人乳頭瘤病毒熒光定量PCR法檢測課件

人乳頭瘤病毒(HPV)人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)屬于乳頭多瘤空泡病毒科(papovaviridae)乳頭瘤病毒屬，是一種可以引起人類黏膜組織良性及惡性腫瘤的病毒。人乳頭瘤病毒直徑為55nm，分子量為54000道爾頓，為對稱型的20面體，是由DNA核心和蛋白衣殼組成的無包膜雙鏈DNA病毒。由DNA（8000個bps）分子的病毒顆粒及包裹其外的衣殼蛋白組成。龐大家族：目前有100+種型別HPV，大約20種型別與癌癥相關(guān)，根據(jù)HPV致癌危險性大小不同，分為和低危型與宮頸癌相關(guān)的高危型HPV有:

16,18,31,33,35,39,45,51,52,(53),56,58,59,68低危型別有:6,11,(42,43,44)人乳頭瘤病毒與疾病低危型HPV主要引起子宮頸良性乳頭瘤樣變、肛門皮膚和外生殖器疣類病變；高危型HPV主要引起宮頸癌、外陰癌、肛門癌等惡性腫瘤其中HPV16和HPV18是引起宮頸癌的最常見的兩種亞型，HPV16與宮頸鱗癌關(guān)系最為密切，HPV18易導(dǎo)致宮頸腺癌婦產(chǎn)科門診（皮膚科、泌尿外科門診）人乳頭瘤病毒的傳播途徑HPV主要通過直接或間接接觸污染物品或性接觸傳播。1性傳播途徑；2密切接觸；3間接接觸：通過接觸感染者的衣物、生活用品、用具等；4醫(yī)源性感染：醫(yī)務(wù)人員在治療護理時防護不好，造成自身感染或通過醫(yī)務(wù)人員傳給患者；5母嬰傳播：嬰兒通過孕婦產(chǎn)道的密切接觸“幾乎所有宮頸癌患者的病理樣本中均能找到HPV病毒，從而印證了HPV是宮頸癌的主要原因，也使宮頸癌成為目前人類所有癌癥病變中唯一個病因明確的癌癥?！盝anM.Walboomers教授預(yù)防HPV感染就可以預(yù)防宮頸癌，沒有HPV感染就可以不患宮頸癌。中華醫(yī)學(xué)會婦產(chǎn)科分會主任委員北京協(xié)和醫(yī)院婦產(chǎn)科專家郎景和教授宮頸癌的癥狀（1）陰道流血

早期多為接觸性出血；中晚期為不規(guī)則陰道流血。年輕患者也可表現(xiàn)為經(jīng)期延長、經(jīng)量增多；老年患者常為絕經(jīng)后不規(guī)則陰道流血。（2）陰道排液多數(shù)患者有陰道排液，液體為白色或血性，可稀薄如水樣或米泔狀，或有腥臭。晚期患者因癌組織壞死伴感染，可有大量米湯樣或膿性惡臭白帶。（3）晚期癥狀根據(jù)癌灶累及范圍出現(xiàn)不同的繼發(fā)性癥狀。如尿頻、尿急、便秘、下肢腫痛等；癌腫壓迫或累及輸尿管時，可引起輸尿管梗阻、腎盂積水及尿毒癥；晚期可有貧血、惡病質(zhì)等全身衰竭癥狀。HPV感染后，70%的人1年內(nèi)自行清除，90%的人2年內(nèi)自行清除。未清除而持續(xù)感染者發(fā)展成為CIN2/3等癌前病變。癌前病變發(fā)展到宮頸癌需要8—10年的時間。早檢測早發(fā)現(xiàn)HPV病毒感染，及時治療，可阻斷宮頸癌的發(fā)生。ASC-US：無明確診斷意義的鱗狀上皮細胞病變ASC-H：高級別鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL：低度鱗狀上皮內(nèi)病變.HSIL：高度鱗狀上皮內(nèi)病變.）CIN：宮頸鱗狀上皮的癌前病變，分為CIN1，CIN2，CIN3級別通過采集陰道或?qū)m頸分泌物，獲得脫落細胞后浸入液基細胞處理試劑中進行處理，試劑中的裂解成分能對紅細胞進行裂解，去除紅細胞對檢驗結(jié)果造成的干擾；同時試劑中的固定成分能保存固定白細胞、脫落上皮細胞等有價值的細胞；并使包裹在黏液中的有效細胞充分分離出來，防止有價值細胞的丟失。將有效細胞制備成細胞懸液，最后通過過濾離心方法清除黏液對制片的干擾，制成脫落細胞薄片?？捎肏E染色、巴氏染色或其他免疫組織化學(xué)染色等方法使細胞著色，再通過人工觀察分析來檢查陰道或?qū)m頸的細胞形態(tài)，診斷子宮頸癌及其癌的前期變化、人乳頭瘤病毒和單純皰疹病毒感染。同時還能發(fā)現(xiàn)部分癌前病變，微生物感染如霉菌、滴蟲、病毒、衣原體等。薄層液基細胞學(xué)檢測技術(shù)(TCT)TaqMan熒光探針：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。實時熒光定量PCR技術(shù)《宮頸癌篩查指南》---篩查策略篩查對象：三年以上性行為或21歲以上有性行為的婦女起始年齡：經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)：25-30歲經(jīng)濟欠發(fā)達地區(qū)：35-40歲高危人群：起始年齡應(yīng)相應(yīng)提前（高危人群定義為有多個性伴侶、性生活過早、HIV/HPV感染、免疫功能低下、衛(wèi)生條件差、性保健知識缺乏的婦女）終止年齡:65歲以上危險性極低篩查間隔每年一次細胞學(xué)篩查，連續(xù)2次正?？筛闹?年連續(xù)2次HPV和細胞學(xué)正?？裳又?-8年.隨訪對象細胞學(xué)≥低度鱗狀上皮內(nèi)病變(LSIL)、組織學(xué)≥CINⅠ特殊職業(yè)人群、30歲以上高危HPV感染者至少每半年一次《宮頸癌篩查指南》---篩查推薦流程HPV檢查前的注意事項1.檢查前48小時內(nèi)不要做陰道沖洗，不要再陰道內(nèi)用藥物；檢查前不要進行醋酸或碘液涂抹。2.檢查前48小時最好不要進行性生活，月經(jīng)期間不宜進行HPV檢查。如何看待HPV檢測結(jié)果

1.HPV檢