Na+K+--ATP 酶活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)-可見(jiàn)分光光度法UPLC-MS-4572

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第頁(yè)Na+K+-ATP酶檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)貨號(hào)：UPLC-MS-4572規(guī)格：50T/24S

可見(jiàn)分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一液體30mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體4mL×1瓶2-8℃保存試劑三粉劑×2支-20℃保存試劑四液體2mL×1瓶2-8℃保存試劑五液體3mL×1瓶2-8℃保存試劑六粉劑×1瓶2-8℃保存試劑七粉劑×1瓶2-8℃保存試劑八液體15mL×1瓶常溫保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、試劑三：用時(shí)取1支加1mL蒸餾水，現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃分裝保存一周。215mL2-8℃保存兩周。315mL2-8℃保存兩周。4μmol/mL200.1mL1.9mL蒸餾水充分混勻，0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液。5=2:1:1:1的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若變色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量現(xiàn)用現(xiàn)配。注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。產(chǎn)品說(shuō)明：Na+K+ATPATPADP和無(wú)機(jī)磷。Na+K+-ATPATPADPATP酶活性。ATP ADP+PiNa+K+-ATPaseMolybdenumBluePhosphomolybdateBlue（660nm）注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備：5001mL超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（200w3s10s30次）；8000g4℃10min，取上清，置冰上待測(cè)。0.1g1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿。8000g4℃10min2、血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至660nm，蒸餾水調(diào)零。2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）試劑名稱對(duì)照管測(cè)定管試劑一（μL）13090試劑二（μL）8080試劑三（μL）4040試劑四（μL）-40樣本（μL）-200混勻，37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴10min試劑五（μL）5050樣本（μL）200-混勻，4000g，常溫離心10min，取上清液3、定磷(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑)試劑名稱空白管標(biāo)準(zhǔn)管對(duì)照管測(cè)定管0.5μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液（μL）-100--上清液（μL）--100100蒸餾水（μL）100定磷試劑（μL）100010001000100010660nmAAA1-2次。三、Na+K+-ATP酶活計(jì)算1、血清（漿）Na+K+-ATPase活力的計(jì)算：定義：規(guī)定每小時(shí)每毫升血清（漿）中Na+K+-ATP酶分解ATP產(chǎn)生1μmoL無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。Na+K+-ATP酶活力（U/mL）=C標(biāo)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V總÷V樣÷T=7.5×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中Na+K+-ATPase活力的計(jì)算：按蛋白濃度計(jì)算：定義：規(guī)定每小時(shí)每毫克組織蛋白中Na+K+-ATP酶分解ATP產(chǎn)生1μmoL無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。Na+K+-ATP酶活力（U/mgprot）=C標(biāo)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V總÷（Cpr×V樣）÷T=7.5×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算：定義：規(guī)定每小時(shí)每克組織中Na+K+-ATP酶分解ATP產(chǎn)生1μmoL無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。Na+K+-ATP酶活力（U/g質(zhì)量）=C標(biāo)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：1Na+K+-ATPATP1μmoL無(wú)機(jī)磷的量為一個(gè)酶活力單位。Na+K+-ATP酶活力（U/104cell）=C標(biāo)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.5mL；V樣：加入樣本體積，0.2mL；V加入試劑一體積，1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1/6mg