中性木聚糖酶（NEX）活性檢測試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-4234

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可見分光光度法試劑名稱規(guī)格保存條件緩沖液液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體10mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體15mL×1瓶2-8℃保存標準品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：標準品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配成100μmol/mL的標準品溶液，2-8℃保存兩周。(EC)\hβ-\h（NEX）pH6-8NEX3,5-540nm540nm吸光值增加速率，可計算NEX活力。Xylan

NEX

ReducingSugarReducingSugar+3,5-DinitrosalicylicAcid 3-Amino-5-Nitrosalicylate（540nm）注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。低溫離心機、可見分光光度計、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1、細胞或微生物樣本發(fā)酵液的制備：發(fā)酵液于8000rpm，4℃，離心15min，取上清，置于冰上待測。2、組織：稱取約0.1g組織，加入1mL緩沖液，冰上充分研磨。8000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。31mg1mL130min540nm2、標準品稀釋：取20μL100μmol/mL木糖標準液，加入980μL蒸餾水，充分混勻，配制成2μmol/mL的木糖標準液備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。（實驗中每管需要200μL，為減小實驗誤差，故配制大體積。）3/即取50μL/450μL。4、樣本測定：加入試劑對照管測定管標準管空白管樣本（μL）200200標準溶液（μL）200蒸餾水（μL）200緩沖液（μL）300300300300試劑一（μL）-200200200混勻，蓋緊瓶蓋，50℃水浴，反應30min，立即沸水浴10min滅活。（注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應體系）試劑一（μL）200-試劑二（μL）300300300300混勻，沸水浴顯色5min（注意不要讓蓋子爆開，以免進水改變了反應體系），冰浴冷卻后盡快測量540nm波長下的吸光值A對照管、A測定管、A標準管、A空白管，計算ΔA測定=A測定管-A對照管，ΔA標準=A標準管-A空白管?？瞻坠芎蜆藴使苤恍枳?-2次。三、NEX計算公式NEX50℃，pH6.01μmolNEX活力（U/mL）=[ΔA測定÷(ΔA標準÷C標準)]÷T=0.067×ΔA測定÷ΔA標準酶干粉NEX50℃，pH6.01μmolNEX活力（U/mg）=[ΔA測定÷(ΔA標準÷C標準)]×V樣本×10÷(V樣本×W酶÷V提取)÷T=0.67×ΔA測定÷ΔA標準÷W酶組織中NEXmg1μmolNEX活力（U/mgprot）=[ΔA測定÷(ΔA標準÷C標準)]×V樣本×10÷(V樣本×Cpr)÷T=0.67×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr酶活定義：50℃，pH6.0條件下，每g組織每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1μmol還原糖所需的酶量為一個中性木聚糖酶的活力單位。NEX活力（U/g質(zhì)量）=[ΔA測定÷(ΔA標準÷C標準)]×V樣本×10÷(V樣本×W÷V提取)÷T=0.67×ΔA測定÷ΔA標準÷WC標準：木糖標準溶液，2μmol/mL；V樣本：加入的樣本體積，0.2mL；W酶：酶干粉的質(zhì)量，mg；T：反應時間，30min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：組織樣本質(zhì)量，g；V提?。杭尤刖彌_