酸性木聚糖酶（ACX）活性檢測(cè)試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-4236

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可見分光光度法試劑名稱規(guī)格保存條件緩沖液液體75mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體4mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體15mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體5mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：1、試劑一：臨用前加入12mL蒸餾水使用，2-8℃保存3個(gè)月。2、標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入667μL緩沖液配成100μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，2-8℃保存8周。(EC)β-（ACX）ACX3,5-540nm540nm吸光值增加速率，可計(jì)算ACX活力Xylan

ACX

ReducingSugarReducingSugar+3,5-DinitrosalicylicAcid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。1mL一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）8000rpm，4℃15min1mg1mL100.1g1mL8000rpm，4℃15min10二、測(cè)定步驟130min540nm2、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：取20μL100μmol/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)液，加入980μL緩沖液，充分混勻，配制成2μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實(shí)驗(yàn)中每管需要200μL，為減小實(shí)驗(yàn)誤差，故配制大體積。）3、樣本測(cè)定：（在EP管中加入下列試劑）試劑名稱（μL）對(duì)照管測(cè)定管空白管標(biāo)準(zhǔn)管樣本200200--2μmol/mL木糖標(biāo)準(zhǔn)品200緩沖液300300500300試劑一-200200200混勻，50℃水浴中反應(yīng)30min，立即沸水浴中10min滅活。（注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水，改變了反應(yīng)體系）試劑一200試劑二300300300300試劑三100100100100混勻，沸水浴中顯色5min（注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系），冷卻后盡快測(cè)定各管540nm下的吸光度，分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只需做1-2次。三、ACX活性計(jì)算1、發(fā)酵液ACX活力計(jì)算：50℃，pH4.81μmolACX活力（U/mL）=C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷T=0.067×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）C標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2μmol/mL；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。2、酶干粉ACX活力計(jì)算：50℃，pH4.81μmolACX活力（U/mg）=10×C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V提取÷W1÷T=0.67×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W110：樣本稀釋倍數(shù)，10倍；C標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2μmol/mL；V提取：加入緩沖液體積，1mL；W1：酶干粉重量，mg；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。3、組織中ACX活力計(jì)算：酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每mg組織蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個(gè)酸性木聚糖酶的活力單位。ACX活力（U/mgprot）=10×C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V樣本÷(V樣本×Cpr)÷T=0.67×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷Cpr50℃，pH4.81μmolACX活力（U/g質(zhì)量）=10×C標(biāo)準(zhǔn)×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）×V提取÷W2÷T=0.67×（A測(cè)定-A對(duì)照）÷（A標(biāo)準(zhǔn)-A空白）÷W210：樣本稀釋倍數(shù)，10倍；C標(biāo)準(zhǔn)：木糖標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，2μmol/mL；V提?。杭尤刖彌_液體積，1mL；W2：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min；C