班級整的分子生物學檢驗終

臨床分子生物學檢——11級醫(yī)3分子生物學：是利用分子生物學理論與技術 ★表觀遺傳geneticsDNA（DNAmethylation生物體在DNA甲基轉移酶（DNAmethyltransferase，DNMT）S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosyl臨床分子生物學檢——11級醫(yī)3分子生物學：是利用分子生物學理論與技術 ★表觀遺傳geneticsDNA（DNAmethylation生物體在DNA甲基轉移酶（DNAmethyltransferase，DNMT）S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine，SAM）為甲基供體，將甲★突變：是指DNA序列的改變或重排。從突變的尺度和性質分突變組突變結構的改變突變的突變★組：一個細胞或一種生物體的整套遺傳物質，包和非編碼DNADNA原核生物（prokaryote）是細菌、支原體、衣原體、立克次體、螺旋體、放線菌和藍綠★質粒：細菌下質粒的不兼容性利用同系統(tǒng)的質粒（FColEI）（omptibility串聯(lián)重復序列：人組中10~15序列（重復序列）DNADNAE5~E6bp小DNA：可變數(shù)目串聯(lián)重復，10~100bp*幾十或幾百或幾千=1~5kb的重復序列★循環(huán)核酸：是存在RNA體液中細胞外游離狀態(tài)的核酸，包括游離循環(huán)DNA多態(tài)性DNADNA核酸分子雜交技術探針與核酸分子雜交特異性識別靶DNA或RNA以檢測靶序列的一★變性（denaturation）:在某些理DNADNA（renaturation：螺旋結構的現(xiàn)象，它是變性的一種逆轉過程。temperaturem50%DNA★分子雜交（molecularhybridization）:★核酸探針（nucleicacidprobe)：是特定核苷酸序列（單鏈，被標記）與靶序列發(fā)生特cDNA針mRNADNARNAFISH引物：是★實時定量★核酸探針（nucleicacidprobe)：是特定核苷酸序列（單鏈，被標記）與靶序列發(fā)生特cDNA針mRNADNARNAFISH引物：是★實時定量PCR：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR★聚合酶鏈反應（polymerasechainR）（意位置上，一般熒光域值的設置是基線（背景）熒光信號的標準偏差的10倍。Ct值：PCR擴增過程中，擴增產(chǎn)物的熒光信號達到設定的閾值時所經(jīng)過的擴增循環(huán)次數(shù)★熒光定量PCR（FQ-PCR）基于熒光能量傳遞技術（FluorescenceresonanceenergytransferFRET）,通過受體發(fā)色團之間偶極-偶極相互作用,能量從供體發(fā)色團轉移到受體發(fā)色團,效率與兩個發(fā)色團之間距離的6DNAPCR★生技術是指通過微加工和微電子技術在固相基質表面集成了成千上萬密集排列檢測的技術★蛋白質組學（proteomics：以蛋白質組★雙向凝膠電泳（two-DE：SDS聚丙烯凝膠電泳（SDS）組成的分離系統(tǒng)。IEF是基于蛋白質等電點（pI）的差異進行分離，SDS則是根據(jù)蛋白質分子量（Mw）的不同進行分離。生物信息學（bioinformatics）:包含生物信息的獲取、處理、貯存、分發(fā)、分析和一級數(shù)數(shù)據(jù)都直接來源于實驗獲得的二級數(shù)據(jù)庫：由核酸和蛋白質一級結構數(shù)據(jù)庫、生物大分子三位空間結構數(shù)據(jù)庫ORF：（TG3（GAAGAA間策略基于遺傳標記與致。mtDNA★異質性變異mtDNA發(fā)生了某一變異，異質性變異的程度往往★動態(tài)突變(Dynamic):不穩(wěn)定三核苷酸重復序列其突變是由 組中脫氧三核苷酸串無創(chuàng)產(chǎn) ?！锼幗M學指以藥物效應和安全性為目標藥代和藥效差異 特性以PGD：胚胎間策略基于遺傳標記與致。mtDNA★異質性變異mtDNA發(fā)生了某一變異，異質性變異的程度往往★動態(tài)突變(Dynamic):不穩(wěn)定三核苷酸重復序列其突變是由 組中脫氧三核苷酸串無創(chuàng)產(chǎn) ?！锼幗M學指以藥物效應和安全性為目標藥代和藥效差異 特性以PGD：胚胎與導斷某些 遺傳病★原核生組特組較真核小4.6E6bp ：RNA和支架蛋白 ：雙鏈閉環(huán)超螺旋。原核生物的mRNA ：無內含子 。 DNA★組特 組中非編碼序列少編碼>90%(組 之間無間隔區(qū).mRNA5’端無帽子結構.★人組的特PCR：使用兩對引物，一對引物序列在模板的外側，用于擴增含目的的大片段，另一對引物序列在模板內側，用于擴增目的PCRPCRPCR★YMDD突變：YMDD代表四個氨基酸殘基，即酪氨酸-蛋氨酸-天門冬氨酸-天門冬氨酸，其中★完整性檢出策略夠出帶菌者和潛在染者，并能對進行拷貝數(shù)測定、分型檢測及亞型和耐藥 +97%DNA(轉座因子和大量不屬于已知分類序列 串聯(lián)重復序列|組中10~15%序列（重復序列DNA首尾相連多次重復，長度可達到E5~E6bp，為高度重復序列，又稱微 +97%DNA(轉座因子和大量不屬于已知分類序列 串聯(lián)重復序列|組中10~15%序列（重復序列DNA首尾相連多次重復，長度可達到E5~E6bp，為高度重復序列，又稱微 element，SINE）LTRpolyApolyA 第二種為LTR反轉錄轉座子（LTR- ons），也稱為反轉樣元件-like DNA轉座子（DNA Tm的影：DNApH核酸探針的種DNA方法 聚合酶鏈反應 特點克隆在載體中的RNA而言，DNA探針不易降解，表 RNA酶的影響， RNARNA探針與靶序列的雜交效率較高，RNA分子大多以單鏈形式存在，RNA分子中不存在高度重復序列，非特異性雜交少，雜交后未雜交的探針分子可用RNA酶水解去除，本底的干擾低。RNA探針有易降解和標記方法復雜等缺點， 特點探針長度較短（一般為 由于探針的長度較短，特異性較低，，但經(jīng)過精心設計仍可★核酸分子雜交技術類DNA特點探針長度較短（一般為 由于探針的長度較短，特異性較低，，但經(jīng)過精心設計仍可★核酸分子雜交技術類DNARNASouthernDNANorthernRNADNARNADNA變性→中和→Southern、Northern印跡雜交Southern印跡雜交比較RNARNASouthernRNARNA2’-RNA分子形成發(fā)夾式的二級結構，以保持其單鏈線形★PCR術原 的過程，在DNA模板、引物、四種dNTP存在下，DNA聚合酶的聚合反應，由變性、退火、延伸三個步驟組成。每一個循環(huán)完成后DNA成為兩個分子。由于每個循環(huán)所生成的 段即為下一個★Southern印跡雜交原理及應是膜上檢測DNA的雜交技術，是進行 瓊脂凝膠電泳分離經(jīng)限制性內切酶消化的DN 段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈 構的標記探針進行雜交，用放射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定DNA分子的含量。主 環(huán)的模板，反應產(chǎn)物移植術形式增長。N=期前特異性好。30個循環(huán)最多擴增條1.PCR變性溫度：95℃~97DNATmTm5PCR擴增特異環(huán)的模板，反應產(chǎn)物移植術形式增長。N=期前特異性好。30個循環(huán)最多擴增條1.PCR變性溫度：95℃~97DNATmTm5PCR擴增特異72TaqDNA2.PCR30725min3.PCR產(chǎn)物的保存與檢測：PCR4℃保存，PCRPCR技術PCR（PCRDNARNA★三大核酸數(shù)據(jù) ： EMBL(Europeanmolecularbiologicallaboratory) EBI（歐洲分子生物學SRS，提交通過WEBIN或sequin） （theNationalInstituteofGenetics，NIG）年建立也是一個全面的核酸序列數(shù)據(jù)庫與GenB 和EMBL數(shù)據(jù)庫合作檢索通過SRS，提交通過sequin。蛋白質數(shù)據(jù)★請分析PCR擴增體系 （個人意見，另一份有詳細的 自80~90℃的水棲嗜熱菌中提取的耐熱酶。④dNTP：包括dATP、dTTP、dGTP、dCTP。dNTP會絡合Mg離子，當PCR需要較高濃度的dNTP時，應在反應體系中適當增加Mg離子濃度。 最大的蛋白質數(shù)據(jù)庫是UniProt：整合了SWISS-PROT 和TrEMBL和PIR-PSD（蛋白質信息資源庫-公共蛋白質序列數(shù)據(jù)庫）SWISS-PROT：人工審閱嚴格，每個條目包含條基本信息、分類信息（描述蛋白質的生物來源）冗余度低。包括蛋白質的功能、翻譯后修飾、結構域和結合位點、二級結構、四級結構、 最大的蛋白質數(shù)據(jù)庫是UniProt：整合了SWISS-PROT 和TrEMBL和PIR-PSD（蛋白質信息資源庫-公共蛋白質序列數(shù)據(jù)庫）SWISS-PROT：人工審閱嚴格，每個條目包含條基本信息、分類信息（描述蛋白質的生物來源）冗余度低。包括蛋白質的功能、翻譯后修飾、結構域和結合位點、二級結構、四級結構、 TrEMBLEMBL庫中的核酸序列翻譯出的氨基酸序列；PIR -PSD蛋白質信息資源－國際蛋白質序列數(shù)據(jù)庫Information ernationalProteinR-PSD)（MedlinePDBTIGR等PIR-PSD的另一個重要特征是其對蛋白質超 PDB的策技術：PCR+PCR 存在與否做出明確販毒★HBV分子生物學檢驗、PCRPCRDNA技術（DNA（bDNA）的帶有許多側鏈的HBVDNAFQ-PCR患HBVHBVDNA★HBVYMDD耐藥性突變檢法 PCRTM的分型檢測方法（可選一兩個具體描述HIV檢測的分子生物學檢HIV抗體檢測（p24）初篩試驗：酶聯(lián)免疫吸附試驗試紙（金標試紙，雙抗原夾心法6確認試驗：免疫印跡（WesternblotHIVRNA結核分枝桿TB分子生物學檢驗方1.HIV檢測的分子生物學檢HIV抗體檢測（p24）初篩試驗：酶聯(lián)免疫吸附試驗試紙（金標試紙，雙抗原夾心法6確認試驗：免疫印跡（WesternblotHIVRNA結核分枝桿TB分子生物學檢驗方1.TBDNAPCR擴增所選靶序列65kD、MPB、、 DNA★2.TB耐藥 β基）或缺失。RNA 對異煙肼：過氧化氫酶Kat rrs 因（16srRNA）拓撲異構酶（少見）gyrA和編碼DNA回旋酶 TB： 補：分 不外乎 雜 CFP10（ ESAT6(6kD性抗原靶 方法：時間分辨熒光免疫分析時間延遲 Tｒ★病例分析（12分問答題模板，可能會換個疾病也可能不換解答重點1.①根據(jù)病情分析可能是發(fā)生了耐藥②青霉素結合蛋白(PBPs)重要的外膜青霉素主要PBPs作用PBPs。主要有penA、，在較長時間使用青霉治療可能使得這發(fā)1.①根據(jù)病情分析可能是發(fā)生了耐藥②青霉素結合蛋白(PBPs)重要的外膜青霉素主要PBPs作用PBPs。主要有penA、，在較長時間使用青霉治療可能使得這發(fā)生突變，從而導PBPs結構的改變 奈瑟菌耐藥檢測的分子生物學技術：詳細描述1檢查為×××，疑為結核分枝桿解答重點方法列舉：PCR、real-timePCR、PCR-RFLP、線性探針雜交real-timePCR等1.提取該患者外周抗凝血中的2.庫中獲取結核分枝桿菌16S 的序列，利用軟件設計一QRreal-timePCR擴增6S 上的特異片線粒組的特點：因組小,16569bpDNA組與耳mtDNA的A1555GmtDNAPCR-RFLPDHPLC RFLPDHPLC★線粒DNA突變A3243G析，充分確認了該位點的存在。為異質性突變不同人突變比例不同 方法：PCR技術、DHPLC技術、PCR-RFLP技術、分怎么檢測線DNA異質性edNext-generationPyrosequencingTM倒位(Inver 或缺失(Indels)缺失或重復(Deletion/Duplication 的突變，直接揭示導致遺傳病發(fā)生的各種遺傳缺陷 融直策略（接檢出致對（AA對（ASO特異性RFLP、PCR-ELISA、DHPLCSSCPPyrosequencingTM倒位(Inver 或缺失(Indels)缺失或重復(Deletion/Duplication 的突變，直接揭示導致遺傳病發(fā)生的各種遺傳缺陷 融直策略（接檢出致對（AA對（ASO特異性RFLP、PCR-ELISA、DHPLCSSCP SouthernblotPCR★⑵動態(tài)突變：outhernblot、Β珠蛋白生 性貧血及Ββ11 （掌握其中一個技術的原理 （反向點雜交）βα地中海貧血PCRsouthern印跡技術：BRCA的檢測-分子影像學：-HER2表達-胚胎植入前的分子生物學檢驗PCR技術（PCR（熟悉原理及應用。往屆考的名解和簡答范圍名解和簡答是關于老上課講的，講的少或沒講的沒有整理，有時間自己可以熟悉下05年級分子生物學檢驗PCR、2-DEYMDD因的獲取方式、質粒載體的特點、PCR06年級分子生物學檢驗名解：T-載體、分子雜交(