhì)、

降解雜質(zhì)安全性重點關(guān)注高毒性雜質(zhì)：致癌、致突變類雜雜質(zhì)中國藥典、美國藥典、歐洲藥典、日本藥典等各國藥典ICH

Q3A(R2):

新型原料藥中的雜質(zhì)問題

(2006.10)ICH

Q3B(R2):

新型藥品中的雜質(zhì)問題

(2006.06)ICH

Q3C(R6):雜質(zhì)：殘留溶劑的指導(dǎo)原則

(2016.10)ICH

Q3D:元素雜質(zhì)的指導(dǎo)原則

(2014.12)ICH

Q11:原料藥開發(fā)和生產(chǎn)（化學(xué)實體和生物技術(shù)生物實體藥物）(2012.05)ICH

M7(R1):評估和控制藥物中DNA

反應(yīng)性（致突變）雜質(zhì)以限制潛在的致癌風(fēng)險

(2017.03)化學(xué)藥品注射劑與包裝材料相容性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（塑料、玻璃、彈性體密封件）雜質(zhì)研究相關(guān)法規(guī)1.藥品雜質(zhì)研究的法規(guī)依據(jù)重點關(guān)注：法規(guī)適用范圍6雜質(zhì)是指藥物中存在的無治療作用或者影響藥物的穩(wěn)定性、療效，802.藥品雜質(zhì)評估一般步驟①雜質(zhì)引入方式③限度制定已有研究的文獻報道警示結(jié)構(gòu)提示計算機模擬毒性評估體外點突變和染色體畸變試驗動物毒性評估起始物料及其雜質(zhì)溶劑及其雜質(zhì)中間體反應(yīng)副產(chǎn)物輔料雜質(zhì)降解雜質(zhì)生產(chǎn)設(shè)備引入包裝材料引入環(huán)境污染引入一般雜質(zhì)致癌致畸雜質(zhì)PDE控制（存在報道）PDE控制

（存在報道）TTC控制ICHQ3

A/B/C/D②雜質(zhì)毒性分類判定致癌、致突變2.藥品雜質(zhì)評估一般步驟①③已有研究的文獻報道起始物料及其雜81關(guān)于PDE法與TTC法PDE法適用于有閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)；已有證據(jù)表明，該物質(zhì)只有在超過一定限度時才會產(chǎn)生遺傳毒性。雜質(zhì)安全性限度的確定可以參照殘留溶劑限度的計算方法，根據(jù)相關(guān)動物的無可見效應(yīng)劑量（No-ObservedEffectLevel）計算其可接受的日暴露量（PermissibleDailyExposure）,再根據(jù)藥品的最大日劑量計算出雜質(zhì)的接受限度。關(guān)于PDE法與TTC法PDE法82關(guān)于PDE法與TTC法TTC法無閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)；引入了毒理學(xué)關(guān)注的閾值（ThresholdofToxicologicalConcern）。TTC是在接受患者終生用藥的癌癥發(fā)生概率不超過10萬分之一的基礎(chǔ)上，從高濃度下進行的致癌性實驗數(shù)據(jù)線性外推倒極低濃度得到的一個理論值。對于無閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)，如果每日攝入量低于1.5ug，那么患者因服藥導(dǎo)致癌癥發(fā)生的額外風(fēng)險可以忽略不記。關(guān)于PDE法與TTC法TTC法838按屬性有機雜質(zhì)無機雜質(zhì)按來源工藝雜質(zhì)降解雜質(zhì)3.藥品雜質(zhì)來源途徑分析路線1路線2路線3溶劑1，催化劑A+B C(A’) 時間、溫度、pH… (C’)SI

溶劑雜質(zhì)溶劑2，試劑RI

試劑雜質(zhì)DS(DS’)(D1,D2…)(BP1,BP2…)輔料制劑(D3,D4,E11,E12,…)容器中的浸出物A，B=起始物料C =中間體R =試劑/催化劑DS =藥用輔料A’ =潛在的起始物料雜質(zhì)產(chǎn)生C’和DS’BP =反應(yīng)副產(chǎn)物D =降解產(chǎn)物SIRIIE=溶劑雜質(zhì)=試劑雜質(zhì)=輔料雜質(zhì)EI

輔料雜質(zhì)8按屬性有機雜質(zhì)無機雜質(zhì)按來源工藝雜質(zhì)降解雜質(zhì)3.藥品雜質(zhì)來849藥品雜質(zhì)來源途徑分析-容器中的浸出物來源9藥品雜質(zhì)來源途徑分析-容器中的浸出物來源8510藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源常見報道高毒性雜質(zhì)具有警示結(jié)構(gòu)雜質(zhì)10藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源常見報道高毒性雜質(zhì)8611藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源毒理學(xué)實驗毒理學(xué)計算軟件各類毒理學(xué)數(shù)據(jù)庫已有文獻報道獲取TD50、NOEL、ADI、PMTDINOEL值與致癌致畸沒有必然聯(lián)系查詢的毒性研究文獻全面性以及毒性實驗數(shù)據(jù)的解讀需要專家的確認(rèn)TheCarcinogenicPotencyDatabase

(CPDB)聯(lián)合國糧農(nóng)組織/世界衛(wèi)生組織食品添加劑專家委員會評價（JECFA）加利福尼亞州65號提案(安全飲用水和有毒物質(zhì)強制法令)歐洲化學(xué)品管理局（ECHA）11藥物雜質(zhì)致癌致畸信息獲取來源毒理學(xué)實驗TheCarci8712常見物質(zhì)的PDE數(shù)值舉例在檢索劑量數(shù)據(jù)前需要全面檢索該物質(zhì)是否有致癌致畸性，例如氯乙酸CPDB數(shù)據(jù)TD50顯示陰性鹽酸鹽的藥物在重結(jié)晶過程中的接觸醇類容易產(chǎn)生氯代烷烴，單一鹵代物在M7中有36ug/day指導(dǎo)規(guī)則關(guān)注環(huán)氧丙醇、環(huán)氧氯丙烷、3-氯-1,2-丙二醇三者之間的轉(zhuǎn)化關(guān)系毒性數(shù)據(jù)會被不斷的更新，更多的研究數(shù)據(jù)會被不斷的上傳NameCASPDE(ug/day)Note氯甲烷74-87-31361ICH

M7氯乙烷75-00-31810ICH

M7氯異丙烷75-29-655500ECHA氯乙酸79-11-83000ECHA/CPDB甲醛50-00-01.35or

10000CPDB/ICH

M7乙醛75-07-0153CPDB丙二醛542-78-9122CPDB（鈉鹽）環(huán)氧丙醇556-52-54ICH

M7環(huán)氧氯丙烷106-89-82.96CPDB（TD50）3-氯-1,2-丙二醇96-24-2PMTDI

：4ug/kg/dayWHO/FAO1,3-二氯-2-丙醇96-23-110NTP12常見物質(zhì)的PDE數(shù)值舉例在檢索劑量數(shù)據(jù)前需要全面檢索該物8813最大日劑量報告限度鑒定限度界定限度≤2g0.05%0.10%或1.0mg（取最小值）0.15%或1.0mg（取最小值）>2g0.03%0.05%0.05%報告限度最大日劑量≤1g>1g限

度0.1%0.05%最大日劑量<1mg1～10mg>10mg

～2g>2g鑒定限度限

度1.0%或5ug(取最小值)0.5%或20ug(取最小值)0.2%或2mg(取最小值)0.10%最大日劑量<10mg10～100mg>100mg～2g>2g界定限度限

度1.0%或50ug

(取最小值)0.5%或200ug(取最小值)0.2%或3mg(取最小值)0.15%原料藥Q3A藥物雜質(zhì)的控制限度計算（）制劑Q3B新藥與仿制藥研究策略有顯著差異限度=PDE/日最大劑量PDE=TD50*體重/50000PDE=NOEL*體重/(F1*F2*F3*F4*F5)限度=TTC/日最大劑量由ppm推算NOEL

（ICH

Q3C）由LD50推算NOEL其他ICHQ3&M713最大日劑量報告限度鑒定限度界定限度≤2g0.05%0.18914PDE法計算限度實例(以三乙胺濃度限度計算為例)

（錯誤案例解析）公式1.

NOEL=LD50×70/2000（該公式來源于EMEA關(guān)于清潔驗證的指導(dǎo)原則）公式解釋：NOEL（NOAEL）數(shù)據(jù)如果能直接查到就不需要計算了，直接進入到第2個公式；其中60是指的人體平均體重為60Kg；2000是一個安全系數(shù)。查詢美國TOXNET數(shù)據(jù)庫，大鼠經(jīng)口的LD50=460mg/Kg，則NOEL=460×70/2000=16.1mg/Kg/day

（錯誤推算）PDE=NOEL（mg/Kg/day）×Weight

Adjustment（Kg）/(F1×F2×F3×F4×F5)PDE=16.1

mg/Kg/day×50Kg/(5×10×5×1×1)=3.22mg/day濃度限度（％）＝PDE（mg/day）/（1000×dose（g/day））×100％對于原料藥而言，dose均定為10g/day濃度限度（％）=3.22/(1000×10)

×100％=0.0322%（322ppm）F1：種屬之間的換算系數(shù)，代表由物種差異推導(dǎo)的變異系數(shù)，與體表面積相關(guān)F1=5:從大鼠劑量推斷人用劑量的系數(shù)；F1=12:從小鼠劑量推斷人用劑量的系數(shù)F1=2:從狗劑量推斷人用劑量的系數(shù)；F1=2.5:從兔劑量推斷人用劑量的系數(shù)F1=3:從猴子劑量推斷人用劑量的系數(shù)；F1=10:從其他動物劑量推斷人用劑量的系數(shù)對于三乙胺，上述LD50是以大鼠為試驗得來的數(shù)據(jù)，所以F1=5。F2：代表個體間的變異系數(shù)，其值為F2=10；F3：為短期接觸急性毒性研究的可變系數(shù)：F3=1，研究時間至少為動物壽命的一半（鼠、兔1年，貓、狗、猴7年）F3=1，器官形成的整個過程的生殖研究F3=2，對嚙齒類動物６個月研究或非嚙齒類動物3-5年的研究F3=5，對嚙齒類動物３個月研究或非嚙齒類動物２年的研究F3=10，更短時間的研究。在所有情況下，對研究時間介于上述時間點之間的研究，應(yīng)用較大的系數(shù)，如對嚙齒類動物９個月毒性研究，其系數(shù)用２。以上大鼠經(jīng)口的LD50值為急毒數(shù)據(jù)，根據(jù)歐盟數(shù)據(jù)經(jīng)驗，這個研究時間在3-6個月之間，因此，F(xiàn)3=5。F4：產(chǎn)生嚴(yán)重毒性情況的系數(shù)，如非遺傳致癌毒性、神經(jīng)毒性或致畸性，研究生殖毒性時，用以下系數(shù)：F4=1

與母體毒性有關(guān)的胎兒毒性;

F4=５

無母體毒性的胎兒毒性F4=５

受母體毒性影響的致畸反應(yīng);

F4=10

無母體毒性影響的致畸反應(yīng)因為三乙胺為非嚴(yán)重毒性，所以這里F4=1。F5：一個可變系數(shù)，用在無毒性反應(yīng)的劑量（NOEL）值時F5=1foraNOEL；F5=1-5foraNOAEL；F5=5-10foraLOEL；F5=10foraLowest-observed-adverse-effectlevel

(LOAEL)因為NOEL已經(jīng)確定，所以這里F5=1。當(dāng)研究沒有區(qū)分NOAEL和NOEL，且依據(jù)確定的PDE值選擇劑量時毒性不被認(rèn)為是“副作用”，則使用F5等于1，NOAEL用于多數(shù)元素的口服PDE值設(shè)定。三乙胺在ICH

Q

3C中屬于三類溶劑，限度：

0.514PDE法計算限度實例(以三乙胺濃度限度計算為例)（錯誤9015由LD50推算PDE值建議《原料藥工廠中清潔驗證指南》一文中的NOEL

的單位是mg/天，而不是上文公式中的mg/kg/天LD50計算NOEL的公式：NOEL=LD50×70/2000，公式中的70是歐洲人的評價體重如果需要用LD50計算NOEL用于計算PDE，推薦公式應(yīng)該是NOEL=LD50/2000

（見參考文獻）不推薦在基因毒物質(zhì)研究中使用推薦在包材研究的劑量計算中使用參考文獻：

D.W.

Layton;B.J.

Mallon;D.H.

Rosenblatt;M.J.

Small

Deriving

allowable

daily

intakes

for

systemic

toxicants

lacking

chronic

toxicity

data.RegulatoryToxicology&Pharmacology,1987,7(1)

:96-11215由LD50推算PDE值建議《原料藥工廠中清潔驗證指南》一91藥品雜質(zhì)引入風(fēng)險評估常見已知雜質(zhì)引入途徑起始物料及已知雜質(zhì)中間體試劑&溶劑&催化劑反應(yīng)副產(chǎn)物、降解雜質(zhì)常見未知雜質(zhì)引入途徑起始物料引入未知雜質(zhì)、起始物料雜質(zhì)產(chǎn)生的雜質(zhì)、生產(chǎn)設(shè)備引入的雜質(zhì)包材浸出物雜質(zhì)環(huán)境引入雜質(zhì)（生產(chǎn)用水等）需要重點做風(fēng)險評估工作藥品雜質(zhì)引入風(fēng)險評估常見已知雜質(zhì)引入途徑常見未知雜質(zhì)引入途徑92關(guān)于PDE法與TTC法管不住外包項目 6氯代丙醇響應(yīng)低，耐用性差當(dāng)使用多孔填充材料作為固定相時，分子排阻色譜（Sizeexclusion chromatography，SEC）和相互作用色譜潛在及未知雜質(zhì)研究策略討論5種測定甲磺酸酯分析方法比較LD50計算NOEL的公式：NOEL=LD50×70/2000，公式中的70是歐洲人的評價體重具有合適的樣品制備方式：直接溶解、溶解后沉淀、液液萃取、固體液萃取似是老生常談的雜質(zhì)研究對于無閾值效應(yīng)的遺傳毒性雜質(zhì)，如果每日攝入量低于1.“請補充提供或說明雜質(zhì)檢查方法與限度修改(制訂)的依據(jù)…”雜質(zhì)研究≠有關(guān)物質(zhì)檢查！ICHQ3D:元素雜質(zhì)的指導(dǎo)原則(2014.通則0531 超臨界流體色譜法《原料藥工廠中清潔驗證指南》一文中的NOEL的單位是mg/天，而不是上文公式中的“請結(jié)合本產(chǎn)品及起始原料工藝對雜質(zhì)進行補充研究…”PDE控制（存在報道）歐洲化學(xué)品管理局（ECHA）符合資質(zhì)的對照品：適合包裝、有COA安全性重點關(guān)注高毒性雜質(zhì)：致癌、致突變類雜雜質(zhì)17已知雜質(zhì)研究策略討論結(jié)構(gòu)已知的雜質(zhì)研究：起始物料及其已知雜質(zhì)、中間體、試劑、反應(yīng)副產(chǎn)物、降解產(chǎn)物根據(jù)工藝路線梳理出產(chǎn)品待研究的雜質(zhì)清單進行毒性雜質(zhì)評估分類：文獻報道、軟件預(yù)測根據(jù)各國藥典及ICH

QA\B\C規(guī)則分別建立有關(guān)物質(zhì)和溶劑殘留方法建立滿足專屬性和靈敏度的方法（LOQ<30%限度濃度），收集多批次API中目標(biāo)雜質(zhì)含量基于已有的有關(guān)物質(zhì)方法和溶劑殘留方法，增加供試品濃度或改變檢測器基于雜質(zhì)檢出情況制定雜質(zhì)添加實驗，考察工藝的雜質(zhì)的去除能力基于雜質(zhì)分類、毒性評估、產(chǎn)品檢出情況制定方法學(xué)驗證策略及產(chǎn)品控制策略關(guān)于PDE法與TTC法17已知雜質(zhì)研究策略討論結(jié)構(gòu)已知的雜質(zhì)9318潛在及未知雜質(zhì)研究策略討論潛在及未知雜質(zhì)來源：起始物料引入未知雜質(zhì)、溶劑中雜質(zhì)、包材浸出物雜質(zhì)、輔料引入雜質(zhì)、生產(chǎn)設(shè)備引入根據(jù)供應(yīng)商提供的工藝路線梳理雜質(zhì)清單及潛在雜質(zhì)，分別對元素雜質(zhì)和有機雜質(zhì)進行分類研究針對元素雜質(zhì)采取ICPMS全質(zhì)量數(shù)掃描（69種）和

35種元素半定量掃描針對揮發(fā)及半揮發(fā)雜質(zhì)采用GCMS進行全質(zhì)量數(shù)掃描（譜庫匹配）及半定量分析（SIM模式）針對不揮發(fā)雜質(zhì)采用LCMS

或

LC-MSMS進行全質(zhì)量數(shù)掃描及半定量分析（SIM模式）購買疑似或近似雜質(zhì)進行分析比對，確定研究目標(biāo)根據(jù)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)評估雜質(zhì)的毒性，確定雜質(zhì)的研究限度對比多批次中起始物料及其關(guān)聯(lián)的原料藥中雜質(zhì)的檢出情況根據(jù)雜質(zhì)的來源風(fēng)險及檢出情況，制定雜質(zhì)的控制策略18潛在及未知雜質(zhì)研究策略討論潛在及未知雜質(zhì)來源：起始物料引94二、痕量雜質(zhì)分析方法的建立1.痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)與目標(biāo)2.基于結(jié)構(gòu)特性的分析方法決策思路3.痕量分析方法建立步驟4.痕量物質(zhì)定量方法的要素二、痕量雜質(zhì)分析方法的建立1.痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)與目標(biāo)951.痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)與目標(biāo)痕量雜質(zhì)分析的挑戰(zhàn)含量低，選擇性要求高，高靈敏度的儀器（GC-MS，LC-MSMS、ICPMS

等）雜質(zhì)結(jié)構(gòu)多樣性和差異大，需要多種分析手段和方法樣品基質(zhì)復(fù)雜，需要合適的前處理方法進行分離，純化，富集有些雜質(zhì)具有“