焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP）活性檢測(cè)試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4271

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！-上海液質(zhì)檢測(cè)技術(shù)有限公司第第3頁，共3頁焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP）活性檢測(cè)試劑盒說明書微量法注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。貨號(hào)：UPLC-MS-4271規(guī)格：100T/96S產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體110mL×1瓶4℃保存試劑一液體15mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶-20℃保存試劑三粉劑×1瓶-20℃保存試劑四粉劑×2支4℃保存試劑五粉劑×1支-20℃保存試劑六液體30μL×1支4℃保存溶液的配制：12.5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周，禁止反復(fù)凍融。22.5mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存兩周，禁止反復(fù)凍融。310.3mL保存一周（11支粉劑）40.3mL蒸餾水溶解，-20℃分裝保存兩周，禁止反復(fù)凍融。50.3mL蒸餾水溶解，4℃保存一周，也可按比例現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說明：-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶（PFP，EC0）激酶一樣催化果糖-6-PEP重要作用。PFP6-1,6-二磷酸果糖，它在醛縮酶和磷酸丙糖異構(gòu)酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)榱姿岫u丙酮，α-NADH3-PFP的活性的高低。注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量石英比色皿/96UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)1：5~10的比例（0.1g1mL提取液）加入4℃，20000g15min，取上清置冰上待測(cè)；2、細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）500~1000：1的比例（5001mL提取液，冰浴超聲波破碎細(xì)胞（300w373min4℃，20000g取上清置冰上待測(cè)；3、液體：直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。2、操作表：試劑名稱（μL）測(cè)定管空白管試劑一134134試劑二2020試劑三2020試劑四22試劑五22試劑六22樣本20-蒸餾水-20/96V37340nm130minA1A1A2ΔA=（A1測(cè)定管-A2測(cè)定管空白管-A2空白管。1-2次。三、焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移酶活性的計(jì)算1、按微量石英比色皿計(jì)算：按照樣本蛋白濃度計(jì)算1nmolNADHPFP（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T=53.59×ΔA÷Cpr按照樣本質(zhì)量計(jì)算1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。PFP（U/g質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V提取T=53.59×ΔA÷W按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算酶活單位定義：每104個(gè)細(xì)胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。PFP（U/104cell）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷(V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V提取)÷T=53.59×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量按照液體體積計(jì)算1nmolNADHPFP（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反總×109÷V樣÷T=53.59×ΔAV摩爾消光系數(shù)，6.22×1031W：樣本質(zhì)量，g；109：換算系數(shù)，1mol=109nmol。2、按96