ly11 DNA重組技術(shù)的基本工具課件

乳汁中含有人生長(zhǎng)激素的轉(zhuǎn)基因牛(阿根廷)轉(zhuǎn)魚抗寒基因的番茄乳汁中含有人生長(zhǎng)激素的轉(zhuǎn)基因牛(阿根廷)轉(zhuǎn)魚抗寒基因的番茄專題１：基因工程專題１：基因工程基因工程：

基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),并通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工，因此叫做DNA的重組技術(shù)。注：基因工程能定向改造生物的遺傳性狀基因工程：基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本過(guò)程實(shí)質(zhì)（原理）結(jié)果基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)生物體外基因DNA分子水平人類需要的基因產(chǎn)物剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)(人工）基因重組基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本過(guò)程實(shí)質(zhì)（原理）結(jié)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗蟲棉普通棉轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗蟲棉普通棉基因工程培育抗蟲棉的簡(jiǎn)要過(guò)程：普通棉花(無(wú)抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因與運(yùn)載體DNA拼接導(dǎo)入棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？基因工程培育抗蟲棉的簡(jiǎn)要過(guò)程：普通棉花(無(wú)抗蟲特性)蘇云金芽基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來(lái)關(guān)鍵步驟二：抗蟲基因與運(yùn)載體DNA連接關(guān)鍵步驟三：抗蟲基因?qū)胧荏w(棉花)細(xì)胞基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽1.1DNA重組技術(shù)的基本工具：1、限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”2、DNA連接酶——“分子縫合針”3、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”1.1DNA重組技術(shù)的基本工具：1、限制性核酸內(nèi)切酶——1、限制性核酸內(nèi)切酶2特點(diǎn)：識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，在特定的位點(diǎn)切割（特異性）。

1分布：

主要在原核生物中

1、限制性核酸內(nèi)切酶2特點(diǎn)：識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷限制酶所識(shí)別的序列有什么特點(diǎn)？限制酶所識(shí)別的序列，無(wú)論是6個(gè)堿基還是4個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線,中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。限制酶識(shí)別序列的中軸線限制酶所識(shí)別的序列有什么特點(diǎn)？3結(jié)果：打開(kāi)磷酸二酯鍵，產(chǎn)生黏性末端或平末端。3結(jié)果：打開(kāi)磷酸二酯鍵，產(chǎn)生黏性末端或平末端。磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵G1234512345AG1234512345A什么叫黏性末端？

當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開(kāi)時(shí)，被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。EcoRⅠ什么叫黏性末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開(kāi)什么叫平末端？

當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)，切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。什么叫平末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)1.黏性末端和平末端都由限制酶進(jìn)行切割產(chǎn)生，下列說(shuō)法正確的是（）A.切割這兩種末端可以用同一種限制酶B.切割這兩種末端需不同的限制酶C.這兩種末端可以相互拼接D.拼接時(shí)，限制酶參與拼接過(guò)程

B1.黏性末端和平末端都由限制酶進(jìn)行切割產(chǎn)生，下列說(shuō)法正確的是如果把兩種不同來(lái)源的DNA的用同一種限制酶（如EcoRⅠ）來(lái)切割，會(huì)怎樣呢？

會(huì)產(chǎn)生互補(bǔ)的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合起來(lái)，就似乎可以合成重組的DNA分子了。如果把兩種不同來(lái)源的DNA的用同一種限制酶（如EcoRⅠ）來(lái)二、“分子縫合針”

——DNA連接酶1、種類：2、作用部位：E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶

磷酸二酯鍵

DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，即把梯子兩邊扶手的斷口連接起來(lái)，這樣一個(gè)重組的DNA分子就形成了。二、“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：E·col……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同來(lái)源的DNA片段混合將不同種來(lái)源的DNA片段連接起來(lái)生物A基因片段生物B基因片段……G

AATTC…………CTTAA

G…………G

AATTC…………CTTAA

G……酶切……GAATTC…………GAATTC……EcoRⅠ……GAAP6尋根問(wèn)底：DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？P6尋根問(wèn)底：DNA連接酶與DNA聚合酶DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位模板結(jié)果雙鏈單鏈DNA片段間形成磷酸二酯鍵單個(gè)核苷酸與DNA片段間形成磷酸二酯鍵不需要模板需要模板將DNA片段連接成重組DNA分子合成新的DNA分子DNA連接酶與DNA聚合酶DNA連接酶DNA聚合酶連接連接部2.關(guān)于DNA連接酶的敘述正確的是（）A.DNA連接酶將單個(gè)核苷酸連接到DNA片段上B.DNA連接酶將兩條單鏈DNA連接起來(lái)C.DNA連接酶可形成磷酸二酯鍵D.DNA連接酶與DNA聚合酶作用相同C2.關(guān)于DNA連接酶的敘述正確的是（）C

要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來(lái)的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，首先得將這個(gè)基因送到乙生物的細(xì)胞內(nèi)去！能將外源基因送入細(xì)胞的工具就是運(yùn)載體。要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來(lái)的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表三、“分子運(yùn)輸車”

——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體⒈載體需要的條件：⑴有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)（每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè)），以連接外源基因⑵對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害⑶具有自我復(fù)制能力或整合到染色體的DNA

上，隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制⑷有某些標(biāo)記基因，便于篩選⒉運(yùn)載體的種類：⑴細(xì)菌的質(zhì)粒(plasmid)⑵λ噬菌體衍生物或某些動(dòng)植物病毒⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？⑴作為分子運(yùn)輸車——載體，如果沒(méi)有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？⑵霍亂菌的質(zhì)粒有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來(lái)做分子運(yùn)輸車嗎？

⑷目的基因有沒(méi)有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？

質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體之一，真正用于基因工程的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)?；A(chǔ)上人工改造而成的。三、“分子運(yùn)輸車”——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體⒈載體需要的條能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在，將來(lái)可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在3.下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（）

A.重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和載體

B.所有限制性核酸內(nèi)切酶都只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列

C.一般選用細(xì)菌的質(zhì)粒作為基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體

D.細(xì)菌體內(nèi)的質(zhì)?？梢灾苯幼鳛榛蚬こ讨械妮d體C3.下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（）C4.下列關(guān)于質(zhì)粒的敘述，正確的是（）

A.質(zhì)粒是廣泛存在于細(xì)菌細(xì)胞中的一種顆粒狀細(xì)胞器

B.質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中能夠自我復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子

C.質(zhì)粒只有在導(dǎo)入宿主細(xì)胞后才能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制

D.細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制過(guò)程一定是在宿主細(xì)胞外獨(dú)立進(jìn)行的

BB限制酶在原核生物中作用：切割外源DNA，使之失效，從而達(dá)到保護(hù)身的目的。為什么限制酶不剪切自身的DNA？1、其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識(shí)別切割序列2、或者通過(guò)甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開(kāi)。

限制酶在原核生物中作用：模擬制作：用EcoRⅠ在特定部位對(duì)某載體DNA進(jìn)行模擬切割，并將模擬毒蛋白基因取出，再用膠紙模擬基因種間連接。模擬制作：用EcoRⅠ在特定部位對(duì)某載體DNA進(jìn)行模擬切……TCCTAG……AGGATCTTAAAATTCTCGGTATGGAGCCATACTTAAAATTCCATAC……GGTATG…………ATAGCATGCTATCCATG……TATCGTACGATAGGTACTTAAAATTCGGCATAC……GCCGTATG……重組DNA分子的模擬操作……TCCTAG……AGGATCTTAAAATTCTCGGT基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口DNA

1．下列四個(gè)DNA分子片段，彼此間具有互補(bǔ)黏性末端的一組是（）

A．①②

B．②③

C．③④

D．②④練習(xí)B1．下列四個(gè)DNA分子片段，彼此間具有互補(bǔ)黏性末端的一組2、（雙選）下列關(guān)于限制酶的說(shuō)法不正確的是（）A.限制酶廣泛存在于各種生物中，微生物中很少分布B.自然界中限制酶的天然作用是用來(lái)提取目的基因C.不同的限制酶切割的切點(diǎn)不同D．一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列AB

2、（雙選）下列關(guān)于限制酶的說(shuō)法不正確的是（3、圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制性內(nèi)切酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是（）

A.①②③④B.①②④③

C.①④②③

D.①④③②C3、圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示4、限制酶是一種核酸切割酶，可辨識(shí)并切割DNA分子上特定的核苷酸堿基序列。下圖為四種限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨識(shí)序列。箭頭表示每一種限制酶的特定切割部位，其中哪兩種限制酶所切割出來(lái)的DNA片段末端可以互補(bǔ)黏合？其正確的末端互補(bǔ)序列為何？（）

A.BamHI和EcoRI；末端互補(bǔ)序列—AATT—B.BamHI和HindⅢ；末端互補(bǔ)序列—GATC—C.EcoRI和HindⅢ；末端互補(bǔ)序列—AATT—D.BamHI和BglII；末端互補(bǔ)序列—GATC—D4、限制酶是一種核酸切割酶，可辨識(shí)并切割DNA分子上特定的核DNA重組技術(shù)的基本工具“分子手術(shù)刀”──“分子縫合針”──“分子運(yùn)輸車”──限制酶DNA連接酶基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體課本知識(shí)回顧DNA重組技術(shù)的基本工具“分子手術(shù)刀”──“分子縫合針”限制性核酸內(nèi)切酶主要是從的一種酶。識(shí)別雙鏈DNA分子的某種，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的斷開(kāi)。形成兩種末端原核生物中分離純化出來(lái)特定的核苷酸序列磷酸二酯鍵黏性末端平末端限制性核酸內(nèi)切酶主要是從二、“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：2、作用部位：兩類E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶磷酸二酯鍵二、“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：兩類E·c基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體通常有三種:在進(jìn)行基因工程操作中,真正被用作載體的質(zhì)粒都是在基礎(chǔ)上進(jìn)行過(guò)的質(zhì)粒λ噬菌體衍生物動(dòng)植物病毒天然質(zhì)粒人工改造基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體通常有三種:質(zhì)粒λ噬菌體衍生物動(dòng)植物病演講完畢，謝謝觀看！演講完畢，謝謝觀看！乳汁中含有人生長(zhǎng)激素的轉(zhuǎn)基因牛(阿根廷)轉(zhuǎn)魚抗寒基因的番茄乳汁中含有人生長(zhǎng)激素的轉(zhuǎn)基因牛(阿根廷)轉(zhuǎn)魚抗寒基因的番茄專題１：基因工程專題１：基因工程基因工程：

基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì),并通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù),賦予生物以新的遺傳特性,從而創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工，因此叫做DNA的重組技術(shù)。注：基因工程能定向改造生物的遺傳性狀基因工程：基因工程是指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本過(guò)程實(shí)質(zhì)（原理）結(jié)果基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)生物體外基因DNA分子水平人類需要的基因產(chǎn)物剪切→拼接→導(dǎo)入→表達(dá)(人工）基因重組基因工程的別名操作環(huán)境操作對(duì)象操作水平基本過(guò)程實(shí)質(zhì)（原理）結(jié)轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗蟲棉普通棉轉(zhuǎn)基因抗蟲棉抗蟲棉普通棉基因工程培育抗蟲棉的簡(jiǎn)要過(guò)程：普通棉花(無(wú)抗蟲特性)蘇云金芽孢桿菌提取抗蟲基因與運(yùn)載體DNA拼接導(dǎo)入棉花細(xì)胞(含抗蟲基因)棉花植株(有抗蟲特性)上述培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟是什么？基因工程培育抗蟲棉的簡(jiǎn)要過(guò)程：普通棉花(無(wú)抗蟲特性)蘇云金芽基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)提取出來(lái)關(guān)鍵步驟二：抗蟲基因與運(yùn)載體DNA連接關(guān)鍵步驟三：抗蟲基因?qū)胧荏w(棉花)細(xì)胞基因工程培育抗蟲棉的關(guān)鍵步驟：關(guān)鍵步驟一：抗蟲基因從蘇云金芽1.1DNA重組技術(shù)的基本工具：1、限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”2、DNA連接酶——“分子縫合針”3、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”1.1DNA重組技術(shù)的基本工具：1、限制性核酸內(nèi)切酶——1、限制性核酸內(nèi)切酶2特點(diǎn)：識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷酸序列，在特定的位點(diǎn)切割（特異性）。

1分布：

主要在原核生物中

1、限制性核酸內(nèi)切酶2特點(diǎn)：識(shí)別雙鏈DNA分子中特定核苷限制酶所識(shí)別的序列有什么特點(diǎn)？限制酶所識(shí)別的序列，無(wú)論是6個(gè)堿基還是4個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線,中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的。限制酶識(shí)別序列的中軸線限制酶所識(shí)別的序列有什么特點(diǎn)？3結(jié)果：打開(kāi)磷酸二酯鍵，產(chǎn)生黏性末端或平末端。3結(jié)果：打開(kāi)磷酸二酯鍵，產(chǎn)生黏性末端或平末端。磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵G1234512345AG1234512345A什么叫黏性末端？

當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開(kāi)時(shí)，被限制酶切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，帶有幾個(gè)伸出的核苷酸，他們之間正好互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。EcoRⅠ什么叫黏性末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線兩側(cè)切開(kāi)什么叫平末端？

當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)，切開(kāi)的DNA兩條單鏈的切口，是平整的，這樣的切口叫平末端。什么叫平末端？當(dāng)限制酶從識(shí)別序列的中心軸線處切開(kāi)時(shí)1.黏性末端和平末端都由限制酶進(jìn)行切割產(chǎn)生，下列說(shuō)法正確的是（）A.切割這兩種末端可以用同一種限制酶B.切割這兩種末端需不同的限制酶C.這兩種末端可以相互拼接D.拼接時(shí)，限制酶參與拼接過(guò)程

B1.黏性末端和平末端都由限制酶進(jìn)行切割產(chǎn)生，下列說(shuō)法正確的是如果把兩種不同來(lái)源的DNA的用同一種限制酶（如EcoRⅠ）來(lái)切割，會(huì)怎樣呢？

會(huì)產(chǎn)生互補(bǔ)的黏性末端，然后讓兩者的黏性末端黏合起來(lái)，就似乎可以合成重組的DNA分子了。如果把兩種不同來(lái)源的DNA的用同一種限制酶（如EcoRⅠ）來(lái)二、“分子縫合針”

——DNA連接酶1、種類：2、作用部位：E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶

磷酸二酯鍵

DNA連接酶可把黏性末端之間的縫隙“縫合”起來(lái)，即把梯子兩邊扶手的斷口連接起來(lái)，這樣一個(gè)重組的DNA分子就形成了。二、“分子縫合針”——DNA連接酶1、種類：E·col……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……EcoRⅠ……GAATTC…………CTTAAG…………GAATTC…………CTTAAG……不同來(lái)源的DNA片段混合將不同種來(lái)源的DNA片段連接起來(lái)生物A基因片段生物B基因片段……G

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G……酶切……GAATTC…………GAATTC……EcoRⅠ……GAAP6尋根問(wèn)底：DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？P6尋根問(wèn)底：DNA連接酶與DNA聚合酶DNA連接酶DNA聚合酶連接DNA鏈連接部位模板結(jié)果雙鏈單鏈DNA片段間形成磷酸二酯鍵單個(gè)核苷酸與DNA片段間形成磷酸二酯鍵不需要模板需要模板將DNA片段連接成重組DNA分子合成新的DNA分子DNA連接酶與DNA聚合酶DNA連接酶DNA聚合酶連接連接部2.關(guān)于DNA連接酶的敘述正確的是（）A.DNA連接酶將單個(gè)核苷酸連接到DNA片段上B.DNA連接酶將兩條單鏈DNA連接起來(lái)C.DNA連接酶可形成磷酸二酯鍵D.DNA連接酶與DNA聚合酶作用相同C2.關(guān)于DNA連接酶的敘述正確的是（）C

要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來(lái)的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，首先得將這個(gè)基因送到乙生物的細(xì)胞內(nèi)去！能將外源基因送入細(xì)胞的工具就是運(yùn)載體。要讓一個(gè)從甲生物細(xì)胞內(nèi)取出來(lái)的基因在乙生物體內(nèi)進(jìn)行表三、“分子運(yùn)輸車”

——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體⒈載體需要的條件：⑴有一個(gè)至多個(gè)限制酶切點(diǎn)（每種酶的切點(diǎn)最好只有一個(gè)），以連接外源基因⑵對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害⑶具有自我復(fù)制能力或整合到染色體的DNA

上，隨染色體DNA進(jìn)行同步復(fù)制⑷有某些標(biāo)記基因，便于篩選⒉運(yùn)載體的種類：⑴細(xì)菌的質(zhì)粒(plasmid)⑵λ噬菌體衍生物或某些動(dòng)植物病毒⑶假如目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞后不能復(fù)制或不能轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)基因生物能有預(yù)想的效果嗎？⑴作為分子運(yùn)輸車——載體，如果沒(méi)有切割位點(diǎn)將會(huì)怎樣？⑵霍亂菌的質(zhì)粒有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，你會(huì)用它來(lái)做分子運(yùn)輸車嗎？

⑷目的基因有沒(méi)有進(jìn)入受體細(xì)胞，如何去發(fā)現(xiàn)？

質(zhì)粒是最常用的運(yùn)載體之一，真正用于基因工程的質(zhì)粒都是在天然質(zhì)?；A(chǔ)上人工改造而成的。三、“分子運(yùn)輸車”——基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體⒈載體需要的條能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在，將來(lái)可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。能復(fù)制并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)有標(biāo)記基因的存在3.下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（）

A.重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和載體

B.所有限制性核酸內(nèi)切酶都只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列

C.一般選用細(xì)菌的質(zhì)粒作為基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體

D.細(xì)菌體內(nèi)的質(zhì)粒可以直接作為基因工程中的載體C3.下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（）C4.下列關(guān)于質(zhì)粒的敘述，正確的是（）

A.質(zhì)粒是廣泛存在于細(xì)菌細(xì)胞中的一種顆粒狀細(xì)胞器

B.質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中能夠自我復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子

C.質(zhì)粒只有在導(dǎo)入宿主細(xì)胞后才能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制

D.細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制過(guò)程一定是在宿主細(xì)胞外獨(dú)立進(jìn)行的

BB限制酶在原核生物中作用：切割外源DNA，使之失效，從而達(dá)到保護(hù)身的目的。為什么限制酶不剪切自身的DNA？1、其DNA分子中或者不具備這種限制酶的識(shí)別切割序列2、或者通過(guò)甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開(kāi)。

限制酶在原核生物中作用：模擬制作：用EcoRⅠ在特定部位對(duì)某載體DNA進(jìn)行模擬切割，并將模擬毒蛋白基因取出，再用膠紙模擬基因種間連接。模擬制作：用EcoRⅠ在特定部位對(duì)某載體DNA進(jìn)行模擬切……TCCTAG……AGGATCTTAAAATTCTCGGTATGGAGCCATACTTAAAATTCCATAC……GGTATG…………ATAGCATGCTATCCATG……TATCGTACGATAGGTACTTAAAATTCGGCATAC……GCCGTATG……重組DNA分子的模擬操作……TCCTAG……AGGATCTTAAAATTCTCGGT基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個(gè)切口DNA

1．下列四個(gè)DNA分子片段，彼此間具有互補(bǔ)黏性末端的一組是（）

A．①②

B．②③

C．③④

D．②④練習(xí)B1．下列四個(gè)DNA分子片段，彼此間具有互補(bǔ)黏性末端的一組2、（雙選）下列關(guān)于限制酶的說(shuō)法不正確的是（）A.限制酶廣泛存在于各種生物中，微生物中很少分布B.自然界中限制酶的天然作用是用來(lái)提取目的基因C.不同的限制酶切割的切點(diǎn)不同D．一種限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列AB

2、（雙選）下列關(guān)于限制酶的說(shuō)法不正確的是（3、圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制性內(nèi)切