磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4207

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4207規(guī)格：100T/96S產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時(shí)聯(lián)系工作人員。

微量法試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體100mL×1瓶4℃保存試劑一液體15mL×1瓶4℃保存試劑二液體2mL×1瓶4℃保存試劑三液體2mL×1瓶4℃保存試劑四粉劑×1瓶-20℃保存試劑五粉劑×1瓶-20℃保存試劑六原液液體10μL×1支4℃保存試劑六稀釋液液體5mL×1瓶4℃保存試劑七粉劑×1瓶-20℃保存溶液的配制：12mL雙蒸水充分溶解待用；可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融；22mL雙蒸水充分溶解待用；可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融；3、試劑六原液：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中；4、試劑六工作液配制：將試劑六原液：試劑六稀釋液=1.6μL：328.4μL稀釋，用多少配多少；5、試劑七：臨用前加入5mL雙蒸水，用不完的試劑可分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融；6、工作液的配制：根據(jù)樣本數(shù)量按體積比試劑二、試劑三、試劑四、試劑五、試劑六工作液、試劑七=15:15:15:15:19:19的比例混合。工作液現(xiàn)用現(xiàn)配。產(chǎn)品說明：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（EC1）廣泛存在于植物和微生物中，是催化磷酸烯醇式丙酮酸與二氧化碳C4CAMCO24PEPCCO2HPONADH生NAD+340nmNADHPEPC活性。4注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。需自備的儀器和用品：紫外分光光度計(jì)//96UV/冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1提取液體積(mL)的比例（0.1g1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿，然后，8000g，4℃20min。2（104個(gè)提取液體積（mL）500~1000：1的比例（500萬細(xì)1mL提取液（300w373min20min，取上清置于冰上待測。二、測定步驟1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。2、操作表：試劑名稱(μL)測定管空白管試劑一9090工作液9090樣本20-蒸餾水-20在微量石英比色皿/96UV340nm10sA1，迅速30℃5mi（30℃310s時(shí)的吸光值ΔA測定管=A1測定-A2空白管=A1空白-A2測定管-ΔA空白管（1-2次）三、PEPC酶活計(jì)算1、按微量石英比色皿計(jì)算：按蛋白濃度計(jì)算mg1nmolNADHPEPC酶活（U/mgprot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=321×ΔA÷Cpr按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。PEPC酶活（U/g質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=321×ΔA÷W按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算酶活定義：每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。C酶活（04cel）=ΔA（ε×d）×19×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）÷T=321×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量（萬個(gè)）摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol0.02mLCprg/mLWgV1m：反應(yīng)時(shí)間：5min；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。2、按96孔UV板計(jì)算：將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm（96孔板光徑）進(jìn)行計(jì)算即可。注意事項(xiàng)：1、為保證實(shí)